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传代培养人胚胎生殖干细胞的生物学鉴定被引量：1: 2006年; 目的：通过对传代培养至第5代细胞分子标记物的表达分析,鉴定传代培养的细胞为人胚胎生殖干细胞(embrgonic germ stem cells,EGCs)。方法：取5～10周人胚胎的生殖腺嵴和肠背系膜,进行组织块体外培养人EGCs,挑选传代培养至第5代生长良好的细胞,采用免疫细胞化学法分别检测SSEA-1、SSEA-3、Oct-4、hTERT的表达。结果：组织块体外培养得到的细胞,经免疫细胞化学法显示的单个细胞或细胞集落,均阳性表达SSEA- 1、SSEA-3、Oct-4、hTERT。结论：组织块体外传代培养第5代所获得的细胞,为未分化的人EGCs。; 陈永珍张苏朱旻陈谦; 关键词：OCT-4 人端粒酶逆转录酶

人胚胎生殖细胞的传代培养被引量：6: 2007年; 目的探求人胚胎生殖细胞最适宜的传代时间及最佳的传代方法。方法取8周人胚胎的生殖腺嵴和肠背系膜,进行组织块体外培养人胚胎生殖细胞,选择原代培养第8天和第16天的细胞,采用挑取传代法和消化传代法,其中的消化传代法采用三种不同的消化液进行传代培养,记录各代培养的细胞集落数。结果在原代培养第8天时,挑取传代法传2代后获得的细胞集落数减少;消化传代法传4代后获得的细胞集落数明显增多。原代培养第16天时未能传代培养,但却看到人胚胎生殖细胞集落的分化。结论人胚胎生殖细胞传代培养最适宜的传代时间为原代培养第8天,最佳的传代方法为消化传代法。; 陈永珍张苏朱旻陈谦; 关键词：胚胎生殖细胞传代培养

转录因子Oct-4和端粒酶在人胚胎生殖细胞的表达被引量：1: 2008年; 目的体外培养人胚胎生殖细胞（EGC），通过检测培养的细胞中转录因子Oct-4、端粒酶的表达，鉴定EGC。方法取5～10周人胚胎的生殖腺嵴和肠背系膜，进行组织块体外培养，采用免疫细胞化学检测Oct-4、端粒酶表达。结果组织块体外培养得到的细胞，经免疫细胞化学法显示的单个细胞或细胞集落，均阳性表达转录因子Oct-4、端粒酶。结论组织块体外培养所获得细胞来源于原始生殖细胞（PGCs），为未分化的EGC。; 张苏陈永珍朱旻陈谦; 关键词：胚胎生殖细胞端粒酶

SSEA-1、Oct-4在人胚胎生殖细胞的表达被引量：3: 2006年; 目的体外培养人胚胎生殖细胞（EG细胞）,通过检测培养的细胞中SSEA-1、Oct-4的表达,鉴定人胚胎生殖细胞.方法取5～9周人胚胎的生殖腺嵴和肠背系膜,进行组织块体外培养,采用流式细胞术及免疫细胞化学检测培养细胞的SSEA-1、Oct-4表达;取5～9周人胚胎的生殖腺嵴,制备石蜡切片,利用免疫组织化学方法,检测原始生殖细胞的SSEA-1表达.结果组织块体外培养得到的细胞,经免疫细胞化学及流式细胞仪显示的单个细胞或细胞集落,均阳性表达SSEA-1、Oct-4.石蜡切片免疫组织化学显示,人胚胎生殖腺嵴中有许多SSEA-1阳性表达的原始生殖细胞.结论组织块体外培养所获得细胞来源于原始生殖细胞,为未分化的人胚胎生殖细胞.; 陈永珍陈谦李芳朱旻张苏; 关键词：原始生殖细胞胚胎生殖细胞 OCT-4 流式细胞术

人胚胎生殖干细胞的分离和体外培养被引量：12: 2005年; 目的:体外培养人胚胎生殖干细胞(EG),在不添加细胞因子的培养条件下,观察细胞生长情况。方法:取5～10周人胚胎的生殖腺嵴和肠背系膜,进行组织块培养,采用组织化学及免疫细胞化学技术对培养的细胞进行鉴定。结果:培养4d后,在成纤维细胞的上面出现EG细胞集落;培养2周后,显示细胞呈圆形,胞质染成深蓝色;细胞染色体均为正常的二倍体核型;碱性磷酸酶活性强阳性;并检测到SSEA-1。结论:体外培养人胚胎生殖腺嵴,利用源于自身胚胎组织的成纤维细胞作为饲养层,可观察到EG细胞集落的形成;培养的细胞初步鉴定为人胚胎干细胞。; 陈永珍朱旻张苏李芳; 关键词：生殖干细胞体外培养免疫细胞化学技术细胞集落组织块培养强阳性

人胚胎成纤维细胞对人胚胎生殖细胞生长的作用被引量：9: 2005年; 目的:研究人胚胎成纤维细胞对人胚胎生殖细胞(EG细胞)生长的作用。方法:采用组织块体外培养法体外培养人EG细胞,不添加任何细胞因子,利用源于胚胎组织自身的成纤维细胞作为饲养层,收集培养3 d和9 d的上清液,用抗体夹心ABC- ELISA法定量检测其白血病抑制因子(LIF)、干细胞生长因子(SCF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的含量。培养的细胞用免疫细胞化学法进行SSEA-3、OCT-4的检测。结果:培养9 d的上清液中3种因子均含量为LIF 55．25 pg／ml、SCF90．39 pg／ml、 bFGF 26．06 pg／ml,均高于培养3 d相应的平均含量。培养的细胞SSEA-3、OCT-4呈强阳性表达。结论:上清液中LIF、SCF和bF- GF的含量与胚胎成纤维细胞的生长呈正比,胚胎成纤维细胞能分泌这些细胞因子,以维持EG细胞体外增殖并抑制其分化。; 陈永珍李芳陈谦余水长朱旻张苏; 关键词：生殖细胞成纤维细胞胚胎细胞生长

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江苏省高校自然科学研究项目(Q2134042)