国家科技重大专项(2008ZX08005-003)
- 作品数：6 被引量：35H指数：3
- 相关作者：王坤波彭仁海刘方黎绍惠王玉红更多>>
- 相关机构：中国农业科学院棉花研究所安阳工学院中国农业科学院生物技术研究所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 中棉(Gossypium arboreum)光诱导基因Gacab启动子在转基因烟草中的功能缺失分析被引量：18
- 2009年
- 分离了金华中棉(Gossypiun arboreum var.jinhua)光诱导基因cab 5′上游的调控序列1 009 bp,并对其功能进行了分析,证明获得的这一DNA片段具有驱动光诱导表达的功能。为了进一步分离具有最大转录活性的最小光诱导启动子,根据光诱导表达调控元件所在的位置,构建了Gacab P和197 bp、504 bp、779 bp的5′端缺失体,并将这些缺失体分别与gus(uid A)基因融合,构建植物表达载体。用农杆菌介导法转化烟草,获得转基因烟草。GUS组织化学分析表明,转基因烟草的T1代种子在光下培养时,只有Gacab P驱动gus基因在转基因烟草的叶片表达,其他3个启动子驱动gus基因在转基因烟草的整个植株中均有表达;当转基因烟草的T1代种子在暗中萌发及培养时,GacabP驱动gus基因在转基因烟草中无表达,其他3个启动子驱动gus基因在转基因烟草的整个植株中均有表达。GUS定量分析表明,-504～-1 bp的启动子缺失体启动活性最高,比CaMV35S启动子高0.6倍。上述结果表明只有全长的Gacab启动子具有光诱导和绿色组织特异表达特性,且?504～?1 bp的启动子缺失体启动活性最高。
- 王旭静李为民唐巧玲贾士荣王志兴
- 关键词：转基因烟草
- 适用于棉花荧光原位杂交的DNA纤维高效制备技术被引量：6
- 2009年
- 棉花富含酚类和多糖等高分子次生化合物,细胞质浓厚,且染色体形态小、数目多、制片困难,至今还未见棉花DNA纤维制备方面的报道。本研究用"刀切引流法",在含有Triton X-100和PVP40的冰冷细胞核提取缓冲液中,用锋利的刀片切割发育一周的棉花黄化子叶以释放棉花细胞核,所得细胞核干净完整杂质少,不需要研磨和巯基乙醇等处理,方便快捷无毒害,成功率达到100%。细胞核在室温下经温和碱裂解去除染色质上的蛋白质后,以前端导引裂解液铺展载玻片,即"引流法"拉伸制备DNA纤维,避免了液体表面张力的影响,消除了因载玻片推抹用力不均而导致的DNA纤维堆积和断裂,所制备的DNA纤维平直完整、伸展程度均匀、背景清晰。用基因组和45S rDNA分别标记探针进行杂交,结果表明所制备的棉花DNA纤维适用于荧光原位杂交。本研究探索出一套简单、高效、快捷、无毒害的适宜于棉花荧光原位杂交的DNA纤维制备技术,必将为棉花基因组研究和全基因组序列的最终完成提供强有力的技术支持。
- 彭仁海宋国立刘方黎绍惠王春英张香娣王玉红王坤波
- 关键词：棉花荧光原位杂交DNA纤维
- 亚洲棉7号染色体分离及文库构建被引量：3
- 2012年
- 采用前低渗、酶解、后低渗和盖片轻压相结合的方法，建立了激光法分离二倍体亚洲棉石系亚1号单条染色体技术。单染色体经去蛋白、酶切和PCR扩增后，产物以Southern杂交、简单重复序列（Simplesequencerepeats，SSR）引物扩增和荧光原位杂交技术（Fluorescenceinsituhybridization，FISH）进行验证，构建了棉花单条染色体文库。克隆片段长度在150～1000bp，平均为550bp；文库包含1．38x10s个克隆，覆盖染色体长度1倍左右，空载率为1％，滴度为1．3×10^6 pfu·mL-1，单一拷贝和低拷贝比例达到59％以上，为该条染色体分子标记_的筛选、重要基因克隆和定位、遗传图谱的饱和奠定基础.
- 彭仁海刘玉玲刘方王春英黎绍惠张香娣王玉红王坤波
- 关键词：亚洲棉显微切割微克隆
- 江苏近年育成棉花品种品质和抗病性现状被引量：3
- 2009年
- 王为潘宗瑾王坤波
- 关键词：棉花品种抗病性植棉面积育成价格因素
- 中棉所70生育特性及适宜种植方式分析被引量：2
- 2012年
- 在大田条件下,设计了品种生育特性和不同种植方式的生育特性研究2个试验。结果表明,中棉所70果节和成铃形成高峰早、峰值高;成铃率高,但后期果节形成和成铃量较低,群体果节量偏低,易早衰。不同种植方式的生育特性研究表明,春棉地膜直播处理由于早发、现蕾、成铃集中的特点更加突出,后期易早衰,因而不宜应用;春棉地膜双秆处理能充分发挥品种现蕾、成铃集中的特性,且避免了地膜直播处理早衰的不足,形成较高的群体总量,具有较好的早熟性和丰产性;麦后移栽棉在适当提高密度的前提下,其群体结构和产量可以达到一熟春棉的水平,尤其是麦后基质育苗移栽方式具有结铃优势强的特点,实行大麦后基质移栽具有产量形成的优势。
- 杨长琴张培通袁有禄刘瑞显龚举武商海红李俊文石玉真
- 关键词：生育特性
- 一种高效提取棉花细胞核的技术被引量：3
- 2009年
- [目的]研究一种高效提取棉花细胞核的技术,为棉花大片段基因组文库的构建和全基因组测序提供技术支持。[方法]采用"刀切法",在含有Triton X-100和PVP40的冰冷细胞核提取缓冲液中,用锋利刀片切割发育1周的棉花黄化子叶以释放细胞核,并经过100、50、和30μm的膜过滤后离心收集细胞核,同时选取棉花幼嫩叶片和黄化处理时间不同的子叶分别用研磨法和刀切法作对照。[结果]刀切法所得细胞核干净完整杂质少,不需要研磨和巯基乙醇等处理,方便快捷无毒害,成功率达100%。[结论]建立了一种简单、高效、快捷、无毒害的棉花细胞核提取技术。
- 彭仁海刘方宋国立王春英黎绍惠张香娣王玉红王坤波
- 关键词：棉花细胞核
