北京市自然科学基金(7132145)
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
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- 人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白的表达及生物活性分析
- 2014年
- 目的构建携带人肿瘤坏死因子受体(TNFR)胞外区融合人IgG Fc片段的重组腺相关病毒载体(pAAV/hTNFR-Fc),并对融合蛋白hTNFR-Fc的表达和生物学活性进行鉴定。方法构建hTNFR-Fc融合基因重组腺相关病毒(AAV)载体,体外转染人胚肾HEK293T细胞,收集转染上清,以Western blot法检测目的蛋白的表达,应用L929细胞测定重组表达产物对人和大鼠TNF-α细胞毒中和活性,采用ELISA比较重组表达产物对人和大鼠TNF-α的结合活性。结果成功构建重组表达载体pAAV/hTNFR-Fc,在转染细胞上清中检测到目的蛋白hTNFR-Fc的表达,重组表达产物可有效结合人TNF-α并中和其L929细胞毒活性,并对大鼠TNF-α具有一定程度的结合和中和活性。结论成功构建了hTNFR-Fc融合基因,验证了其在AAV载体上的分泌性表达,并对其生物活性进行了鉴定,为进一步病毒包装和大鼠关节炎动物实验研究奠定了基础。
- 杜芝燕王芳朱静潆于继云王宇朱晓明张巍
- 关键词：重组腺相关病毒载体活性
- 大鼠TNFR-Fc重组腺相关病毒载体的构建、表达及中和活性鉴定
- 2013年
- 目的构建携带大鼠肿瘤坏死因子II型受体胞外区(TNFR)融合大鼠IgG Fc片段的重组2型腺相关病毒载体(pAAV2/TNFR-Fc),并对目的蛋白TNFR-Fc的表达和生物学活性进行初步鉴定,为后续的类风湿关节炎基因治疗研究做准备。方法构建大鼠TNFR-Fc融合基因重组腺相关病毒(AAV)载体,体外转染293T细胞,收集转染上清,以ELISA和Western blot等方法检测目的蛋白的表达,并应用L929细胞测定重组表达产物的TNF-α细胞毒中和活性。结果成功构建重组表达载体pAAV2/TNFR-Fc,在转染细胞上清中检测到目的蛋白TNFR-Fc的表达,其可有效中和大鼠TNF-α的L929细胞毒活性。结论成功构建了大鼠TNFR-Fc融合基因,并验证了其在2型AAV载体上的分泌性表达,为进一步病毒包装及动物实验奠定了基础。
- 王芳杜芝燕王琳姜云波于继云阎瑾琦徐元基张巍
- 关键词：重组腺相关病毒载体中和活性
- 共表达2个独立的抗关节炎分子TNFR-Fc和CTLA4-FasL重组表达系统的建立与鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的构建能同时独立表达双抗关节炎分子TNFR-Fc和CTLA4-FasL的重组腺相关病毒(AAV)载体,并对蛋白表达进行鉴定。方法应用furin-2A新型剪切策略,构建TNFR-Fc和CTLA4-FasL双融合基因重组AAV载体,体外转染293T细胞,收集转染上清,以ELISA和Western blot等方法检测目的蛋白的表达。结果成功构建双抗炎分子重组表达载体TFCF,在转染细胞上清中检测到目的蛋白TNFR-Fc和CTLA4-FasL的独立共表达。结论获得了可同时拮抗TNF和T细胞的新型双抗关节炎分子共表达系统,为今后动物体内研究奠定了基础。
- 王芳杜芝燕于继云朱静潆张巍
