国家自然科学基金(81072323H2607)
- 作品数：5 被引量：6H指数：2
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- 甲醛对人Ⅱ型肺泡上皮细胞DNA氧化和甲基化水平的影响被引量：4
- 2014年
- 目的：分析甲醛染毒对体外培养的人Ⅱ型肺泡上皮细胞（A549）内8-羟基鸟嘌呤脱氧核苷（8-oxo-dG）水平、DNA 5-甲基胞嘧啶（5-mC）含量的影响及其时间-效应和剂量-效应关系，探讨甲醛所致的细胞DNA氧化与DNA甲基化的关联性。方法：用5～20μmol/L甲醛作用于A549细胞，用高压液相色谱串联电化学检测技术分析细胞DNA 8-oxo-dG水平，用免疫荧光和高效毛细管电泳法检测细胞全基因组DNA 5-mC含量改变。结果：甲醛染毒提高了细胞8-oxo-dG水平，但是降低了细胞的DNA 5-mC含量。甲醛致细胞DNA氧化与DNA甲基化呈现不同特点，A549细胞暴露于20μmol/L甲醛后，DNA氧化水平在1周甚至更早时间就已显著增高，而相同条件下DNA甲基化水平的改变需要6周以上的时间，DNA甲基化的改变滞后于DNA氧化。A549细胞经5～20μmol/L甲醛染毒8周后，DNA氧化水平与甲醛剂量呈正相关关系，而同样条件下DNA甲基化水平与甲醛剂量呈负相关关系。结论：甲醛染毒可提高DNA氧化水平，降低细胞DNA甲基化水平。在甲醛的毒作用效应中，细胞DNA氧化损伤可能是早于其DNA甲基化的一个重要分子事件。
- 柯跃斌黄娟朱舟吴双陶功华
- 关键词：甲醛DNA甲基化
- 纳米氧化石墨烯诱导人类支气管上皮细胞DNA氧化与甲基化的实验研究
- 2019年
- 目的:通过分析体外培养的人类支气管上皮细胞(16HBE)在纳米氧化石墨烯(NGO)染毒后细胞DNA中8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷(8-OHdG)和5-甲基胞嘧啶(5-mC)比例的变化规律,探讨DNA氧化与DNA甲基化的关联性。方法:分别以1.25、2.5、5、10μg/mL的NGO溶液染毒16HBE细胞24 h,采用高效液相色谱串联电化学检测技术分析细胞DNA中8-OHdG比例,高效毛细管电泳(HPCE)法检测细胞全基因组DNA甲基化水平。结果:在2.5、5、10μg/mL的NGO溶液染毒后,细胞DNA中8-OHdG比例显著高于对照组(P<0.05或P<0.01),以10μg/mL浓度时为最高。NGO可引起16HBE细胞甲基化程度降低,与对照组细胞相比,2.5、5和10μg/mL NGO组分别降低37.1%、49.7%和46.3%,与对照组间的差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。DNA氧化水平与DNA甲基化水平间呈负相关(r=-0.69,P<0.01)。结论:本研究提示,在体外NGO可导致人支气管上皮细胞16HBE的DNA氧化水平升高,D NA甲基化水平降低,我们推测细胞DNA氧化程度可能影响DNA甲基化过程。
- 彭长凤谢杏柯跃斌
- 关键词：8-羟基脱氧鸟苷DNA甲基化去甲基化
- 利用基因缺陷细胞模型探讨hOGG1和hMTH1的替补作用被引量：1
- 2014年
- 目的 通过建立基因缺陷细胞模型,探讨修复基因hOGG1与hMTH1在DNA氧化性损伤中的作用与关系.方法 利用慢病毒感染人胚肺成纤维细胞（HFL）,分别建立hOGG1基因和hMTH1基因缺陷细胞模型.将HFL细胞在100 μmol/L的H2O2中孵育12h,分别利用高压液相色谱串联电化学检测技术及RT-PCR技术分析8-羟基-脱氧鸟嘌呤（7,8-dihydro-8-oxoguanine,8-oxo-dG）水平及hOGG1和hMTH1基因表达水平.结果 用高滴度慢病毒感染靶细胞后得到hOGG1基因和hMTH1基因缺陷细胞模型,hOGG1 mRNA表达水平（0.09±0.02）比正常HFL细胞（1.00±0.04）下降了91％,hMTH1 mRNA表达水平（0.41±0.04）比正常HFL细胞（1.02±0.06）下降了60％；用100 μmol/L的H2O2诱导12 h,hOGG1基因缺陷细胞的hMTH1基因表达水平（1.26±0.18）相比对照组（1.01±0.07）提高了25％,hMTH1基因缺陷细胞的hOGG1基因表达水平（1.54±0.25）提高了52％；hOGG1基因缺陷细胞的8-oxo-dG水平（2.48±0.54）是对照组（0.80±0.16）的3.1倍,差异有统计学意义（P＜0.01）,hMTH1基因缺陷细胞（1.84±0.46）的8-oxo-dG水平是对照组（0.80±0.16）的2.3倍,差异均有统计学意义（P＜0.01）.结论 利用基因缺陷细胞模型,发现在氧化诱导作用下,修复基因hOGG1与hMTH1在DNA损伤修复活动中可能分别表现出一定的协同性替补作用,hOGG1的替补作用强于hMTH1.
- 柯跃斌吴双黄娟袁建辉邓平建程锦泉
- 关键词：RNA干扰基因缺陷修复基因生物标志
- 三聚氰胺暴露导致婴幼儿尿石症与DNA氧化损伤的关联被引量：2
- 2014年
- 目的评价婴幼儿尿石症及DNA氧化损伤是否与三聚氰胺污染的婴幼儿配方奶粉（MCPF）喂养与有关。方法根据不同喂养方式将婴幼儿分为四组：（1）MCPF摄入量超过90%的婴幼儿组,（2）MCPF摄入量介于50%-90%之间的婴幼儿组（3）MCPF摄入量〈50%的婴幼儿组,（4）摄入奶粉90%以上为不含三聚氰胺的进口配方奶的婴幼儿组。组1-组3为观察组,组4为对照组。并采用＂病例-对照＂方法评价各组婴幼儿患尿石症的情况及尿中8-羟基脱氧尿苷（8-OHdG）的水平。结果 MCPF的摄入量与尿石症显著相关。四组尿液样本每摩尔肌酐中8-OHdG含量的平均值分别为：（2.03±0.52）μmol、（1.67±0.28）μmol、（1.90±0.39）μmol、（1.85±0.47）μmol。结论实验数据显示三聚氰胺可导致尿石症,但未造成婴幼儿DNA氧化损伤水平的显著上升。
- 吴双柯跃斌邱宝明徐新云段小贝
- 关键词：三聚氰胺配方奶粉尿石症DNA氧化损伤8-OHDG
- 基因组DNA氧化水平对甲基化的影响
- 2014年
- 目的分析体外培养细胞在H20：染毒后8-oxo-dG的形成、细胞DNA5-mE含量的变化规律，探讨其时间一剂量一效应关系和DNA氧化与DNA甲基化的关联性。方法利用0、20、40、60、80和100μmol／LH202作用于人肺泡Ⅱ型上皮细胞（A549），每天染毒1次，每次2h，共持续4d，继续培养8d。应用高压液相色谱串联电化学检测技术分析细胞DNA8-oxo—dG水平、高效毛细管电泳（high－performance capillary electrophoresis，HPCE）法检测细胞全基因组DNA5-mE的含量。结果DNA甲基化与DNA氧化呈现不同特点，A549细胞染毒80μmol／LH2O2后DNA甲基化水平的改变需要10d以上的时间，而相同条件下DNA氧化水平的改变仅需12h，DNA甲基化的改变滞后于DNA氧化。H2O2可引起A549细胞甲基化程度降低，呈剂量依赖性关系。在一定的时间剂量范围内，DNA氧化与DNA甲基化作用间呈负相关关系（r=-0．72，P〈0．01）。结论DNA氧化能导致细胞DNA甲基化水平降低，DNA氧化可能是影响细胞甲基化的调控机制之一，在化学物质的毒作用效应中，DNA氧化可能是比DNA甲基化更早的一个重要分子事件。
- 柯跃斌徐新云梅树江谢杏陶功华
- 关键词：DNA甲基化DNA修复
