国家自然科学基金(81072568)
- 作品数：4 被引量：4H指数：2
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- 镇痛抗肿瘤缬精甘肽BmK AGAP的两对二硫键C16-C36和C22-C46对镇痛活性的影响被引量：2
- 2013年
- 目的研究二硫键C16-C36和C22-C46对镇痛抗肿瘤缬精甘肽BmK AGAP镇痛活性的影响。方法使用本实验室已构建成功的2个二硫键双突变体(C16S,C36S)和(C22S,C46S),在大肠杆菌中诱导表达,通过金属离子螯合亲和层析和阳离子交换层析方法对突变体蛋白分离纯化,采用小鼠醋酸扭体法测定2个突变体的镇痛活性,圆二色谱分析BmK AGAP和2个二硫键突变体的二级结构变化差异,利用生物信息学的方法模建BmK AGAP的三维空间结构。结果 a.目的蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中实现了可溶性表达;b.采用金属离子螯合亲和层析和阳离子交换层析方法获得了电泳纯样品;c.2个双突变体(C16S,C36S)和(C22S,C46S)的镇痛活性与阳性对照组rBmKAGAP比较均下调,具有显著性差异。结论二硫键C16-C36和C22-C46在保持和调节BmK AGAP的镇痛生物活性方面具有重要作用。
- 崔勇郭桂丽马瑞宝月梅刘岩峰张景海
- 关键词：BMK镇痛活性
- 两种具有双功能活性蝎毒蛋白融合体的构建被引量：1
- 2013年
- 目的首次报道利用东亚钳蝎镇痛抗肿瘤缬精甘肽-BmKAGAP产生两种不同的融合蛋白,目的是获得镇痛和抗肿瘤的双功能活性。方法融合蛋白是以嵌合毒素的形式进行构建,由三部分组成,包括促性腺激素释放激素(luteinizing hormone-releasing hormoneL,HRH),两种不同类型的柔性连接物,以及BmKAGAP。克隆编码两种融合蛋白的基因并在大肠杆菌中实现可溶性表达。通过金属离子螯合亲和层析和阳离子交换层析方法对融合蛋白分离纯化,采用小鼠醋酸扭体法和MTT法测定融合蛋白的镇痛活性与细胞抑制活性。结果融合蛋白在小鼠模型中体现出镇痛活性(rLHRH-Tag(His)AGAP>rTag(His)-LHRH-L8-AGAP>rBmKAGAP),同时对肝癌细胞株Hep3B具有细胞毒活性(rLHRH-Tag(His)-AGAP>rBmKAGAP>rTag(His)-LHRH-L8-AGAP)。结论得到优化的双功能融合蛋白候选者为嵌合毒素rLHRH-Tag(His)-AGAP。
- 崔勇郭桂丽毛英姿刘岩峰张景海
- 关键词：BMK双功能融合蛋白
- 镇痛活性肽VRD突变体(S54A)的构建与表达以及对活性的影响被引量：2
- 2012年
- 目的研究54位丝氨酸对镇痛活性肽(analgesic peptide,AGP)VRD生物活性的影响。方法利用一步聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR),用Ala替代镇痛活性肽VRD第54位的Ser,从而构建突变体S54A。采用本实验室构建的pSYPU作为表达载体在大肠杆菌BL21(DE3)中表达重组蛋白。通过金属离子螯合亲和柱色谱和阳离子交换柱色谱方法对重组蛋白进行分离纯化。小鼠扭体法测定重组蛋白的镇痛活性。结果重组蛋白主要以可溶性形式存在,通过两步色谱方法获得了电泳纯样品。突变体S54A的镇痛活性明显低于AGP-VRD(P<0.05)。结论镇痛活性肽VRD中54位丝氨酸与其镇痛活性密切相关。
- 王月秋李洋郝智慧张景海
- 关键词：镇痛活性可溶性表达突变体
- 国内钠离子通道研究现状的文献计量学分析
- 2014年
- 运用文献计量学方法,以万方医学网万方数据库2004年1月1日~2013年12月3日收录的钠离子通道文献为资料来源,对其年代、期刊、作者机构、学科分布进行统计分析,揭示我国钠离子通道研究的现状,为该领域未来的研究提供参考。
- 张兵张红梅高硕刘瑞娟张景海
- 关键词：钠离子通道
