国家自然科学基金(81072560)
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
- 相关作者：陈建华谢光蓉陈思马娇颖李辉更多>>
- 相关机构：中国药科大学安徽农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学理学医药卫生更多>>
- 人尿酸氧化酶进化机制研究被引量：2
- 2014年
- 尿酸氧化酶(尿酸酶;EC1.7.3.3;UOX)是一种在嘌呤代谢途径中催化尿酸氧化生成尿囊素的酶。在灵长类动物漫长的进化过程中,人科动物尿酸氧化酶基因因突变失活,成为假基因。通过来源于10种不同生物尿酸氧化酶蛋白质序列比对,鉴别出发生在人科动物的共同祖先的尿酸氧化酶基因上的3个能够引起尿酸分解活性降低甚至丧失的初级突变位点以及发生在人尿酸氧化酶基因上的12个次级突变位点,同时运用定点突变技术对发生在人科动物共同祖先尿酸氧化酶基因上的初级突变位点进行了验证研究。根据这15个突变位点在人科动物尿酸氧化酶基因上出现的频率和灵长类动物的物种进化分支树,判断出上述突变位点在人尿酸氧化酶基因上发生的先后顺序,最终阐明了人尿酸氧化酶的进化轨迹。
- 谢光蓉赵百学王旻陈建华
- 关键词：假基因定点突变技术
- 重组枯草芽孢杆菌猪尿酸氧化酶基因工程菌的构建和分泌表达被引量：1
- 2012年
- 目的构建重组枯草芽孢杆菌猪尿酸氧化酶基因工程菌及其目的蛋白的分泌表达,并对其酶活性进行测定。方法从pET-22b/pUOX重组质粒上PCR获得pUOX基因,然后通过重叠延伸PCR技术将pUOX与一段nprB信号肽基因相连,导入穿梭载体pP43X,构建重组载体pP43X/pUOX,运用化学转化法转化枯草芽孢杆菌WB800中。结果发酵表达后胞外分泌液经SDS-PAGE检测,在约34kD处有一清晰蛋白条带,这与预期分子量一致。发酵液中该重组蛋白的酶活力达2.322U/ml。结论成功构建重组枯草芽孢杆菌猪尿酸氧化酶基因工程菌,目的蛋白分泌表达并具有较高活性。
- 李辉陈思马娇颖戴君谢光蓉陈建华
- 关键词：芽孢杆菌尿酸氧化酶高尿酸血症分泌表达
- 猪尿酸氧化酶基因的克隆及表达被引量：1
- 2011年
- 本研究主要涉及猪尿酸氧化酶(urate oxidase,EC 1.7.3.3)的原核表达载体的构建及蛋白表达,并对其酶活性进行测定。从猪肝组织细胞中提取总的RNA,利用RT-PCR技术克隆pUOX(porcine urate oxidase),插入原核表达载体pET-22b中,构建重组表达载体pET-22b/pUOX,并转化到大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中。通过IPTG诱导获得的重组蛋白经SDS-PAGE检测,在约34 ku处有一清晰蛋白条带,这与预期分子量一致。测定该重组蛋白的酶活力达到1.962 U,这为后期实验奠定了重要的基础。
- 薛璟汪维云陈建华
- 关键词：基因克隆
- HPLC法测定猪尿酸酶活性被引量：2
- 2012年
- 建立了一种测定重组猪尿酸酶活性的高效液相色谱方法。将重组猪尿酸酶基因工程菌的粗酶液与尿酸溶液反应5min,加入高氯酸溶液终止,经超滤后以体系中尿酸浓度的降低值为指标,采用HPLC法[色谱条件:AgilentZorbax 300SB-C18色谱柱、流动相为磷酸-甲醇-双蒸水(3∶25∶472,体积比)、流速1.0mL·min-1、波长292nm]测定粗酶液活性。结果表明,尿酸在10～500μmol·L-1范围内线性关系良好,样品回收率在99%～104%之间。该方法不受杂质干扰、稳定、灵敏度高,适用于尿酸酶粗酶液活性的检测。
- 陈思李辉马娇颖谢光蓉陈建华
- 关键词：基因工程菌尿酸酶酶活性高效液相色谱
