天津市卫生局科技基金(09KY19)
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- Rluc报告基因在大肠杆菌中的表达及检测条件优化
- 2011年
- 目的研究海肾荧光素酶报告基因(Rluc)在大肠杆菌中的表达情况及优化检测条件。方法将Rluc克隆入大肠杆菌JM109,提取质粒后用EcoRⅠ和SalⅠ进行双酶切,并与制备好的pET-30a(+)载体连接,再转化入大肠杆菌BL21。然后用ViviRen底物检测不同稀释液、不同浓度及时间等情况下重组克隆子中Rluc报告基因的荧光表达量,绘制表达曲线。结果成功构建了Rluc在BL21中的表达克隆子;ViviRen底物用PBS稀释比用LB稀释的检测灵敏度高约2倍;荧光检测的表达曲线在底物加入后迅速上升,至10 min时达高峰,然后缓慢下降;阳性克隆子中Rluc的荧光表达线性检测范围广,阴性对照菌株中背景低;总结出了ViviRen底物用PBS稀释、荧光信号在10 min后进行瞬时测定等优化检测条件。结论 Rluc报告基因可在大肠杆菌内高效表达,检测方法具有特异性好、灵敏度高等特点。
- 刘广文董杰闫梅英苏旭井良义郭凤华阚飙
- 关键词：BL21
- 霍乱弧菌中TLC基因簇的变异性分析
- 2011年
- 目的:研究霍乱弧菌中TLC基因簇的分子组成特征和类型检测方法的建立。方法:针对TLC基因簇内部的特征性基因设计结构相关引物和探针,利用序列比对、PCR和核酸杂交等分子生物学方法,检测并验证TLC在菌株内的基因结构和排列方式,确定分布类型。结果:pTLC与TLC基因簇之间序列有变异,TLC多整合于染色体中;建立了TLC基因簇的组成类型检测方法,并发现3种不同的结构排列方式。结论:TLC基因簇类型检测方法的建立及变异性的研究,利于深入揭示其在霍乱进化和毒力转移等过程中的影响作用。
- 刘广文闫梅英王志锐董杰郭凤华阚飙
- 关键词：霍乱弧菌TLCPCR
