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爆发鸡马立克氏病后部分微卫星不稳定性的研究: 2012年; 选取45个微卫星位点,对爆发马立克氏病的4只患鸡的淋巴细胞和正常的组织及3号鸡的肿瘤组织,提取核酸,利用45个所选微卫星引物进行PCR扩增,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测微卫星不稳定性的变化。研究结果表明,在4只患鸡中有39个微卫星位点发生微卫星不稳定性的变化,其中3号鸡发生变化概率最高,证实同个体的淋巴细胞和肿瘤组织同位点发生MSI变化的符合率达到75.6%。; 郭俊清徐进李建正杨德吉; 关键词：鸡马立克氏病肿瘤微卫星不稳定性 PCR 聚丙烯酰胺凝胶电泳

鸡错配修复相关基因MLH1原核表达及抗体制备: 2020年; 为了更好地理解错配修复基因与禽类某些疾病的关系,研究制备了鸡错配修复重要标志性蛋白MLH1的多克隆抗体。首先克隆了鸡MLH1基因的部分保守序列,运用基因重组的方法构建了pET32a-MLH1原核表达载体,IPTG诱导后得到表达的重组蛋白,采用镍柱纯化法纯化重组蛋白。SDS-PAGE结果显示,所得到的重组蛋白分子量与预测值一致,表明纯化得到了高纯度重组蛋白。以重组蛋白为抗原免疫新西兰大白兔,3次免疫后制备抗血清。ELISA结果显示效价高于1∶20000,Western blot显示抗体具有良好的特异性。本结果为检测鸡错配修复相关疾病发生中MLH1基因的功能研究提供了必要的抗体基础。; 孙昭宇武娴苏泽楠杨德吉姚大伟; 关键词：MLH1 错配修复原核表达多克隆抗体

马立克氏病病毒MEQ基因真核表达载体的构建及对CEF细胞错配修复相关基因表达的影响被引量：1: 2015年; MEQ基因是马立克氏病病毒(MOV)血清1型特异性基因,为了研究MEQ基因的致瘤机理,本研究构建了MEQ基因的真核表达载体。首先采用TA克隆将MEQ基因片段连接p MD19-T,构建成p MD19-T-meq,然后采用Eco RⅠ、XhoⅠ限制性内切酶双酶切将MEQ基因克隆至p VAX-1真核表达质粒,构建p VAX-1-meq真核表达质粒。提取p VAX-1-meq质粒转染至鸡胚成纤维细胞中,转染后提取贴壁细胞中总RNA,以β-actin作为内参采用Real-time PCR检测MEQ基因、错配修复相关基因、p53基因的m RNA表达情况。结果成功构建出p VAX1-meq真核表达载体,并在鸡胚成纤维细胞中成功表达。MEQ基因转染的鸡胚成纤维细胞中错配修复相关基因(MSH2和MLH1基因)、p53基因的m RNA表达量显著上调。表明MDV感染造成宿主DNA损伤后,MEQ基因影响DNA损伤修复相关基因的表达,干扰宿主对损伤的DNA进行修复,导致肿瘤的形成。; 周鑫占力杨德吉姚大伟; 关键词：马立克氏病病毒 MEQ基因鸡胚成纤维细胞真核表达错配修复

鸡胚成纤维细胞感染马立克氏病病毒后部分染色体上微卫星不稳定性研究被引量：2: 2009年; 研究鸡胚成纤维细胞(CEF)感染马立克氏病毒(MDV)后部分染色体(5,6,7,8,9)微卫星的变化。CEF感染马立克氏病超强毒RB1B株后,提取正常鸡胚成纤维细胞和感染病毒的成纤维细胞DNA,应用5,6,7,8,9号染色体上的43个微卫星引物进行PCR扩增,产物采用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳银染检测。结果表明43个微卫星标记有38个表现出不同程度的微卫星不稳定性,ABR0262发生率最高,为38.10%,ABR0048,ABR0041和MCW0183也较高,为33.33%。21组样品中全部检测到微卫星不稳定性,9号样品微卫星不稳定性发生率最高,为41.86%。11号样品的发生率也较高,为32.56%。表明马立克氏病病毒感染鸡胚成纤维细胞后,可以导致广泛的宿主基因组变化。这些变化是随机的,但是也有一定的规律,而且这些变化可以用微卫星标记来检测。; 高喜梅邱燕韩涛姚刚杨德吉; 关键词：鸡胚成纤维细胞马立克氏病毒

一例鸡马立克氏病的临床、病理及分子诊断被引量：3: 2010年; 2008年9月,安徽省明光市某散养鸡场发生了一种以皮肤肿块、眼睛肿大、鸡冠病变为特征的疾病。笔者对该病例进行病理剖检,制备常规石蜡切片进行病理组织学检查,根据马立克氏病病毒IPC4基因序列设计1对特异性引物,建立PCR检测方法,综合诊断该病为马立克氏病。; 郭俊清姚大伟李臻兴杨德吉许家荣; 关键词：马立克氏病病理组织 PCR

马立克氏病毒感染致鸡胚成纤维细胞4号染色体上微卫星不稳定性研究: 2009年; 应用微卫星技术对感染马立克氏病毒5 d后的32个鸡胚成纤维细胞(CEF)4号染色体上的20个微卫星标记进行PCR扩增,扩增产物采用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,银染检测。试验结果显示:20个微卫星标记有18个表现出不同程度的微卫星不稳定性,其中ABR0622发生率最高,为37.50%;MCW 0174、ADL0266和ABR0382的发生率较高,均为31.25%。在32组样品中有30个检测到微卫星不稳定性,其中11号样品发生率最高,为45.00%,其次是3号样品为35.00%。结论:CEF感染马立克氏病毒后出现微卫星不稳定性现象。; 尚月丽乔丽平韩涛夏继飞杨德吉; 关键词：微卫星不稳定性马立克氏病毒鸡胚成纤维细胞

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