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沙眼衣原体pORF8质粒蛋白克隆表达与定位被引量：4: 2011年; 目的克隆表达沙眼衣原体pORF8质粒蛋白,并在衣原体感染细胞中对其进行定位分析。方法 PCR法扩增pORF8基因,并将其定向插入pGEX-6p载体构建原核表达重组体pGEX-6p/pORF8,重组体转化E.coli XL1Blue后经IPTG诱导表达pORF8融合蛋白,融合蛋白经Glutathione Sepharose亲和层析纯化后免疫Balb/C鼠,制备pORF8多克隆抗体;应用免疫荧光试验对pORF8质粒蛋白进行定位。结果 pORF8基因全长为744 bp,编码247个氨基酸残基,pGEX-6p/pORF8在大肠杆菌中表达相对分子质量约为54 000的GST-pORF8融合蛋白,间接免疫荧光实验结果显示pORF8在感染细胞中的表达模式与主要外膜蛋白基本一致,而与衣原体蛋白酶样活性因子分布模式不同。结论 pORF8质粒蛋白定位于衣原体菌体上,为衣原体菌体蛋白。该研究为进一步研究该蛋白的结构功能、阐明Ct的致病机制奠定了基础。; 李忠玉吴移谋黄秋林粟盛梅周洲陈超群钟光明; 关键词：沙眼衣原体基因克隆

沙眼衣原体pORF5质粒蛋白单克隆抗体2H4的纯化及其免疫学特性研究被引量：1: 2011年; 目的纯化抗沙眼衣原体pORF5单克隆抗体2H4并鉴定其免疫学特性.方法大量培养pORF5单克隆抗体阳性杂交瘤细胞株并收集培养上清,采用G蛋白免疫亲和层析法纯化2H4单克隆抗体；酶联免疫吸附试验（ELISA）测定2H4效价及抗体亚类；Western blot鉴定其特异性；免疫荧光试验（IFA）检测2H4单克隆抗体的衣原体种属特异性.结果纯化后2H4抗体的纯度高达93％；效价为1：1024,免疫球蛋白类型为IgG2a;2H4抗体不仅能特异性识别pORF5融合蛋白,而且能特异性识别Ct血清型A、D、L2、鼠农原体（MoPn）、鹦鹉热嗜农原体（6BC）质粒所编码的内源性pORF5蛋白,但不识别衣原体其他质粒蛋白和肺炎嗜衣原体（Cpn）.结论获得了高纯度的能特异识别pORF5质粒蛋白的单克隆抗体,为进一步研究pORF5蛋白结构和功能以及沙眼衣原体诊断试剂盒的研制奠定了良好的基础.; 李忠玉吴移谋黄秋林粟盛梅周洲陈超群周辉钟光明; 关键词：沙眼衣原体单克隆抗体免疫学特性

假定蛋白CT440在沙眼衣原体感染细胞中的定位研究被引量：1: 2012年; 包涵体膜蛋白在沙眼衣原体致病过程中发挥重要的作用.为确定假定蛋白CT440在沙眼衣原体感染细胞中的定位及特征,本研究采用PCR方法从D型沙眼衣原体的基因组中扩增Ct440基因,克隆入pGEX-6p原核表达载体构建pGEX-6p/Ct440原核表达重组体,重组体转化到XL1-blue大肠杆菌,IPTG诱导表达融合蛋白GST-CT440.纯化后的CT440融合蛋白免疫小鼠制备抗体,间接免疫荧光(IFA)和Western blot测定抗体的特异性.特异性抗体用于分析CT440蛋白在衣原体感染细胞内的定位、表达时相特征及其对衣原体感染的影响.结果表明,CT440蛋白定位于沙眼衣原体包涵体膜上,为沙眼衣原体包涵体膜蛋白;该蛋白在衣原体感染12h后开始表达,直至持续到整个感染周期;转基因在胞浆表达的CT440融合蛋白不影响其后的衣原体感染.本实验为深入研究衣原体与宿主细胞间的相互作用,阐明衣原体致病机制提供了重要的实验依据.; 李忠玉黄秋林粟盛梅周洲陈超群钟光明吴移谋; 关键词：沙眼衣原体

沙眼衣原体pORF5蛋白真核表达系统的构建与鉴定被引量：1: 2010年; 目的构建沙眼衣原体(Ct)pORF5基因重组质粒pDSRed-C1/pORF5,建立pORF5稳定转染的表达系统并对其进行鉴定。方法PCR法扩增pORF5基因,定向插入pDSRed-C1真核表达载体构建pDSRed-C1/pORF5重组体,重组体经酶切、PCR及测序鉴定后,用脂质体介导的基因转染法,分别将pDSRed-C1/pORF5和pDSRed-C1导入HeLa-229细胞,通过G418筛选获得转入目的基因的阳性细胞克隆;荧光显微镜和Western blot检测pORF5蛋白在细胞中的表达。结果所克隆的pORF5基因片段经测序完全正确;转染pDSRed-C1/pORF5的HeLa-229细胞大部分有pORF5蛋白的表达,而转染空载体pDSRed-C1或未转染的HeLa-229细胞,均未见pORF5蛋白表达。结论成功构建了稳定表达外源新基因pORF5的细胞系,为进一步研究该蛋白的结构功能、阐明Ct的致病机制、研制基因工程疫苗提供了有利的条件。; 李忠玉吴移谋黄秋林周洲; 关键词：沙眼衣原体真核表达

沙眼衣原体质粒蛋白pORF5生物学特性初步研究: 2011年; 目的分析沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis,Ct）隐蔽性质粒编码的质粒蛋白pORF5在感染细胞中的定位并初步探讨其生物学特征.方法 PCR扩增pORF5质粒蛋白编码基因,构建pORF5原核表达重组体并诱导表达融合蛋白融合蛋白经Glutathione Sepharose亲和层析纯化后免疫小鼠,制备单克隆抗体和多克隆抗体,间接免疫荧光技术及免疫印迹鉴定抗体的特异性分析pORF5质粒蛋白在感染细胞中的分布及表达模式特征.采用ELISA分析pORF5质粒蛋白在自然感染状态下的表达情况及免疫原性.结果 pORF5主要分布于宿主细胞质,但也少量分布在原体（EB）和网状体（RB）上,在细胞质中的分布模式与衣原体分泌蛋白酶样活性因子（CPAF）基本相似,激光共聚焦结果显示两者并不重叠 pORF5能与Ct生殖道感染患者血清发生强烈的免疫应答.结论 pORF5为衣原体分泌蛋白,并具有很强的免疫原性在自然感染状态下,pORF5质粒蛋白基因被激活产生内源性靶蛋白.; 李忠玉吴移谋黄秋林钟光明; 关键词：沙眼衣原体质粒分泌蛋白

质粒蛋白pORF5在沙眼衣原体感染细胞中的定位及免疫原性研究(英文)被引量：4: 2011年; 目的分析沙眼衣原体隐蔽性质粒编码的质粒蛋白pORF5在感染细胞中的定位并初步探讨免疫原性特征。方法 PCR扩增pORF5质粒蛋白编码基因,构建原核表达重组体pGEX-6p/pORF5,重组体转化大肠杆菌XL1-blue中诱导表达融合蛋白;融合蛋白经Glutathione Sepharose亲和层析纯化后免疫小鼠,制备单克隆抗体和多克隆抗体,间接免疫荧光技术及免疫印迹鉴定抗体的特异性,并分析pORF5质粒蛋白在感染细胞中的分布特征。采用ELISA方法分析pORF5质粒蛋白的免疫原性。结果 pORF5原核表达重组体成功构建,融合蛋白在大肠杆菌中可溶性表达;pORF5主要分布于宿主细胞胞浆,但也少量分布在EB、RB上;pORF5能与衣原体患者血清及鼠免疫血清发生强烈地免疫反应。结论 pORF5为衣原体分泌蛋白,并具有很强的免疫原性。; 李忠玉吴移谋黄秋林钟光明周洲粟盛梅; 关键词：沙眼衣原体质粒分泌蛋白免疫原性

衣原体持续性感染机制的研究进展被引量：1: 2011年; 人类致病性衣原体主要有肺炎嗜衣原体（Chlamydophila pneumoniae,Cpn）和沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis,Ct）。其中Cpn是引起人类急性呼吸道感染的重要病原菌,可引起多种呼吸系统感染性疾病,如新生儿肺炎、支气管炎、咽炎等,; 周辉李忠玉; 关键词：肺炎嗜衣原体呼吸系统感染性疾病急性呼吸道感染沙眼衣原体新生儿肺炎

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湖南省自然科学基金(09JJ3059)