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鸡β2-微球蛋白原核表达及其在马立克氏病毒感染中与MHC 1的比较分析: ＜正＞β2-微球蛋白（β2-microglobulin,β2M）是组成MHC I类分子复合体的轻链分子,对于MH C I类分子在细胞表面稳定表达和有效递呈抗原肽必不可少。并且β2M能促进抗原肽与细胞表面MHC I类分子的...; 郁川刘秋钱琨金文杰梅梅范忠军胡序明秦爱建; 文献传递

马立克氏病病毒超强毒感染鸡羽髓蛋白质组分析被引量：3: 2011年; 【目的】羽毛是细胞游离马立克氏病病毒(Marek's disease virus,MDV)释放的部位,为了解感染MDV后鸡羽中宿主基因表达的变化及对病毒感染的应答,进行了MDV感染鸡的羽髓蛋白质组学分析。【方法】1日龄无特定病原体(specific pathogen free,SPF)鸡人工感染MDV超强毒RB1B株(1000PFU),感染后21d采集鸡羽毛,提取羽髓蛋白,以17cm,pH5-8的IPG胶条进行二维电泳,以未感染病毒的SPF鸡羽髓蛋白为对照,使用PDQuest软件对二维电泳图谱进行差异蛋白分析,并选取部分差异斑点进行质谱鉴定。【结果】PDQuest软件分析发现攻毒组和对照组表达差异大于两倍的蛋白点有41个,其中攻毒组表达上调的蛋白点25个,下调的蛋白点7个,新出现的蛋白点有9个。质谱分析共成功鉴定了21个斑点,对应于20个蛋白。如载脂蛋白AI(apolipoprotein AI)、14-3-3 sigma(两个斑点均为该蛋白)、癌蛋白18(stathmin)等。【结论】功能预测表明这些蛋白涉及到宿主的抗病毒应答、物质代谢、细胞骨架成分、细胞增殖相关等方面。; 陈欣虹卢占军钱琨金文杰王友秦爱建; 关键词：马立克氏病病毒蛋白质组

雏鸡法氏囊蛋白质组学双向电泳技术的建立及其初步分析被引量：5: 2009年; 为了建立并优化鸡法氏囊蛋白质组学的双向电泳技术体系,以不同日龄雏鸡的法氏囊组织为研究对象,用固相pH梯度胶条进行等电聚焦、SDS-PAGE垂直电泳,采用不同的样品制备方法,对上样量、水化、等电聚焦、胶条平衡和凝胶染色方法等进行一系列优化,并应用PDQuest8.0.1软件对图谱进行初步分析。结果显示法氏囊组织在pH 5~8范围1、7 cm的2-DE胶上可以得到很好的分离,胶体考染后经PDQuest软件分析,在正常法氏囊组织可检测到800个以上蛋白点,不同2-DE图谱间蛋白点平均匹配率为83.5%,不同日龄雏鸡法氏囊存在有明显表达差异的蛋白质点37个,其中表达上调蛋白点17个,表达下调蛋白点11个,新增蛋白点5个,消失蛋白点4个。试验建立的鸡法氏囊组织蛋白质组双向电泳技术为法氏囊发育进化及其免疫功能的研究提供了新技术和方法。; 卢占军秦爱建陈欣虹苏钰文邵红霞金文杰钱锟王友朱玉峰; 关键词：法氏囊蛋白质组双向电泳

双向电泳分析鸡羽髓蛋白组学方法的建立被引量：2: 2009年; 为建立双向电泳方法研究鸡羽髓蛋白组学,以进一步了解病毒与宿主相互作用的新机制,从SPF鸡羽根挤出羽髓,提取其中蛋白进行双向电泳,并对不同裂解液、IPG胶条pH值范围、一向等电聚焦条件、二向SDS-PAGE凝胶浓度等影响因素进行优化。结果显示,采用17cm,pH5~8IPG胶条,400μg羽髓蛋白进行的双向电泳,图谱用PDQuest8.0.1分析,可分辨的蛋白点约为700左右,不同样本间的匹配率大于80%。可见,本研究建立的双向电泳方法分辨率及重复性均较高。; 陈欣虹钱锟卢占军张晨飞王友邵红霞金文杰秦爱建; 关键词：蛋白质组学双向电泳

鸡内参基因β-actin和GAPDH实时定量PCR重组质粒标准品的构建被引量：7: 2011年; 本研究从SPF鸡皮肤中提取总RNA,并反转录为cDNA;以该cDNA为模板,通过聚合酶链式反应(PCR)分别扩增出看家基因β-actin和GAPDH,将PCR产物连入pGEM-Teasy载体,转化DH5α菌,经蓝白斑筛选和质粒酶切鉴定和DNA含量测定,得到定量的β-actin和GAPDH基因融合的重组质粒(pGEMT-actin和pGEMT-GAPDH),即实时定量PCR内参标准品。构建成功的标准品经10倍梯度稀释,作为模板,获得扩增效率良好及可信度高的标准曲线。构建成功的标准品可大量制备,可用于鸡的靶基因定量PCR所需的内参标准品。; 陈欣虹钱琨郁川田野秦爱建; 关键词：内参基因实时定量PCR 标准品

两株马立克病病毒的分离及相关致病基因序列的比较被引量：5: 2009年; 为了解国内鸡群马立克病（MD）流行毒株的遗传特征,采用细胞培养、间接免疫荧光等方法从江苏省2个鸡场送检病鸡中分离鉴定出2株马立克病病毒（MDV）Ⅰ型毒株,采用PCR方法扩增两分离毒株的vIL-8、pp38、meq等病毒致病相关基因,所得序列用DNAStar软件与GenBank上登录的参考毒株进行比较分析。结果显示,两分离毒株的序列同源性为99.7%-100%,与MDVⅠ型强毒及超强毒株的同源性为99.3%-99.8%,具有强毒特征;两分离毒株的meq基因与其他4个国内分离强毒株的序列完全一致,在pp38基因编码的氨基酸序列中第109位均为甘氨酸而不是国外GA等毒株的谷氨酸,这与以前报道的另外3个中国野毒株一致。提示,这些变异可能是国内MDV流行强毒的遗传性特征。; 陈欣虹秦爱建钱锟卢占军张晨飞苏钰文邵红霞金文杰; 关键词：马立克病病毒病毒分离聚合酶链式反应

鸡β2-微球蛋白原核表达及其在马立克氏病毒感染中与MHC 1的比较分析: β2-微球蛋白(β2-microglobulin,β2M)是组成MHCⅠ类分子复合体的轻链分子,对于MH CⅠ类分子在细胞表面稳定表达和有效递呈抗原肽必不可少。并且β2M能促进抗原肽与细胞表面MHCⅠ类分子的结合,其在抗...; 郁川刘秋钱琨金文杰梅梅范忠军胡序明秦爱建; 文献传递

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国家自然科学基金(30871873)