国家自然科学基金(30871859)
- 作品数：13 被引量：101H指数：6
- 相关作者：刘长明危艳武黄立平郭龙军吴洪丽更多>>
- 相关机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所东北农业大学更多>>
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- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HBR株不同代次水平的毒力比较试验
- 2012年
- 为了阐明高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)HBR毒株在体外传代过程中发生的毒力及遗传变异情况,采用第5、10和125代PRRSV-HBR株病毒进行了人工感染试验。结果显示,低代次(第5和第10代)病毒接种组可复制出以"高热综合征"为特点的症候群,第5代毒株感染组死亡率达40%(2/5),第10代感染组症状明显减轻且无死亡,第125代毒株感染组基本无临床症状。这3个代次的毒株感染组于感染后第3天检测病毒血症呈阳性,第7～14天到达高峰,第125代于第21天消失,较第5和10代毒株提前1周。病毒感染后抗原主要分布于脾、扁桃体、淋巴结等组织,第5和10代毒株感染组脏器出现严重的病理损伤,第125代毒株感染组仅见轻微病理损伤。对3个代次毒株的ORF5、ORF6和ORF7测序显示,仅在ORF5出现了3个氨基酸位点突变,即第29位:第5、第10代的缬氨酸到了第125代变为丙氨酸;第32位:第5、第125代的丝氨酸到了第10代变为甘氨酸;第196位:第5、第10代的谷氨酰胺到了第125代变为精氨酸。研究表明,低代次毒株能够完全复制出典型的"猪高热综合征",而高代次毒株无明显临床症状,证明该毒株经细胞传代后毒力下降。高代次毒株感染动物仍能够引起毒血症和持续感染的结果表明,高代次毒株仍具一定毒力,作为疫苗种毒需要进一步毒力弱化。
- 危艳武范培虎郭龙军吴洪丽刘长明沈荣显
- 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒毒力比较
- 猪输血传播病毒(TTV)与猪圆环病毒混合感染的检测及TTV遗传变异分析被引量：5
- 2011年
- 为了解我国猪群中猪输血传播病毒(TTV)与猪圆环病毒(PCV)混合感染情况,本研究采用PCR方法对采自14个省280份病料样品进行检测,结果显示,TTV1和TTV2阳性检出率分别为51.8%和28.2%,TTV1与TTV2混合感染率为18.2%;PCV1和PCV2阳性率分别为41.1%和37.5%,PCV1与PCV2混合感染率为19.6%;PCV2阳性样品中TTV1和TTV2混合感染率达75.0%。此外,对2株TTV1基因组进行测序,与GenBank中登录的6个TTV1序列比对,相似性结果为67.3%～95.1%;对4株TTV2基因组测序,与GenBank登录的4条TTV2序列比对,相似性为84.7%～90.4%;将TTV1与TTV2进行序列比对,相似性仅为44.0%。TTV1和TTV2基因高变区分别位于520 nt～2 594 nt和720 nt～2 170 nt;TTV1基因保守区位于1 nt～520 nt和2 595 nt～2 800 nt;而TTV2基因保守区位于1 nt～719 nt和2 171 nt～2 800 nt。以上结果表明,我国猪群中存在TTV与PCV2的混合感染,并且两种病毒混合感染引起的相关疾病可能存在协同致病性;TTV1和TTV2基因型差异较大,具有遗传变异多样性的特点。
- 刘建波郭龙军危艳武黄立平吴洪丽刘长明
- 关键词：猪圆环病毒遗传变异分析
- 检测猪圆环病毒2型血清中和抗体阻断ELISA方法的建立及应用
- 利用抗PCV2-Cap蛋白中和性单克隆抗体建立了一种阻断ELISA方法,用于检测猪血清中PCV2中和抗体。该方法将PCV2多克隆抗体包被ELISA板以捕获已知病毒抗原,以辣根过氧化物酶标记的单抗为指示抗体,通过测定该酶标...
- 黄立平刘长明危艳武陆月华郭龙军
- 关键词：猪圆环病毒2型单克隆抗体阻断ELISA
- 文献传递
- 高致病性PRRSV与PCV2共感染协同致病性研究被引量：9
- 2012年
- 【目的】为阐明高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的协同致病作用,澄清两种病毒不同时间顺序共感染与其协同致病力之间的关系。【方法】选取35日龄阴性健康猪30头,随机分6组,PCV2/HP-PRRSV顺序共感染组、HP-PRRSV/PCV2顺序共感染组、HP-PRRSV+PCV2同时共感染组、HP-PRRSV感染组、PCV2感染组、未接种对照组。感染后每天测量体温、观察临床症状,每周称量体重、采血。用流式细胞仪检测血液中的CD3+CD4+CD8-、CD3+CD4-CD8+、γδT、NK细胞及粒细胞和单核细胞变化;免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)检测这两种病毒抗体变化;用ELISA法检测血清中IFN-γ、TNF-α、IL-10、IL-2、GM-CSF细胞因子变化;用荧光定量PCR法检测血清和组织中病毒载量。对各组试验猪进行组织病理学观察。【结果】HP-PRRSV/PCV2顺序共感染组临床症状最严重,死亡率达60%;组织和血清中病毒载量显著高于其它组,抗体滴度明显低于其它组;淋巴细胞亚群及细胞因子(尤以TNF-α)变化也最为明显。【结论】HP-PRRSV和PCV2之间存在协同致病作用,且猪群先感染HP-PRRSV后感染PCV2可明显提高猪群发病率和死亡率。本研究对临床HP-PRRSV和PCV2的综合防制提供科学依据。
- 范培虎危艳武郭龙军吴洪丽黄立平刘长明
- 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒猪圆环病毒2型共感染
- 猪输血传播病毒(TTV)与猪圆环病毒(PCV)混合感染的检测及TTV遗传变异分析
- 为了解我国猪群中猪输血传播病毒(TTV)与猪圆环病毒(PCV)混合感染情况,采用PCR法对来自14个省份280份送检病料进行了检测,TTV1与TTV2阳性检出率分别为51.8%和28.2%,TTV1和TTV2混合感染阳性...
- 刘建波郭龙军危艳武黄立平吴洪丽刘长明
- 关键词：TTVPCV遗传变异分析
- 文献传递
- 猪圆环病毒2型Cap蛋白核定位信号区抗原表位的鉴定被引量：15
- 2010年
- 【目的】猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合症(PMWS)的重要病原,其基因组ORF2编码的Cap蛋白为病毒的主要结构蛋白,起保护性抗原作用,对其进行抗原表位鉴定十分必要。【方法】本研究采用杆状病毒表达的重组Cap蛋白作为免疫原制备5株单克隆抗体,通过原核表达系统对ORF2基因进行了截短表达,先行对Cap蛋白抗原表位进行宽幅定位,然后利用合成多肽对Cap抗原表位做精确扫描定位。【结果】5株单抗中有4株针对同一抗原表位,坐落在Cap蛋白N末端核定位信号区,经多肽扫描证实,核心序列为26RPWLVHPRHRY36;另1株单抗(1D2)仅与重组Cap蛋白产生免疫活性反应,对4个分段截短表达的Cap蛋白无免疫活性反应,鉴于该单抗具有中和病毒活性,针对的可能是构象表位。【结论】本研究首次鉴定出位于Cap蛋白核定位信号区的一个抗原表位,为以后Cap蛋白功能及核定位机理的研究奠定基础。
- 郭龙军陆月华黄立平危艳武刘长明
- 关键词：猪圆环病毒2型CAP蛋白抗原表位核定位信号
- 高致病性PRRSV与PCV2共感染协同致病性研究
- 为阐明高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的协同致病作用,澄清两种病毒不同时间顺序共感染与其协同致病力之间的关系。选取35日龄阴性健康猪30头,随机分6组,PCV2/HP-PRR...
- 范培虎危艳武郭龙军吴洪丽黄立平刘长明
- 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒猪圆环病毒2型共感染
- 文献传递
- 猪圆环病毒2a/2b亚型病毒株灭活疫苗及其重组Cap蛋白亚单位疫苗的交互免疫实验被引量：5
- 2012年
- 为评价猪圆环病毒(PCV)2a/2b两种基因型病毒株及其重组Cap蛋白(rCap)之间的交互免疫,本研究采用PCV2a-LG株和PCV2b-YJ株制备了2种病毒灭活疫苗,及其重组杆状病毒表达的2种Cap蛋白(PCV2a-rCap和PCV2b-rCap)亚单位疫苗。选用8周龄BALB/c鼠165只,随机分成11组,每组15只,用上述4种疫苗各免疫2组,以PCV2a或PCV2b株攻毒。攻毒后,所有鼠均未见肉眼可见的临床症状和病理变化。采用IPMA法检测抗体,4种疫苗于免疫第3周抗体转阳,第5周抗体效价达到1∶200～1∶800倍,其中PCV2a-rCap免疫组抗体效价最高。2种灭活苗和PCV2a-rCap免疫组攻击同型或异型病毒株均可以获得完全保护。以PCV2a和PCV2b各为指示病毒对病毒抗血清和rCap蛋白抗血清进行交叉中和试验,同型病毒株与同型血清的中和抗体效价均高于异型病毒株。病理观察显示,免疫鼠均未见明显病理变化,攻毒对照鼠肺脏出现一定程度的病理损伤。本研究表明,病毒灭活疫苗及其rCap亚单位疫苗PCV2a和PCV2b可提供交叉保护。
- 付玉洁郭龙军黄立平危艳武唐青海吴洪丽刘长明
- 关键词：交互免疫
- 猪圆环病毒2a和2b亚型灭活疫苗及亚单位疫苗的交互免疫研究
- 为评价猪圆环病毒(PCV)2a/2b两种基因型毒株及其重组Cap蛋白(rCap)之间的交互免疫效果,本研究采用PCV2a-LG和PCV2b-YJ株制备了2种病毒灭活疫苗,及其重组杆状病毒表达的2种Cap蛋白(PCV2a-...
- 付玉洁郭龙军黄立平危艳武唐青海吴洪丽刘长明
- 关键词：交互免疫
- 文献传递
- 猪圆环病毒2型血清中和抗体阻断ELISA检测方法的建立及应用被引量：15
- 2009年
- 利用PCV2-Cap蛋白中和性单克隆抗体建立了一种检测猪血清中PCV2中和抗体的阻断ELISA方法。用该方法与免疫过氧化物酶单层细胞试验对353份试验猪血清样品进行平行检测,结果两种方法的符合率为96.0%;该方法的敏感性为97.9%,特异性为92.4%,且与其他几种猪病毒参考阳性血清无交叉反应。该阻断ELISA与血清中和试验的检测结果呈显著正相关(r=0.997 0),其敏感性还优于血清中和试验。用阻断ELISA对PCV2灭活疫苗免疫与攻毒试验猪血清样品进行检测,结果显示,疫苗接种后第2周就能检测到PCV2中和抗体,4周后阳转率达100%。另外,用该方法对东北三省不同地区送检的703份血清样品进行检测,结果阳性检出率为73.0%。表明,东北三省猪场中的PCV2感染率较高,危害严重。
- 黄立平刘长明危艳武陆月华郭龙军
- 关键词：猪圆环病毒2型中和抗体单克隆抗体阻断ELISA
