国家自然科学基金(30770577)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：王刚赵维明张志宏徐勇陈岳更多>>
- 相关机构：哈尔滨医科大学天津医科大学南开大学更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 前列腺特异性双基因表达载体pIRES-PSMAe/p-TK-Cx43的构建及鉴定
- 2010年
- 目的 构建前列腺特异性双基因表达载体pIRES-PSMAe/p-TK-Cx43,为前列腺癌基因治疗实验研究奠定基础. 方法获取Cx43基因并克隆至pMD19-T Simple载体;合成HSV-TK基因并克隆到pIRES载体的MCS A中,得pIRES-TK;获取PSMAe/p并克隆至pIRES-TK中替换CMV启动子,得到pIRES-PSMAe/p-TK;将Cx43基因克隆到pIRES-PSMAe/p-TK的MCS B中,得到pIRES-PSMAe/p-TK-Cx43,对此质粒双酶切鉴定并测序.pIRES-PSMAe/p-TK-Cx43转染人前列腺癌细胞株LNcap,RT-PCR观察TK及Cx43基因表达. 结果合成的各质粒经双酶切、琼脂糖凝胶电泳可见目的 基因条带;pIRES-PSMAe/p-TK-Cx43经测序与预期设计相符.pIRES-PSMAe/p-TK-Cx43转染LNCaP细胞,RT-PCR显示成功表达TK及Cx43 mRNA. 结论成功构建了含HSv-TK及Cx43的双基因表达载体pIRES-PSMAe/p-TK-Cx43.
- 王刚
- 关键词：HSV-TK/GCV连接蛋白43
- 叶酸修饰的G5-PAMAM-D介导HSV-TK/GCV自杀基因系统治疗前列腺癌的体外实验研究被引量：1
- 2010年
- 目的:探讨叶酸修饰的第五代聚酰胺-胺型树枝状聚合物(G5-PAMAM-D-fol)作为基因载体进行前列腺癌自杀基因治疗的可行性。方法:以GS-PAMAM-D-fol为基因载体将含有自杀基因HSV-TK的重组质粒pcDNA3-tk转染至前列腺癌细胞系PC-3和LNCaP,24h后以RT-PCR法检测HSV-TK基因在两种前列腺癌细胞系中的mRNA表达;再次转染后24h,对转染的两种细胞分别给予不同浓度的前体药物更昔洛韦(GCV),48h后采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测细胞抑制率。结果:RT-PCR结果证明G5-PAMAM-D-fol可将重组质粒pcDNA3-tk转染2种前列腺癌细胞并转录HSV-TK基因。MTT实验反映出A组(G5-PAMAM-D-fol/pcDNA3-tk)对PC-3和LNCaP细胞有明显的杀伤作用,并且比B组(G5-PAMAM-D/pcDNA3-tk)的细胞抑制率更高。C组(G5-PAMAM-D-fol)和D组(GS-PAMAM-D)随着GCV浓度的增加细胞生长并未受到明显的抑制,而且前者并未表现出比后者更明显的细胞杀伤作用。结论:G5-PAMAM-D-fol能够在体外将自杀基因重组质粒成功转入前列腺癌细胞并表达HSV-TK基因,其靶向性强且细胞毒性低。
- 王刚陈岳徐勇张志宏杨阔王燕铭孔德领赵维明
- 关键词：基因载体自杀基因前列腺癌
