国家高技术研究发展计划(2009AA10Z105)
- 作品数：17 被引量：90H指数：6
- 相关作者：白俊杰闫学春孙效文姜鹏邹曙明更多>>
- 相关机构：中国水产科学研究院珠江水产研究所上海海洋大学中国水产科学研究院黑龙江水产研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划广东省科技计划工业攻关项目广东省海洋渔业科技推广专项项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 草鱼两个肌肉生长抑制素cDNA克隆、表达及过量表达对胚胎发育的影响被引量：19
- 2011年
- 肌肉生长抑制素(MSTN)是抑制肌肉生长和发育的重要生长调控因子。通过cDNA末端快速扩增法(RACE)克隆草鱼MSTN-1型和MSTN-2型全长cDNA。RT-PCR分析结果表明,MSTN-1在草鱼肌肉、脑和眼中的转录量较高,在肝胰脏、脾脏和心的转录量较低,在肠、腮、性腺和肾中无表达;MSTN-2只在脑和肌肉中有表达。在草鱼胚胎发育的0-36 hpf期间,MSTN-1的转录量较低;在胚胎发育的36-48 hpf期间,其转录量呈逐渐升高的趋势;MSTN-2各时相均无表达,可能因为该基因在草鱼胚胎发育过程中不起重要作用。通过分别显微注射MSTN-1型和MSTN-2型mRNA至斑马鱼1-2细胞期胚胎。结果显示,注射MSTN-1型mRNA过表达可导致斑马鱼体节发生期胚胎的前-后轴拉长,背-腹轴变短,脊索轻微扭曲,以及体节发育受到强烈抑制而不分化等现象。注射MSTN-2型mRNA胚胎早期发育有所延迟并未发生明显变化,但发育至60 h之后尾部明显发生严重弯曲。
- 濮剑威孙成飞蒋霞云邹曙明
- 关键词：草鱼肌肉生长抑制素克隆过表达
- 金鱼hAT家族转座子Tgf2的克隆及其结构被引量：16
- 2010年
- hAT家族转座子以果蝇hobo、玉米Ac和金鱼草(Ceratophyllum demersum L.)Tam3为代表,以"剪切-粘帖"方式进行DNA转座。1996年,日本学者首次在白化青鳉(Oryzias latipes)中发现具有天然活性的脊椎动物hAT家族转座子,即青鳉Tol2转座子,该转座子已在模式生物斑马鱼转基因、基因和启动子捕获方面进行了广泛应用。文章根据玉米Ac与青鳉Tol2转座子序列保守区设计一对引物,在19种不同鱼类物种或品系中进行PCR筛选,最后发现此类hAT家族转座子在我国不同品系金鱼中存在,命名为金鱼Tgf2转座子。金鱼Tgf2转座子全长4720bp,由4个阅读框组成,与青鳉Tol2转座子的相似度为97%。金鱼Tgf2与青鳉Tol2转座子在末端倒位重复和亚末端重复上存在一定差异,此外,金鱼Tgf2转座子的中间反向重复序列(1453bp到2091bp)可形成一种"十"字结构,明显有别于青鳉Tol2转座子形成的茎环结构,这些区域与转座活性密切相关。文章预示金鱼Tgf2转座子可能具有更高的天然转座活性,构建高效金鱼Tgf2转基因元件可供鱼类转基因和基因捕获研究。
- 邹曙明杜雪地袁剑蒋霞云
- 关键词：金鱼转基因
- 食物供应量对转红色荧光蛋白基因唐鱼生存和生长的影响被引量：5
- 2011年
- 选取雄性杂合子转红色荧光蛋白基因唐鱼(Tanichthys albonubes)(简称:转基因唐鱼)与雌性非转基因唐鱼交配产卵,出膜7 d后,在水温(25.0±2.0)℃条件下,选择健康仔鱼进行饱食(食物供应量高)、半饥饿(食物供应量中)和饥饿(食物供应量低)3种处理,结果显示:(1)出膜后7～72 d的唐鱼饱食组与半饥饿组死亡率无显著差异(P>0.05),但饥饿组唐鱼死亡率均显著高于饱食组和半饥饿组(P<0.01),表明食物供应量影响唐鱼的生存能力;(2)红色荧光蛋白基因在唐鱼体内表达,肉眼观察,最早出现在出膜后第30天。在出膜后的72 d,对3个处理组中没有表达红色荧光蛋白的唐鱼进行PCR验证,均没检测到沉默表达个体,此时3个处理组转基因唐鱼与非转基因唐鱼数量比均接近1∶1,符合经典的孟德尔单显性基因遗传模式,说明食物供应量多寡对转基因唐鱼与非转基因唐鱼生存影响效应是一致的;(3)出膜后28、42、57和72 d,对3个不同处理组的唐鱼幼鱼体长进行比较,结果均是饱食组>半饥饿组>饥饿组,且组间差异显著或极显著(P<0.05或P<0.01)。而对72 d唐鱼幼鱼3个处理组内转基因唐鱼和非转基因唐鱼体长进行统计分析表明,3个处理组内转基因唐鱼和非转基因唐鱼体长差异均不显著(P>0.05),表明食物供应量多寡对转基因唐鱼与非转基因唐鱼生长影响效应也是一致的。综上所述,食物供应量对唐鱼生存和生长是有影响的,但对转基因唐鱼和非转基因唐鱼影响效应是一致的,可见转基因唐鱼在食物供应量缺乏条件下并没有生存竞争优势。
- 樊佳佳白俊杰简清叶星
- 关键词：适合度死亡率
- 鲤基因组中1个新Tc1类转座子的发现与鉴定被引量：2
- 2011年
- 在鲤(Cyprinus carpio)基因组中鉴别出一个新的具有潜在转座活性的Tc1类转座子,并命名为CCTN转座子(Cyprinus carpio Transposon,CCTN)。CCTN转座子全长1 611 bp,由两端约214 bp的反向重复序列(Inverted Repeat,IR)和中间不间断的996 bp的转座酶开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)组成。CCTN转座子推测的转座酶序列中存在完整的DD(34)E结构域,此结构域是Tc1类转座酶作用的必需位点之一。采用实时荧光定量PCR评估CCTN转座子在鲤基因组中的拷贝数约为2.28×103,占全基因组的0.21%。分子系统学研究表明,CCTN转座子是一个新的鱼类Tc1类转座子,其与斑马鱼(Danio rerio)Tzf-28、大西洋鲑(Salmo salar)SALT1和鲽(Pleuronectes platessa)PPTN2等Tc1类转座子亲缘关系较近。
- 王全乐冀培丰徐鹏孙效文
- 关键词：转座子拷贝数
- Tgf2转座子介导鲤Fst1基因元件在鲤中的转基因效率研究被引量：7
- 2014年
- 卵泡抑素(follistatin,Fst)蛋白具有拮抗TGF-β超家族许多成员的功能,通过直接的蛋白结合可抑制肌肉抑制素(myostatin)的活性,从而恢复肌肉的生长,表现出增肌效应。参照鲤高通量转录组测序数据的拼接结果,筛选出鲤卵泡抑素Fst1基因的编码框(ORF)序列(全长1 260 bp,编码320个氨基酸),构建了包含金鱼Tgf2转座子左臂(220 bp)、右臂(185 bp)、斑马鱼Mylz2启动子和鲤Fst1基因ORF的供体质粒pTgf2-Mylz2-ccfst1。通过显微注射方法,并在体外合成的Tgf2转座酶5'加帽mRNA的介导下,获得了一批转鲤Fst1基因的转基因鲤。经PCR检测,转基因鲤Fst1外源基因的整合率平均为44.7%,对其中4尾转基因阳性鲤的扩增产物进行回收、克隆和测序验证,结果表明阳性鲤中均含有转基因目的片段。说明Tgf2转座子转基因系统可在鲤中实现较高的转座效率,为进一步研究卵泡抑素在鲤肌肉发育中的功能奠定了基础。
- 闫学春钟莎莎徐鹏邹曙明孙效文
- 两种鲤鲫杂交回交子代染色体核型分析及比较被引量：3
- 2011年
- 采用PHA和秋水仙素体内注射制备两种鲤鲫杂交回交子代鱼(鲤鲫杂交♀×德国镜鲤♂;鲤鲫杂交♀×鲤♂)的染色体。结果表明:两种鲤鲫杂交回交子代染色体组由150条染色体组成,按着丝粒位置染色体组型可分为四组,每个染色体小组均由三条同源染色体组成。其中鲤鲫杂交♀×鲤♂回交的染色体数目为3n=150,染色体臂数NF=234,其核型公式为:3n=60m+24sm+36st+30t;鲤鲫杂交♀×德国镜鲤♂回交染色体数目为3n=150,染色体臂数NF=258,其核型公式为:3n=63m+45sm+12st+30t。
- 闫学春梁利群葛彦龙
- 关键词：德国镜鲤远缘杂交回交子代染色体
- MicroRNAs对斑马鱼发育的调控被引量：5
- 2011年
- microRNAs(miRNAs)是一类长度约为22nt的非编码小RNA,从单细胞到多细胞真核生物中都广泛存在,在进化过程中高度保守,对动物发育、生理功能及病理过程都具有重要调控作用。斑马鱼(Danio rerio)是现代生物学研究中广泛使用的模式动物,以斑马鱼为模型研究miRNAs可以揭示miRNAs在脊椎动物中的功能。文章就miRNAs整体缺失对斑马鱼胚胎发育的影响及一些miRNAs在斑马鱼早期发育过程中的调控机制进行了综述,从而为探索miRNAs在脊椎动物中的功能及鱼类的生产育种提供理论基础。
- 丁雷闫学春孙效文滕春波
- 关键词：MICRORNAS斑马鱼发育
- 红色荧光蛋白基因在转基因唐鱼中遗传和表达的稳定性分析被引量：1
- 2012年
- 为了评估转红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)基因唐鱼新品系的稳定性,研究了RFP基因在不同世代转基因唐鱼中的遗传和表达情况。荧光显微镜下观察显示,RFP基因在F6和F10代所检测的组织器官中均有表达,并且两个世代间相同组织部位的表达水平相似。F6和F10代个体分别配对繁殖实验表明,RFP基因在转基因唐鱼后代中的遗传仍然符合孟德尔分离规律,而且培育出的转基因个体表型特征无显著差异。利用PCR技术在F2、F6和F10代转基因唐鱼基因组中扩增外源性肌球蛋白轻链2启动子、RFP基因编码区和整合位点上下游侧翼区域(片段总长度为4 883 bp),测序结果显示,3个世代间的外源基因序列完全相同,没有发生碱基缺失或突变等现象。研究表明,红色荧光蛋白基因在转基因唐鱼传代培育过程中保持了稳定的遗传和表达。
- 姜鹏白俊杰简清
- 关键词：唐鱼红色荧光蛋白基因
- 转基因鱼类生态安全的研究进展被引量：5
- 2013年
- 为了转基因鱼类在商业化进程中进行生态安全的评估。本研究介绍了生态安全的概念,并以两类进入到生态安全评估阶段的转基因鱼为例,从转基因鱼在模拟环境下对生态系统中生物多样性的影响和遗传改良后自身适合度的变化两方面探讨其对生态安全可能产生的影响,同时阐述了为防止转基因鱼逃逸所采取的一些应对措施。
- 吴晗姜鹏白俊杰
- 关键词：转基因鱼生态风险生物多样性适合度
- 应用RNAi技术构建的转基因鲤的检测分析被引量：3
- 2013年
- 将构建携带H1启动子的肌肉生长抑制基因的真核表达载体,通过显微注射技术导入鲤受精卵核区附近,获得了一批具有RNAi表型的转基因鲤,PCR和分子杂交检测证实外源基因整合到受体鱼的基因组中,阳性率为32.78%;一龄鱼的生长实验表明,转基因鲤比普通鲤平均生长快0.99倍,其体高和体厚分别平均增长0.22和0.26倍,其中有31.82%的群体平均体厚是普通鲤的1.6倍。结果显示,该质粒表达的发夹环型dsRNA可以有效降解其转录产物,对阻抑肌细胞中同源基因的表达、鲤肌肉的再生能力增强起到了重要作用。这种抑制作用表现为鲤背部肌肉增厚、体质量增加,说明该基因经转录产生的双链RNA在鲤体内具有RNAi效应。RNAi技术为获得具有特殊功能的转基因鲤提供了新的手段。
- 闫学春梁利群曹顶臣孙效文
- 关键词：RNAI技术
