江苏省高校自然科学研究项目(03KJD320076)
- 作品数：3 被引量：18H指数：1
- 相关作者：刘洋严玉兰步雪峰郑金旭张志坚更多>>
- 相关机构：江苏大学附属人民医院江苏大学更多>>
- 发文基金：镇江市科技支撑计划(社会发展)项目江苏省高校自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 鼠肺细胞的分离纯化及原代培养被引量：17
- 2008年
- 目的:建立一套可靠的鼠肺细胞分离、纯化和培养技术,用于体外研究间质性肺病的发病机制及治疗方法。方法:采用胰酶消化出生后2 d SD大鼠肺组织块及SD大鼠肺泡灌洗液,经差时贴壁法,分离、纯化红皮鼠肺成纤维细胞(lung fibroblast,LF)和SD大鼠肺泡巨噬细胞(pulmonary alveolar macrophage,AM),并进行原代培养。用波形蛋白(Vimentin)、CD14细胞免疫荧光染色、蛋白质印迹和电镜对所分离的细胞进行鉴定。结果:所得细胞产量大、纯度高。细胞免疫荧光染色LF细胞波形蛋白染色阳性而CD14染色阴性;AM细胞则相反。扫描电镜观察可见肺成纤维细胞有微绒毛,细胞间连接成网状,蛋白质印迹结果显示波形蛋白表达。结论:该方法是一种可靠的红皮鼠肺成纤维细胞及大鼠肺巨噬细胞的分离纯化培养技术,可用于间质性肺病(interstitial lung disease,ILD)的发病机制及治疗方法的体外研究。
- 严玉兰刘洋步雪峰张志坚郑金旭
- 关键词：肺成纤维细胞巨噬细胞原代细胞培养
- ECM支架构建肺成纤维细胞三维培养模型研究被引量：1
- 2008年
- 应用组织工程技术建立新型稳定、可靠的肺成纤维细胞(LF)三维培养模型的方法。应用细胞外基质(ECM)支架为成纤维细胞培养载体,建立成纤维细胞三维培养体系;并同时分别加入IL-13单克隆抗体、TGF-β及LPS。应用细胞荧光免疫、细胞计数及扫描电镜观察肺成纤维细胞三维培养的生长特性及相关物质对细胞生长状况的影响。在此三维培养模型中,细胞、细胞外基质以及IL-13单克隆抗体、TGF-β等调控因素共同构成一个有机整体,成纤维细胞所表达的生物学特性接近于它们在体内肺组织中的特点。本实验应用组织工程技术成功地建立了新型肺成纤维细胞三维培养体系,并研究成纤维细胞的生物学特性,是研究间质性肺病(ILD)领域里一个新的和更为科学的方法。
- 严玉兰刘洋步雪峰张志坚郑金旭
- 关键词：肺成纤维细胞IL-13TGF-Β
- 鼠肺成纤维细胞在细胞外基质支架中的生长特性
- 2009年
- 目的:研究鼠肺成纤维细胞(lung fibroblast,LF)在细胞外基质(extracellular matrix,ECM)支架中的生长特性。方法:将纤维蛋白原、层黏连蛋白和纤黏连蛋白按一定比例混合后,在新鲜大鼠血浆促凝作用下,构建单层毯状细胞外基质支架,并同时加入转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)。将原代培养并纯化传代的鼠LF植入支架,应用倒置显微镜、免疫荧光和免疫印迹方法观察鼠LF在三维培养中的生长特性。结果:鼠LF在ECM支架及加入TGF-β的支架中的细胞增殖、转化及Ⅰ型胶原合成能力均明显强于普通单层培养。结论:鼠LF在ECM支架中有良好的生长特性,为体外研究LF在肺间质纤维化中的作用提供了一种新的方法。
- 丁浩严玉兰刘洋步雪峰
- 关键词：肺成纤维细胞细胞外基质
