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重型再生障碍性贫血模型小鼠脾脏CD4＋CD25＋T细胞凋亡影响及机制研究被引量：13: 2013年; 目的探讨干扰素（IFN吖）联合白消安诱导建立的重型再生障碍性贫血（AA）模型小鼠脾脏中CD4＋CD25＋调节性T（Treg）细胞的凋亡情况以及可能的机制。方法应用IFN-γ腹腔注射联合白消安灌胃诱导建立BALB／c重型AA模型小鼠（联合组），以正常组、IFN—γ组和白消安组（各16只）为对照。采用免疫磁珠法分选各组小鼠脾脏Treg细胞，应用流式细胞术检测各组小鼠脾脏Treg细胞的分选纯度及凋亡率，通过Westernblot法检测各组小鼠脾脏Treg细胞的蛋白激酶B（Akt）和转化生长因子-β（TGF—β）的表达水平。结果联合组小鼠脾脏Treg细胞的凋亡率为（33．21±0．65）％，较正常组[（27．38±1．89）％]、IFN—γ组[（17．62±1．05）％]和白消安组[（21．58±0．64）％]升高，差异有统计学意义（P〈0．05），而Akt、TGF—D蛋白表达水平分别是0．30±0．05和0．17±0．05，较其他3组降低，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论IFN-γ联合白消安诱导的重型AA模型小鼠的脾脏Treg细胞存在过度凋亡现象，这可能是AA患者Treg细胞减少的原因之一；而Akt和TGF．B的表达水平下调可能在其过度凋亡中起一定作用，相关实验结果可能为AA免疫治疗提供新的理论思路。; 陆雯萍林赠华刘红陆伟刘海燕王旭丽; 关键词：细胞凋亡蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶

鹿龙再生汤对重型再生障碍性贫血小鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞内Foxp3表达的影响被引量：3: 2015年; 多数再生障碍性贫血（AA）由活化或功能亢进的T淋巴细胞作用于造血干／祖细胞，导致造血细胞凋亡及骨髓造血功能衰竭，而调节性T细胞（Treg）在其发病过程中起重要作用。有研究发现下调Foxp3基因，小鼠体内Treg细胞数量下降，调节功能缺陷。相关研究也表明Akt及Stat3的磷酸化水平与Foxp3蛋白的表达存在密切联系。鹿龙再生汤是我国著名老中医朱良春先生治疗AA的经验方且效果良好，但未见其细胞和分子水平的研究。本研究我们通过分析中药鹿龙再生汤对SAA小鼠模型CD4^＋CD25^＋Treg细胞Foxp3表达的影响及Akt、Stat3磷酸化水平的变化，从分子水平探讨鹿龙再生汤治疗AA可能的作用机制。; 王旭丽林赠华刘红陆伟刘海燕陆雯萍钱宇; 关键词：CD4^+CD25^+TREG细胞贫血小鼠再生汤骨髓造血功能衰竭

T-bet、GATA-3及Th1/Th2在新型重型再生障碍性贫血模型小鼠外周血中的变化被引量：1: 2013年; 目的通过测定γ干扰素(IFN-γ)联合白消安诱导的新型重型再生障碍性贫血(AA)模型小鼠外周血单个核细胞Th1/Th2比例及T-bet、GATA-3等细胞因子的表达情况,进一步论证该模型小鼠的免疫学合理性。方法应用IFN-γ腹腔注射联合白消安灌胃诱导建立BALB/c小鼠重型AA模型(联合组,n=10),以白消安灌胃联合生理盐水腹腔注射处理的为白消安组(n=10)、生理盐水灌胃联合IFN-γ腹腔注射处理的为IFN-γ组(n=10)和生理盐水灌胃联合生理盐水腹腔注射处理的为正常组(n=10)作对照,分别收集各组小鼠的外周血,采用流式细胞术检测Th1/Th2的比值,用RT-PCR技术检测各组小鼠外周血单个核细胞T-bet、GATA-3、Foxp3、TNF-α基因mRNA的表达情况。结果联合组小鼠外周血中Th1/Th2的比例、T-bet、TNF-α基因mRNA的表达及T-bet/GATA的比率较其他各组显著升高,而GATA-3基因mRNA的表达则显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。联合组小鼠外周血单个核细胞Foxp3基因mRNA的表达显著低于正常组和IFN-γ组,但高于白消安组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 IFN-γ联合白消安诱导建立的新型重型AA小鼠Th1/Th2比例及T-bet/GATA-3比率变化与AA患者相同,提示该小鼠重型AA模型可能更符合人类免疫介导的骨髓造血功能损伤,可以为今后AA的研究提供新平台。; 于晓棠徐瑞容林赠华刘红刘海燕陆雯萍张晓丽陆伟; 关键词：再生障碍性贫血 TH1 TH2 GATA-3

鹿龙再生汤对再障小鼠外周血单个核细胞及脾teff细胞T-bet和GATA-3基因表达的影响被引量：2: 2014年; 目的探讨鹿龙再生汤对再生障碍性贫血(简称再障)模型小鼠外周血单个核细胞以及脾CD4+CD25-细胞(teff细胞)中T-bet、GATA-3基因表达的影响。方法通过IFN-γ腹腔注射加白消安灌胃的方法建造40只再障小鼠模型,分别予同体积的生理盐水、一般浓度、5倍浓度和10倍浓度的鹿龙再生汤进行灌胃治疗,分别归为再障组、再障小剂量组、再障中剂量组和再障大剂量组(n=10);另取40只正常小鼠按上述方法进行分组处理,分别归为正常组、正常小剂量组、正常中剂量组和正常大剂量组(n=10)。通过骨髓活检病理学检查观察用药后各组小鼠的骨髓造血变化,免疫磁珠分选各组小鼠脾teff细胞,利用RT-PCR技术检测各组小鼠外周血单个核细胞以及脾teff细胞T-bet、GATA-3基因mRNA的表达情况。结果 (1)与再障组相比,再障中剂量组和再障大剂量组小鼠的骨髓造血有所恢复,尤其是再障大剂量组。(2)再障大剂量组小鼠的外周血单个核细胞以及脾teff细胞T-bet基因mRNA的表达、T-bet/GATA-3的比值较再障组均明显下降(P<0.05),而GATA-3基因mRNA的表达明显上调(P<0.05)。结论大剂量鹿龙再生汤可改善再障小鼠骨髓造血功能,可能是通过调节再障小鼠外周血单个核细胞及脾teff细胞的T-bet、GATA-3基因的表达来实现。; 钱宇姜胜华林赠华刘红王旭丽刘海燕孙峰; 关键词：T-BET GATA-3

鹿龙再生汤对重型再生障碍性贫血小鼠模型BFU-E和CFU-GM的影响被引量：3: 2016年; 目的 :研究鹿龙再生汤对重型再生障碍性贫血(severe aplastic anemia,SAA)小鼠模型外周血象及红系爆式集落形成单位(burst-forming unit-erythroid,BFU-E)和粒单系集落形成单位(colony-forming unit-granulocyte macrophage,CFU-GM)的影响,探讨鹿龙再生汤促进造血作用的机制。方法 :BALB/c小鼠40只通过干扰素(interferon,IFN-γ)腹腔注射联合白消安灌胃,连续用药10 d,成功诱导建立了SAA模型,然后被随机分为4组(n=10),分别设为SAA组、SAA中药小剂量组(一般浓度)、SAA中药中剂量组(正常剂量的5倍浓度)、SAA中药大剂量组(正常剂量的10倍浓度),并分别予以生理盐水及3个不同剂量的鹿龙再生汤灌胃;另取10只正常BALB/c小鼠作为正常组,予以生理盐水灌胃和腹腔注射。5 d后收集各组小鼠眼眶血检测外周血象,取小鼠骨髓单个核细胞用甲基纤维素培养,培养7 d后观察并计数的BFU-E、CFU-GM。结果 :造模后SAA小鼠外周血的白细胞、血红蛋白、血小板、网织红细胞均有降低(P<0.05),经过不同剂量的鹿龙再生汤治疗后SAA小鼠的外周血均有不同程度升高,其中中剂量的鹿龙再生汤可以明显升高SAA模型小鼠外周血白细胞和网织红细胞的计数(P<0.05)。SAA组BFU-E和CFU-GM的集落形成较正常组明显下降(P<0.05),而SAA中药中剂量组BFU-E和CFU-GM的集落形成较SAA组明显上升(P<0.05)。结论 :中剂量的鹿龙再生汤可能通过促进SAA小鼠骨髓单个核细胞BFU-E、CFU-GM的生成,从而改善外周血象,相关实验结果可能为SAA的中药治疗提供理论依据。; 朱丽林赠华刘红; 关键词：再生障碍性贫血小鼠

急性早幼粒细胞白血病ATO维持治疗的疗效及对血清TC、TG的影响被引量：1: 2018年; 目的探讨急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)采用三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)维持治疗的临床效果及其对血清TC、TG的影响。方法选取70例APL患者[纳入研究前均未经ATO或全反式维甲酸(all trans retinoic acid,ATRA)治疗],按照信封法随机分成观察组和对照组,每组35例。2组均采用ATO联合ATRA诱导治疗,观察组采用ATO维持治疗,对照组采用ATRA维持治疗,2组均维持治疗2个周期(14 d为1个周期)。比较2组患者诱导治疗后、维持治疗后1周期和维持治疗后2周期的血清胆固醇(total cholesterol,TC)和三酰甘油(triglyceride,TG)水平;比较2组患者治疗前、诱导治疗后和维持治疗2周期后的白细胞峰值、PMLRARα融合基因转阴率;维持治疗2个周期结束后随访5年,比较2组患者复发情况和生存率。结果维持治疗2周期后,2组患者血清TC、TG水平均较诱导治疗后和维持治疗1周期时显著升高(均P<0.05),而诱导治疗后、维持治疗1周期和维持治疗2周期后2组患者血清TC、TG水平比较均差异无统计学意义(均P>0.05)。诱导治疗前和诱导治疗后2组患者白细胞峰值比较差异均无统计学意义(均P>0.05);维持治疗2周期后观察组白细胞峰值显著低于对照组,PML-RARα融合基因转阴率高于对照组(P<0.01,P<0.05)。随访3年时观察组复发率低于对照组、生存率高于对照组(P<0.05),随访5年时观察组生存率高于对照组(P<0.05)。结论APL患者经ATO联合ATRA治疗完全缓解后采用ATO维持治疗可显著改善患者血脂水平,调节白细胞水平表达,提高PML-RARα融合基因转阴率,降低近期复发率和提高远期生存率。; 周志刚金玲童来根章双凤吴文忠; 关键词：急性早幼粒细胞白血病全反式维甲酸三酰甘油

γ干扰素联合白消安诱导建立小鼠重型再生障碍性贫血模型中调节性T细胞的变化被引量：7: 2013年; 目的探讨γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)联合白消安诱导小鼠重型再生障碍性贫血(以下简称再障)模型中调节性T细胞的变化与人类再障是否相同。方法采用腹腔注射IFN-γ联合胃饲白消安的方法制作小鼠重型再障模型(n=10),选取正常小鼠为对照(n=10),比较两组小鼠外周血中调节性T细胞占CD4+细胞的比例的不同,比较两组小鼠外周血单个核细胞Foxp3、TNF-α基因mRNA的表达。结果 (1)IFN-γ与白消安的联合方案诱发小鼠再障模型,至给药结束后第10天,成功率高达100%,均为典型的重型再障模型。(2)模型组外周血中CD4+细胞比例(16.09±3.66)%、CD4+CD25+Foxp3+/CD4+细胞比例(3.36±0.90)%,与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。(3)模型组小鼠外周血单个核细胞Foxp3 mRNA的表达较正常对照组低(0.66±0.03 vs 0.82±0.04,P<0.05),TNF-αmRNA的表达较正常对照组高(0.57±0.04 vs 0.38±0.03,P<0.05)。结论 IFN-γ联合白消安诱导的小鼠重型再障动物模型中调节性T细胞的变化与人类再障相同。; 周志刚吴文忠陈亚峰童来根林赠华刘红刘海燕; 关键词：Γ干扰素白消安 FOXP3

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江苏省中医药管理局科技项目(LZ11096)

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