徐州市科技计划项目(XF10C046)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 相关作者：武维恒程轶周中新更多>>
- 相关机构：徐州医学院第二附属医院徐州医学院附属医院徐州医学院更多>>
- 发文基金：徐州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 大鼠HO-1基因慢病毒载体的构建与鉴定
- 2013年
- 目的构建携带大鼠血红素加氧酶-1(HO-1)的慢病毒表达载体。方法构建HO-1基因表达质粒GV208-EGFP-HO-1,并进行测序鉴定。重组质粒GV208-EGFP-HO-1与两种辅助包装原件载体质粒通过Lipofectamine 2000共转染293T细胞,培养48 h后,收集细胞培养上清液,将病毒浓缩后测定病毒滴度。结果成功构建HO-1基因表达质粒GV208-EGFP-HO-1,转化感受态DH5ɑ大肠杆菌。挑阳性单克隆PCR得到1074 bp的特异性条带,测序结果与目标序列完全一致。将HO-1基因过表达载体质粒与另外两种辅助包装原件载体质粒共转染293T细胞后在荧光显微镜下发出明显绿色荧光。Western Blot检测观察到58 kD附近处有特征条带,其大小和目的基因融合蛋白相吻合。病毒原液滴度为2×1012TU/L。结论成功构建HO-1的慢病毒表达载体,为研究HO-1基因对缺血性心脏病的影响打下基础。
- 程轶周中新武维恒
- 关键词：HO-1基因慢病毒表达载体缺血性心脏病
- HO-1高表达对脂肪干细胞在低氧无血清条件下的保护作用及机制被引量：2
- 2014年
- 目的:探讨诱导内源性血红素氧合酶-1(HO-1)表达对脂肪干细胞(ADSCs)在低氧无血清条件下的保护作用及其可能的分子机制。方法:分离培养SD大鼠脂肪干细胞进行低氧无血清处理,DAPI染色检测细胞凋亡率;Western blotting法分析HO-1、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和cleaved caspase-1的蛋白表达;ELISA法测定培养上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)的水平;采用DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)的水平。结果:钴原卟啉诱导ADSCs HO-1蛋白呈剂量依赖性表达,以20μmol/L最为显著;诱导内源性HO-1的表达明显抑制ADSCs在低氧无血清条件下的细胞凋亡率和NLRP3、ASC、cleaved caspase-1的蛋白表达,并减少细胞内ROS和上清液IL-1β的水平;而这种保护效应可被同时给予的HO-1抑制剂锌原卟啉所逆转。结论:诱导内源性HO-1的表达可能通过抑制NLRP3炎症小体的激活以及减少IL-1β的分泌,对低氧无血清条件下ADSCs发挥保护作用。
- 周中新程轶代传忠武维恒
- 关键词：脂肪干细胞血红素氧合酶-1钴原卟啉细胞凋亡
