上海市科学技术发展基金(12140902700)
- 作品数：7 被引量：9H指数：2
- 相关作者：林矫矫傅志强洪炀曹晓丹韩艳辉更多>>
- 相关机构：中国农业科学院上海兽医研究所上海师范大学河南科技大学更多>>
- 发文基金：上海市科学技术发展基金国家自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 日本血吸虫钙调神经磷酸酶B基因的克隆表达及表达产物的免疫保护效果的评估被引量：1
- 2014年
- 为掌握日本血吸虫钙调神经磷酸酶B亚基(CNB)特性并评估其作为候选疫苗分子的潜力,采用PCR方法扩增日本血吸虫CNB基因,构建重组质粒pET-28a(+)-CNB,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,并用His-Bind亲和层析纯化获得重组蛋白rCNB。Western-blot结果显示,rCNB能被该重组蛋白免疫小鼠血清识别,具有较好的免疫原性。免疫组织化学分析表明,CNB主要分布在日本血吸虫虫体的睾丸、卵巢等生殖器官中,在表膜中也有少量分布。用重组蛋白rCNB结合ISA206佐剂免疫BALB/c小鼠,结果 rCNB诱导小鼠产生了27.93%(P<0.05)的减虫率和42.93%(P<0.01)的肝减卵率。结果表明,日本血吸虫CNB具有一定的免疫保护效果,为深入研究日本血吸虫钙调神经磷酸酶的生物学功能奠定了基础。
- 伍妙梨韩艳辉曹晓丹张旻马帅郭小勇李长健王馨茁洪炀陆珂林矫矫傅志强
- 关键词：日本血吸虫免疫保护
- 日本血吸虫章鱼胺受体基因的克隆表达及分析被引量：2
- 2013年
- 为克隆日本血吸虫章鱼胺受体(SjOAR)基因,揭示其表达情况以及表达产物的分布情况,利用PCR方法克隆了SjOAR基因。Blast分析表明,该基因与终末宿主对应的肾上腺素受体基因的同源性较低。利用大肠杆菌表达了受体蛋白的保守区段。Western-blot分析结果表明,重组蛋白能被成虫抗原抗血清识别,其特异性抗体也能识别天然受体蛋白。实时定量RT-PCR分析结果显示,SjOAR基因在血吸虫的童虫和成虫中转录差异不大。免疫组化观察显示,该受体蛋白在日本血吸虫体被下方的肌层和生殖系统中分布较多。结果表明,日本血吸虫章鱼胺受体有作为抗血吸虫药物研究靶标的潜力。
- 孟培培魏梅梅熊雅念黄莉妮艾德宙洪炀伍妙梨程相朝林矫矫傅志强
- 关键词：日本血吸虫转录
- 日本血吸虫SjIrV1的基因特性及免疫保护效果
- 2013年
- 钙结合蛋白是日本血吸虫生长发育不可缺少的蛋白,具有非常广泛而重要的功能。在课题组日本血吸虫体被表膜蛋白研究基础上,利用PCR技术克隆了中国大陆株日本血吸虫66 kDa钙结合蛋白(SjIrV1)编码基因的cDNA序列,BLAST分析与菲律宾株日本血吸虫SjIrV1 cDNA编码序列一致,荧光定量PCR分析表明该基因在童虫和成虫期不同发育阶段均有表达,其中在35 d和42 d成虫中表达量较高,在42 d雌虫中该基因表达水平远高于42 d雄虫。构建重组表达质粒pET28a(+)-SjIrV1,在大肠杆菌中成功诱导表达,重组蛋白主要以可溶性形式存在,通过高效液相色谱法(RP-HPLC)以及串联质谱法(MS/MS)鉴定所获蛋白为目的蛋白SjIrV1。蛋白质印迹(Western blotting)分析结果显示重组蛋白能被感染日本血吸虫鼠血清和免疫鼠血清所识别,SjIrV1蛋白在虫体各发育阶段中均表达。免疫荧光染色实验观察表明SjIrV1主要分布在日本血吸虫成虫的表膜。应用重组蛋白免疫BALB/c小鼠后,免疫鼠血清中检测到较高水平的特异性IgG、IgG1和IgG2a抗体。结果表明SjIrV1可能在日本血吸虫的生长发育过程中起着重要作用。
- 魏梅梅熊雅念洪炀黄莉妮孟培培艾德宙张旻傅志强刘升发林矫矫
- 关键词：日本血吸虫钙结合蛋白免疫原性免疫保护
- 日本血吸虫四跨膜孤儿受体(TOR)克隆及其第一个膜外区基因的表达被引量：3
- 2014年
- 埃及血吸虫和曼氏血吸虫四跨膜孤儿受体(trispanning orphan receptors,TOR)受体可以结合补体C2a,可能在血吸虫免疫逃避过程中起重要作用。为研究日本血吸虫TOR受体的特性和功能,利用PCR扩增到Sj TOR基因并进行了生物信息学分析;同时克隆了Sj TOR基因N端第一个膜外区(ed1)基因,构建了重组质粒p ET-28a-Sj TOR-ed1,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达后用组蛋白亲和层析纯化获得重组蛋白Sj TOR-ed1,Western blot结果显示r Sj TOR-ed1能被日本血吸虫阳性小鼠血清识别。该研究为进一步开展研究日本血吸虫TOR受体的功能提供了基础。
- 马帅韩艳辉洪炀张旻曹晓丹韩倩刘艳涛陆看马茜茜陆珂贾秉光林矫矫傅志强
- 关键词：日本血吸虫BLOT
- 日本血吸虫肌钙蛋白T(SjTnT)基因克隆表达及免疫保护效果评估被引量：1
- 2014年
- 目的克隆、表达日本血吸虫肌钙蛋白T(SjTnT)编码cDNA,评估重组抗原抗血吸虫感染的免疫保护效果。方法利用PCR技术扩增SjTnT基因,构建重组表达质粒pET28a(+)-SjTnT并诱导表达,用重组蛋白rSjTnT免疫BALB/c小鼠制备免疫血清。利用免疫印迹试验(Western blotting)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测rSjTnT诱导的免疫反应。采用rSjTnT免疫小鼠,评估其诱导的免疫保护效果。结果成功克隆、表达了日本血吸虫SjTnT基因。Western blotting显示rSjTnT能被该重组蛋白免疫小鼠血清识别,具有良好的免疫原性。rSjTnT能诱导小鼠产生高水平的特异性IgG抗体。动物免疫保护试验表明,rSjTnT能诱导小鼠产生33.89%的减虫率以及43.94%的肝脏减卵率。结论制备的rSjTnT在小鼠体内能诱导产生部分抗血吸虫感染的免疫保护效果,为评估SjTnT的生物学功能奠定了基础。
- 王馨茁洪炀韩宏晓李长健曹晓丹陆珂李浩朱传刚傅志强林矫矫
- 关键词：日本血吸虫肌钙蛋白T克隆免疫保护
- 日本血吸虫SjRAD23基因的克隆表达及基因重组抗原的免疫保护效果被引量：1
- 2014年
- 辐射敏感蛋白23具有核苷酸切除修复功能,在泛素蛋白酶体途径中起到重要作用。本研究利用PCR技术克隆了日本血吸虫辐射敏感蛋白23(Sj RAD23)编码的c DNA序列,成功获得Sj RAD23的基因序列,其ORF为1 053 bp。构建Sj RAD23基因重组表达质粒p ET28a(+)-Sj RAD23,并在大肠杆菌BL21中成功诱导表达,重组蛋白在上清和沉淀中都有存在。利用免疫组化技术检测该蛋白在虫体的分布情况,该蛋白广泛分布在日本血吸虫虫体被膜。用重组蛋白免疫BALB/c小鼠后,免疫小鼠血清中检测到较高水平的特异性Ig G、Ig G1和Ig G2a。Western blotting分析显示重组蛋白能够被日本血吸虫成虫可溶性抗原免疫小鼠血清所识别。用重组蛋白r Sj RAD23免疫结果与206佐剂对照组比较,r Sj RAD23在BALB/c小鼠中诱导了35.94%减虫率,40.59%肝脏减卵率。结果表明Sj RAD23具有作为疫苗候选分子的潜力。
- 李长健张旻洪炀韩艳辉曹晓丹韩宏晓傅志强朱传刚陆珂李浩林矫矫
- 关键词：日本血吸虫免疫保护
- 日本血吸虫dysferlin基因的克隆及重组蛋白免疫原性的分析被引量：1
- 2013年
- 为评估日本血吸虫dysferlin重组蛋白(rSjDF)的免疫原性,利用PCR技术扩增SjDF基因,构建重组表达质粒pET-28a(+)-SjDF,诱导表达重组蛋白rSjDF,并用重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备抗体。应用间接免疫荧光技术对SjDF进行蛋白组织定位。应用Western-blot、ELISA及Bio-Plex悬液芯片技术检测重组蛋白诱导的免疫反应。间接免疫荧光试验表明SjDF主要分布于血吸虫体被表膜。Western-blot结果显示rSjDF能被该重组蛋白免疫小鼠血清识别,具有良好的免疫原性。rSjDF能诱导小鼠产生高水平的特异性IgG、IgG1、IgG2a抗体和IL-2、IL-4、IL-12p70、IL-10、IFN-g等细胞因子。结果表明,制备的重组抗原能刺激小鼠产生较强的免疫反应,为筛选新的血吸虫疫苗候选分子奠定了基础。
- 熊雅念魏梅梅洪炀黄莉妮孟培培艾德宙韩艳辉傅志强林矫矫
- 关键词：日本血吸虫DYSFERLIN基因克隆免疫应答
