国家自然科学基金(30240011)
- 作品数：16 被引量：27H指数：5
- 相关作者：罗建民刘小军杨琳温树鹏杜行严更多>>
- 相关机构：河北医科大学第二医院河北医科大学美国印第安纳大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金河北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 白血病患者SHIP和其他相关基因表达及其临床意义被引量：2
- 2008年
- 目的观察含有SH2结构域的肌醇5位磷酸酶(SHIP)基因在急性白血病(AL)患者的表达,评价SHIP基因的改变在急性白血病和慢性粒细胞白血病(CML)发病中的作用以及对预后的影响。方法以半定量逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测78例AL患者、18例CML患者SHIP、半胱氨酸蛋白酶1(caspase-1)、半胱氨酸蛋白酶3(casepase-3)的表达。结果在初治的AL组中,SHIP的阳性率为69.6%,平均表达水平为0.167±0.121,其表达水平明显低于正常对照组。复发AL组中患者SHIP的表达阳性率为54.5%,平均表达水平为0.211±0.224,其表达水平明显低于正常对照组(P<0.05),较初治AL组相比表达水平低,差异无统计学意义(P>0.05)。在缓解AL组中,SHIP的阳性率为95.2%,平均表达水平为0.851±0.591,与正常对照组(1.945±1.804)相比表达水平显著降低(P<0.05);同时表达高于初治AL组(P<0.05)。半胱氨酸蛋白酶1和半胱氨酸蛋白酶3在AL mRNA的阳性率为分别为80.0%和100.0%,表达水平分别为1.785±1.168和1.887±0.838,低于正常对照组(3.345±1.284)和(5.122±2.025)(P<0.05)。CML慢性期SHIP的表达阳性率为100.0%,表达水平为0.951±0.921,低于正常对照组(1.945±1.804)(P<0.05);CML急变期SHIP mRNA表达阳性率为71.4%,表达水平为0.278±0.191,低于正常对照组(P<0.05);SHIP的表达水平在CML慢性期和急变期比较,差异有统计学意义。AL组SHIP阳性缓解率为71.0%,AL组SHIP阴性缓解率为23.1%(P<0.05)。AL组半胱氨酸蛋白酶1阳性缓解率为63.9%,AL组半胱氨酸蛋白酶阴性缓解率为25.0%(P<0.05)。运用直线相关分析表明在AL中半胱氨酸蛋白酶1、半胱氨酸蛋白酶3与SHIP的相关系数分别为r=0.372,r=0.437,P<0.05,半胱氨酸蛋白酶1、半胱氨酸蛋白酶3与SHIP表达呈正相关。结论SHIP在急性髓系白血病患者中低表达或不表达,动态观察SHIP mRNA的表达可作为预测急性髓细胞白血病(AML)疗效的一个指标。
- 贾晓辉罗建民韩颖王福旭杨琳吴景梅
- 关键词：白血病聚合酶链反应基因表达
- 慢性粒细胞性白血病中SHIP1基因的表达变化及机制探讨被引量：10
- 2008年
- 目的观察SHIP1基因在慢性粒细胞性白血病(CML)患者中的表达变化,并通过特异性小干扰RNA(siRNA)封闭K562细胞株BCR-ABL基因的表达,探讨BCR-ABL基因表达对SHIP1基因的影响。方法应用RQ-PCR方法检测CML患者骨髓、正常人外周血白细胞及白血病细胞株K562中SHIP1基因表达的差异。另取K562细胞分为3组:空白对照组(不加任何干扰成分);非特异性siRNA处理组(加非特异性siRNA);特异性siRNA处理组(加入特异性siRNA封闭BCR/ABL融合基因),应用RQ-PCR及Western blot方法分别检测3组中BCR/ABL、SHIP1基因的mRNA及其相应蛋白P210(BCR/ABL编码)、P145(SHIP1基因编码)的表达,并比较各组中表达水平的变化。结果CML患者骨髓白细胞和K562细胞中SHIP1基因的表达明显低于正常人的外周血白细胞。特异性siRNA处理组中BCR-ABL基因mRNA和P210蛋白的表达水平明显下降,SHIP1基因mRNA和P145蛋白表达水平随BCR-ABL表达下降而增加;非特异性siRNA处理组与空白组相比无明显差异。结论CML患者SHIP1基因的表达低于正常人;特异性siRNA能够抑制BCR-ABL基因的表达;BCR-ABL基因能抑制SHIP1基因及其蛋白表达。
- 刘小军罗建民杨琳温树鹏姚丽杜行严杨敬慈董作仁
- 关键词：BCR/ABL基因
- SHIP基因突变对白血病细胞系K562细胞迁移及侵袭的影响被引量：2
- 2012年
- 目的 研究含SH2结构域的肌醇磷酸酶（SHIP）基因碳末端PxxP结构域点突变对细胞体外迁移及侵袭能力的影响及其机制.方法 采用基因转染技术将携带野生型（wt）和突变型（mu）SHIP基因的慢病毒载体感染人白血病细胞系K562细胞；采用实时荧光定量PCR（FQ-PCR）和Western blot法分别在mRNA和蛋白水平检测转染后各组SHIP基因表达水平；采用Transwell小室比较K562/wtSHIP、K562/muSHIP转染后K562细胞跨膜及侵袭能力有无差别；Westem blot法比较各组细胞基质金属蛋白酶（ MMP）-2、MMP-9和磷酸化灶性黏着斑激酶（p-FAK）的表达情况,并检测各组细胞NF-KB活性改变.结果 感染慢病毒48 h后FQ-PCR和Westemblot法检测结果显示SHIP基因在K562细胞中表达明显升高；K562/wtSHIP组细胞迁移指数为（15.8±1.4）％,明显低于K562/muSHIP组[（54.3±2.4）％]和转染空载体的细胞对照组[K562/猫免疫缺陷病（pFIV）组,（50.3±3.8）％]（P＜0.01）；K562/muSHIP组与K562/pFIV组差异无统计学意义（P＞0.05）；侵袭实验显示K562/wtSHIP组迁移到碳酸脂膜的细胞[（32±6）/视野]较K562/pFIV细胞[（78±13）/视野]和K562/muSHIP细胞[（83±16）/视野]明显减低.而K562/pFIV细胞与K562/muSHIP细胞比较,在侵袭能力上差异无统计学意义（P＞0.05）.K562/muSHIP细胞p-FAK和NF-KB表达明显高于K562/wtSHIP细胞.结论 SHIP基因碳末端PxxP结构域对于SHIP基因负调节功能有重要作用.此位点发生突变通过影响FAK蛋白磷酸化、NF-KB活化以及MMP-9的表达影响K562细胞的体外迁移和侵袭能力；SH IP基因碳末端PxxP结构域点突变可能为致病性突变,可能是白血病细胞中SHIP功能异常的原因之一.
- 刘小军杨琳温树鹏姚丽杨敬慈罗建民
- 关键词：白血病基因SHIPK562细胞突变慢病毒感染
- 肌醇5’磷酸酶基因突变对K562细胞周期蛋白和Akt磷酸化的影响
- 2009年
- 目的从分子水平探讨肌醇5’磷酸酶（SHIP）基因突变对人白血病细胞系K562细胞周期及其相关基因表达的影响。方法应用携带野生型和突变型SHIP及绿色荧光蛋白的慢病毒及空载体慢病毒质粒转染K562细胞，通过流式细胞术检测K562／SHIP细胞转染效率、细胞增殖指数及细胞周期变化；MTT法检测细胞增殖活性改变，实时荧光定量PCR（FQ—PCR）检测SHIPmRNA水平变化，Western blot检测各组K562细胞SHIP、细胞周期蛋白（cyclin）D1、p21^WAF1/CIPI、p27^KIP1蛋白表达水平及Akt磷酸化变化。结果野生型SHIP基因能明显抑制K562细胞增殖，并产生明显的G0／G1期阻滞[G0／G1期细胞分别为（34．2±7．8）％和（0．7±8．3）％，P〈0．01]；但SHIP基因点突变并未影响K562细胞增殖及细胞周期改变[G0／G1期细胞分别为（33．4±4．2）％和（36．3±6．7）％，P〉0．05]。Westernblot结果发现转染野生型SHIP基因后K562细胞Akt磷酸化和cyclin D1表达水平明显下降（P〈0．01），p21^WAF1/CIPI、p27^KIP1表达增高，而突变型SHIP基因对Akt磷酸化水平和细胞周期蛋白表达几乎没有影响（P〉0．05）。结论①野生型SHIP基因通过下调K562细胞Akt磷酸化水平，进而抑制其下游cyclinD1表达，上调p21^WAF1/CIPI和p27^KIP1基因表达，导致细胞周期阻滞在G0／G1期，抑制K562细胞增殖；②SHIP基因突变体（TTC→CTC，Phe→Leu）丧失了对K562细胞的增殖抑制作用，提示SHIP基因对K562细胞增殖的负调控作用有赖于其基因结构和功能正常。
- 杨琳罗建民刘小军温树鹏杨敬慈张敬宇
- 关键词：SHIPK562细胞细胞周期细胞周期蛋白D1
- SHIP2基因在慢性粒细胞性白血病细胞的表达及意义
- 2010年
- 目的研究SHIP2基因在慢性粒细胞性白血病(chronic myelogenou leukemia,CML)中的表达及意义。方法采用定量PCR的方法分别检测43例CML患者,其中慢性期35例(包括未经格列卫治疗的慢性期患者25例;格列卫治疗者10例);加速、急变期患者8例(未经治疗)及10例健康对照中的SHIP2 mRNA表达,比较各组中表达水平的差异,并进一步分析其意义。结果 25例CML慢性期初治患者中,SHIP2基因平均水平低于正常对照组(t=7.615,P<0.01);经格列卫治疗的慢性期患者表达水平低于正常对照组(t=4.572,P<0.01),但高于初治组的表达(t=4.572,P<0.01);加速、急变期患者表达水平低于正常对照组(t=7.615,P<0.01)及初治组(t=2.104,P<0.05)的表达。结论 SHIP2在CML中的表达减低,在急变后会进一步减低可能参与了CML的发病,而应用格列卫后其表达水平增高,提示其表达可能受BCR/ABL基因的调节。
- 刘小军杨琳温树鹏郭晓静罗建民
- 关键词：慢性粒细胞性白血病格列卫急变
- 外源性SHIP基因对K562细胞周期及其相关蛋白表达的影响被引量：3
- 2009年
- 目的:探讨SHIP基因对人白血病细胞系K562细胞周期的调控作用。方法:用携带野生型SHIP基因及绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的慢病毒及空载体慢病毒转染人白血病K562细胞。FCM检测转染效率、细胞凋亡率及细胞周期变化,实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,RFQ-PCR)检测SHIPmRNA水平的变化,Western印迹法检测SHIP、cyclinD1、p21WAF1/CIPI、p27KIP1蛋白表达水平的变化。结果:与转染空载体组和未转染组相比,转染野生型SHIP基因的K562细胞增殖减慢,凋亡率明显上升(P<0.05);细胞周期显示,G0/G1期延长,G1期前出现亚二倍体的凋亡峰,S期和G2/M期比例降低;cyclin D1表达降低,p21WAF1/CIPI和p27KIP1表达增加。结论:转染野生型SHIP基因可使细胞周期阻滞在G0/G1期,抑制白血病细胞增殖,促进白血病细胞凋亡。
- 杨琳罗建民王福旭刘晓军温树鹏成志勇武学文杨晓阳
- 关键词：细胞周期细胞周期蛋白类K562细胞
- SHIP基因诱导白血病细胞株K562凋亡及其机制被引量：5
- 2009年
- 肌醇5'磷酸酶(src homology 2 domain-containing inositol-5-phosphatase,SHIP)是继PTEN之后发现的又一肌醇磷酸酶,对造血细胞增殖有关键负调控作用。目前国内外对SHIP基因与人类肿瘤抑制关系方面的研究报道较少。本研究利用携带野生型SHIP基因的慢病毒表达载体稳定感染K562细胞,应用实时荧光PCR、Western blot检测转染前后细胞内SHIP基因mRNA和蛋白水平的变化,MTT测定细胞增殖水平的变化,ELISA检测相关激酶活性,TUNEL、Hoechst33342检测细胞凋亡的变化,从而探讨SHIP基因诱导K562凋亡的机制,分析SHIP基因在白血病发病中的意义。结果如下:(1)K562细胞SHIP蛋白表达阴性;(2)携带野生型SHIP基因的慢病毒表达载体转染使K562细胞表达SHIP mRNA和蛋白;(3)与对照组相比,转染野生型SHIP基因导致K562细胞生长受抑,并出现明显的凋亡征象;(4)转染SHIP基因的K562细胞Akt磷酸化水平降低;NF-κB和bcl-xL表达降低;同时细胞促凋亡基因bad、p27表达和caspase-9、caspase-3活性明显增高。上述结果提示SHIP通过抑制PI3K/Akt路径中Akt的磷酸化,促进其下游bad、p27表达和caspase-9、caspase-3的活化,抑制bcl-xL,最终诱导白血病细胞凋亡;另外,NF-κB表达下调也是SHIP抑制白血病细胞增殖并促进细胞凋亡的重要作用机制。
- 杨琳罗建民刘小军温树鹏杜行严姚丽杨敬慈
- 关键词：SHIP细胞增殖细胞凋亡
- 外源性肌醇5′磷酸酶对K562细胞增殖及凋亡的影响
- 2009年
- 目的通过慢病毒载体介导外源性5′肌醇磷酸酶(SH2domain contaihing inositol5′-phosphatase,SHIP)基因转染K562细胞,探讨ship基因对K562细胞生长增殖的影响。方法以白血病细胞株K562为研究对象,将携带ship基因的慢病毒感染K562细胞,FQ-PCR方法检测ship转录水平,Western blot方法检测转染后SHIP蛋白表达变化;比较ship基因表达前后细胞增殖、形态的变化。结果FQ-PCR和Western blot结果显示,携带ship基因的慢病毒载体pReceiver-Lv31能高效转染K562细胞,阳性率(74.6±5.8)%;细胞生长曲线显示SHIP可显著抑制K562细胞生长,抑制率(35.0±3.1)%;集落形成实验显示SHIP能显著抑制K562细胞集落形成能力[K562/SHIP组集落形成率(36.7±7.1)%,K562/FIV组为(77.7±6.3)%,(P<0.05)];细胞形态观察发现凋亡增加,TUNEL法证实SHIP蛋白促进细胞凋亡。结论外源性ship基因表达抑制白血病细胞系K562的增殖活性,并促进其凋亡。
- 杨琳罗建民杜行严杨敬慈刘晓军温树鹏成志勇
- 关键词：慢病毒载体细胞增殖细胞凋亡
- 甲磺酸伊马替尼对K562细胞bcr/abl、SHIP-2基因表达的影响及意义
- 2010年
- 目的研究甲磺酸伊马替尼对K562细胞bcr/abl、SHIP2的表达影响及意义。方法采用定量PCR方法检测甲磺酸伊马替尼干预K562细胞后bcr/abl、SHIP2基因表达变化。采用MTT及Western blot方法分别检测细胞增殖与AKT磷酸化水平的变化。结果随着甲磺酸伊马替尼浓度增加及作用时间的延长bcr/abl基因的表达下降(P<0.01),SHIP2的表达增加(P<0.01)。Akt磷酸化水平降低,细胞增殖能力降低。结论甲磺酸伊马替尼能下调bcr/abl基因的表达;SHIP2表达可能受bcr/abl基因的调节,并可能通过调节PI3K/AKT途径影响细胞的增殖。
- 刘小军罗建民杨林武学文温树鹏
- 关键词：甲磺酸伊马替尼基因表达
- 急性白血病细胞SHIP基因的突变分析被引量：18
- 2004年
- 目的 评价SHIP基因突变在白血病发病中的作用。方法 利用逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)、单链构象多态性 (SSCP)及DNA序列分析技术检测了 4 1例急性白血病患者、5 0名正常人的骨髓或外周血标本、8株白血病细胞系SHIP基因表达及突变情况。结果 RT PCR显示所有标本中都有SHIP基因表达 ,发现 32例急性髓系白血病 (AML)患者中有 7例 (2 2 % )和 9例急性淋巴细胞白血病 (ALL)患者中有 1例 (12 % )存在SHIP基因的突变 ,其中 1例AML患者发病时标本同时存在 2个错义突变 ,而完全缓解后消失。发病时患者的白血病细胞在体外随着IL 3的刺激其Akt磷酸化明显增加。结论 首次发现急性白血病细胞中SHIP基因突变 ,提示SHIP基因的突变可能与白血病发病有关 ,在造血细胞中 。
- 罗建民刘泽林郝洪岭王福旭董作仁大野竜三
- 关键词：急性白血病基因突变AML
