深圳市农业发展专项资金农业综合开发项目(2004-33)
- 作品数：2 被引量：3H指数：2
- 相关作者：耿艺介高世同胡章立张仁利吴双更多>>
- 相关机构：深圳市疾病预防控制中心深圳大学更多>>
- 发文基金：深圳市农业发展专项资金农业综合开发项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 产A型肠毒素金黄色葡萄球菌的筛选及其重组表达被引量：2
- 2008年
- 目的分离产A型肠毒素金黄色葡萄球菌标准株,克隆和表达金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA),研究其生物学特征。方法应用PCR扩增SEA基因片段,与克隆载体pGEMT-easy连接,亚克隆到表达载体pET-28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经诱导表达和纯化重组蛋白,用重组蛋白免疫小鼠获得抗血清,进行重组蛋白免疫原性分析。结果成功克隆SEA全长基因,经DNA序列分析证实与GenBank收录序列具有100%的同源性。表达蛋白相对分子质量为31000,以包涵体形式存在。纯化、复性后获得有活性的rSEA蛋白,rSEA蛋白能够识别天然的SEA。结论SEA基因成功克隆到表达质粒内并表达,rSEA具备抗原性,为制备单抗、诊断试剂及金黄色葡萄球菌致病机制研究奠定了基础。
- 吴双张仁利耿艺介高世同胡章立
- 关键词：蛋白纯化复性
- 产肠毒素D金黄色葡萄球菌的筛选及其基因克隆和蛋白表达被引量：2
- 2008年
- 目的克隆金黄色葡萄球菌肠毒素D基因(entD),表达和纯化其重组蛋白(rSED),以进一步制备抗rSED抗体,研制SED金标免疫快速检测试纸条。方法利用PCR技术,从野生型金黄色葡萄球菌中筛选产肠毒素D金黄色葡萄球菌标准株,扩增entD基因,克隆至pGEM-T Easy载体,亚克隆至原核表达载体pET28a,重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达蛋白,Ni-NTA亲和层析纯化蛋白,免疫印迹检测抗原活性。结果分离获得1株产肠毒素D金黄色葡葡球菌标准株,成功克隆entD序列,测序表明该基因共684 bp,与其他entD序列(GenBank登陆号:M28521)具有99%的同源性。rSED蛋白在大肠杆菌中得到高效的可溶性表达。免疫印迹结果表明,rSED蛋白能被抗天然SED抗体识别。结论通过基因重组技术制备的重组SED蛋白具有良好的免疫反应性。
- 甄茵张仁利耿艺介高世同胡章立
