中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目(2012JB16)
- 作品数：5 被引量：7H指数：2
- 相关作者：陈兆国黄燕周鹏米荣升呼高伟更多>>
- 相关机构：中国农业科学院上海兽医研究所四川农业大学湖南农业大学更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目上海市科技兴农重点攻关项目国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 微小隐孢子虫CP15-P23-CP15/60基因的融合表达及其抗血清的制备
- 以微小隐孢子虫（Cryptosporidium parvum）基因组DNA为模板,PCR扩增获得子孢子表面抗原CP15、P23和CP15/60基因。利用重叠延伸PCR（SOE PCR）将该三段基因片段串联在一起,各基因片...
- 秦培兰米荣升黄燕周鹏张国恩苏庆美呼高伟曹薇陈兆国
- 关键词：微小隐孢子虫原核表达重叠延伸PCR
- 文献传递
- 微小隐孢子虫CP15-P23-CP15/60基因的融合表达及抗血清的制备
- 2012年
- 以微小隐孢子虫基因组DNA为模板,PCR扩增获得子孢子表面抗原CP15、P23和CP15/60基因。利用重叠延伸PCR(SOE PCR)将该3段基因片段串联在一起,各基因片段之间引入柔性氨基酸接头(GGGGS)编码基因。将串联基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)上,构建重组表达载体,转化到大肠埃希菌BL21(DE3)中进行诱导表达,将纯化的重组蛋白免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体。结果表明,获得了CP15-P23-CP15/60融合基因,并在大肠埃希菌中高效表达,Western blot显示重组蛋白能被牛抗微小隐孢子虫阳性血清识别,制备的多克隆抗体能被重组蛋白特异性识别,表明获得的重组蛋白具有较好的抗原性。
- 秦培兰米荣升黄燕周鹏张国恩苏庆美呼高伟曹薇陈兆国
- 关键词：微小隐孢子虫原核表达重叠延伸PCR
- 犬隐孢子虫病研究进展被引量：2
- 2013年
- 犬隐孢子虫(C.canis)广泛寄生于犬体内,也可感染人,引起犬和人的隐孢子虫病(Cryptospo-ridiosis)。近年来,随着其生物学特性及流行病学研究的深入,犬隐孢子虫逐渐引起了人们的重视。论文从病原学、寄生部位与致病性、流行病学、诊断和防治等方面阐述了犬隐孢子虫病的研究现状,为有效防治该病提供参考。
- 石凯邓俊良陈兆国米荣升黄燕周鹏
- 关键词：隐孢子虫病流行病学
- 微小隐孢子虫P23基因在毕赤酵母中的表达及初步应用
- 2012年
- 为将微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)P23基因在巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)系统中进行表达,利用表达蛋白初步建立隐孢子虫病间接ELISA诊断技术,设计引物从微小隐孢子虫基因组DNA中扩增P23基因序列,构建pPIC9K-P23重组质粒,在毕赤酵母中进行表达,用阴离子交换层析柱进行纯化。以重组P23纯化蛋白为抗原建立间接ELISA检测方法,对现场采集的猪血清样品进行检测。SDS-PAGE显示所表达的蛋白大小约为23 kDa。Western blot检测表明该蛋白能与兔抗P23蛋白血清特异性结合。用建立的间接ELISA技术对186份猪血清样品进行检测,阳性率为83.3%。本研究获得了真核表达的P23重组蛋白,初步建立了微小隐孢子虫病间接ELISA诊断技术,为隐孢子虫病的诊断和流行病学调查打下了基础。
- 黄燕米荣升周鹏曹薇杨晓娇王向佩王晓娟石凯陈兆国
- 关键词：微小隐孢子虫巴斯德毕赤酵母真核表达
- MicroRNA及其研究现状被引量：1
- 2012年
- MicroRNA（miRNA）是一类非编码的内源性小RNA分子，长度约20-25个核苷酸（nucleo-tides，nt），参与调控诸多基因的表达。miRNA的作用方式有2种：一种是通过与靶标基因mRNA的完全匹配结合，促使mRNA发生降解；另一种是通过不完全地与靶mRNA的3’非编码区（3’untrans-
- 呼高伟陈兆国程天印许娟
- 关键词：MICRORNA基因MRNA非编码区RNA分子内源性多基因
- 微小隐孢子虫三个基因主要抗原表位区的串联表达及其抗原性分析被引量：4
- 2012年
- 应用多个抗原表位预测软件对微小隐孢子虫CP15、P23和CP15/60三个子孢子表面抗原的氨基酸序列进行T细胞表位预测及分析,从中选取了三个抗原表位富集的基因片段,利用重叠延伸PCR(gene splicing by overlapping extension PCR,SOE PCR)将该三个基因片段串联在一起,各基因片段之间以柔性氨基酸(GGGGS)碱基序列链接,得到的拼接片段命名为CpTm。将目的基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)上,构建重组表达质粒pET-CpTm,并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,将纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体。结果成功地构建了CpTm串联基因并在大肠杆菌中以可溶形式高效表达,质谱分析表明重组表达蛋白包含了上述三个抗原的氨基酸序列。Western blot分析显示该重组蛋白能被牛抗微小隐孢子虫阳性血清及隐孢子虫鼠基因型CP15、P23、CP15/60基因重组表达蛋白免疫兔血清识别,制备的抗血清能被重组蛋白特异性识别,表明表达的重组蛋白具有较好的反应原性和免疫原性,为多表位疫苗的研制奠定了基础。
- 秦培兰李艳米荣升呼高伟黄燕周鹏张国恩苏庆美曹薇陈兆国
- 关键词：微小隐孢子虫抗原表位重叠延伸PCR抗原性
