国家自然科学基金(81372759)
- 作品数：5 被引量：18H指数：3
- 相关作者：陈忠汪成合叶章群张庆松杨为民更多>>
- 相关机构：华中科技大学同济医学院附属同济医院上海交通大学附属第六人民医院华中科技大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 小分子双链RNAs联合应用抑制膀胱癌细胞增殖的实验研究被引量：2
- 2016年
- 目的在膀胱癌细胞系T24和EJ细胞中转染两种不同的人工合成小分子双链RNA(dsRNA),观察联合应用与分别单独应用两种dsRNA对膀胱癌细胞生长的影响。方法根据对膀胱癌细胞的处理不同分为:1阴性对照组(dsControl)、dsP21-322组、dsP21-555组和dsP21-322+dsP21-555组;2dsControl组、dsP21-322组、dsP53-285组和dsP21-322+dsP53-285组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测各组细胞p21 mRNA及细胞周期依赖性激酶CDK4、CDK6mRNA的表达;蛋白印迹法(Western blot)检测P21蛋白和CDK4、CDK6蛋白的表达;细胞增殖实验检测转染后细胞增殖能力;集落形成实验检测单个细胞克隆增殖能力。结果qPCR结果显示,与dsControl组相比,dsP21-322组、dsP2l-555组和dsP53-285组均分别上调T24和EJ细胞中p21mRNA的表达(P<0.01);而与单独转染dsP21-322、dsP2l-555相比,同时转染dsP21-322+dsP21-555,差异无统计学意义(P>0.05)。与dsControl组相比,dsP53-285能够上调p53基因的表达(P<0.05);与单独转染dsP53-285相比,p53 mRNA表达在同时转染dsP21-322和dsP53-285组中差异无统计学意义(P>0.05)。与单独转染dsP21-322、dsP53-285相比,dsP21-322+dsP53-285能够显著增加p21 mRNA的表达(P<0.05)。与dsControl相比,转染dsP21-322、dsP53-285分别使T24和EJ细胞中CDK4、CDK6 mRNA的表达下调(P<0.05);与单独转染dsP21-322、dsP53-285相比,CDK4/6mRNA的表达在dsP21-322+dsP53-285组中明显被抑制(P<0.05)。Western blot检测结果验证了组间p21和CDK4/6基因表达的差异。细胞增殖实验结果显示,同时转染dsP21-322和dsP53-285比单独转染抑制膀胱癌细胞增殖能力更明显。细胞集落形成实验中,dsP21-322+dsP53-285组中形成的集落数量显著少于单独转染组。结论同时转染dsP21-322和dsP53-285能够显著抑制膀胱癌细胞的增殖。
- 张庆松李传昌陈忠李凡袁慧星杨为民
- 关键词：膀胱肿瘤P21
- 不同启动子相关双链小分子RNA介导激活p21 Waf1/Cip1 基因研究被引量：3
- 2015年
- 目的探讨针对p21基因启动子序列不同转录起始位点设计的小双链RNA（dsRNA）对p21基因表达的正向调控作用。方法针对p21基因启动子DNA序列设计合成4对dsRNA分子dsP21．382、dsP21-436、dsP21-484、dsP21—625，转染人体外培养的人膀胱肿瘤细胞株5637细胞及T24细胞中，并以具有激活功能的dsRNA分子dsP21—322作为阳性对照，以未转染的5637和T24细胞为空白对照，以dsControl为阴性对照。采用实时定量聚合酶链反应（Real-timePCR）和Westernblot等观察各dsRNA转染后，细胞内p21基因mRNA及蛋白表达量的差异，以及dsRNA转染对肿瘤细胞株生长的影响。结果PCR结果显示，与空白对照组比较，dsP21—382、dsP21-436、dsP21-484、dsP21-625分别上调5637细胞中p21mRNA的表达1．56、1．88、2．41和1．74倍（P〈0．05），dsP21-382、dsP21-436、dsP21-484、dsP21-625分别上调T24细胞中021mRNA的表达1．71、1．69、2．62和1．85倍（P〈0．05）。Westernblot结果显示，与空白对照组比较，p21蛋白表达的升高与021mRNA水平的升高一致。4对dsRNA均能显著抑制膀胱肿瘤细胞株的生长。结论dsRNA对基因表达正向调控作用可能是一种普遍现象。
- 龚化陈忠盖强强汪成合李凡叶章群
- 关键词：P21基因
- 人工合成小分子双链RNA通过激活P21蛋白对膀胱癌细胞生长的影响被引量：7
- 2016年
- 目的通过转染人工合成的小分子双链RNA（dsRNA）dsP21-555至膀胱癌细胞系T24和EJ，观察其对膀胱癌细胞生长的作用。方法根据对膀胱癌细胞的不同处理分为3组：阴性对照组[转染随机序列（dsContr01）]，阳性对照组（转染相应的微小RNA即miR-370）和实验组（转染dsP21．555）。实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）检测3组细胞p21mRNA及细胞周期依赖性激酶（CDK）4、CDK-6mRNA的表达；Western印迹法检测P21蛋白和CDK4、CDK6蛋白的表达；流式细胞术测定转染后细胞周期分布；细胞增殖实验检测转染后细胞增殖能力；集落形成实验检测单个细胞克隆增殖能力。结果qPCR结果显示，与转染dsControl相比，转染dsP21—555分别上调T24和EJ细胞中p21mRNA表达至2．46倍（P〈0．01）和2．60倍（P〈0．01）；转染dsP21—555与转染miR-370相比，p21mRNA表达差异无统计学意义（均P〉0．05）。与转染dsControl相比，转染dsP21-555分别使T24和EJ细胞中CDK4mRNA的表达下调43％（P〈0．01）和54％（均P〈0．01），CDK6mRNA的表达下调39％（P〈0．01）和36％（P〈0．01）；转染dsP21—555与转染miR-370相比，CDK4、CDK6mRNA的表达差异无统计学意义（P〉0．05）。Western蛋白印迹检测结果验证了组间p21和CDK4、6基因表达的差异。流式细胞术检测显示，与转染＆Control相比，转染miR-370或dsP21—555后，G0／G1期细胞比例明显升高，而S期和G2／M期细胞比例减少，细胞周期被阻滞在G0／G1期。细胞增殖实验结果显示，与转染dsControl相比，转染miR-370或dsP21-555后细胞增殖能力明显下降（均P〈0．05），且转染miR-370与转染dsP21-555间细胞增殖能力差异无统计学意义（P〉0．05）。细胞集落形成实验显示，转染miR-370和dsP21—555形成的集落数量均较转染dsControl少。结论dsP21—555能通过RNA激活作用激活P21蛋白的表达并显著抑制膀胱癌细胞的生长。
- 盖强强汪成合陈忠张庆松杨为民叶章群
- 关键词：微RNASP21
- 小分子非编码RNA基因激活研究进展被引量：2
- 2014年
- RNA 激活（RNA activation,RNAa）是一种独特的小分子非编码 RNA（ncRNA）对基因表达的正向调控机制。2006年 Li 等在研究针对基因启动子DNA 序列的小双链 RNA（dsRNA）分子对基因表达的调控过程中,发现特定序列的 dsRNA 可以特异性地将某些沉默或低表达基因激活,其将这个现象称之为“RNA 激活暠,具有激活功能的 dsRNA 分子称之为小激活 RNA （saRNA）,并予以首次报道。
- 陈忠
- 关键词：DSRNA基因激活小分子基因表达基因启动子DNA
- 微小RNA-1236和外源性小分子双链RNA激活膀胱癌细胞p21表达作用的比较被引量：6
- 2016年
- 目的人工合成与微小RNA（miRNA，TniR）-1236所作用的p21基因启动子靶序列完全互补配对的4对小分子双链RNA（dsRNA）：dsP21-242、dsP21-243、dsP21-244和dsP21-245（dsP21-243序列配对程度最高），分别观察其与miR-1236在激活人膀胱癌细胞株T24和EJ细胞中抑癌基因p21表达能力的差异。方法参照小激活RNA（saRNA）的设计原则设计合成4对dsRNA。分别转染阴性对照组（dsContr01）、阳性对照组（miR-1236）和实验组（dsRNA）至T24和EJ细胞，通过实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）、反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Westernblot分别检测p21mRNA和蛋白表达的水平。结果FQ-PCR检测结果显示实验组中仅dsP21-245能明显促进两种细胞中p21mRNA水平的升高；且与阴性对照组比较，dsP21-245分别上调T24和EJ细胞中p21mRNA的表达至2．32倍（P〈0.01）和2．84倍（P〈0．01）；与阳性对照组比较，两种细胞株中p21mRNA的表达差异均没有统计学意义（P〉0．05）。RT-PCR检测结果证实了p21mRNA表达变化的趋势。Westernblot结果显示在两种细胞株中p21蛋白表达水平的升高与p21mRNA水平的上调一致。其余3对dsRNA均未能显著上调两种细胞株中p21基因的表达（P〉0．05）。结论人工合成的dsP21-245能显著促进膀胱癌细胞中p21的高表达，且与miR-1236激活p21表达的能力差异无统计学意义。
- 盖强强汪成合陈忠张庆松杨为民叶章群
- 关键词：微小RNA双链RNAP21膀胱癌
