广东省科技计划工业攻关项目(2010B031100006)
- 作品数：3 被引量：11H指数：2
- 相关作者：许银峰江丽黄喜军朱昭炜朱庆棠更多>>
- 相关机构：中山大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 携带增强型绿色荧光蛋白的慢病毒载体转染大鼠脂肪干细胞被引量：5
- 2014年
- 目的探索脂肪干细胞（ADSCs）的标记方法，观察增强型绿色荧光蛋白（EGFP）阳性ADSCs（EGFP—ADSCs）的体外活性、干细胞特性及体内短期活性。方法用携带增强型绿色荧光蛋白（eGFP）基因的慢病毒载体（Lv-eGFP）在感染复数（MOI）为0、1、5、25、50、100时，转染SD大鼠ADSCs12h，荧光显微镜及流式细胞仪检测转染效率和荧光强度；Mrrr法评价转染后细胞活性；EGFP—ADSCs分别行成脂分化及油红O检测、成骨分化及茜素红染色；将EGFP—ADSCs注射到去细胞神经构建组织工程化神经，修复大鼠坐骨神经缺损，术后1周取材进行冰冻切片观察细胞在体内存活情况。结果转染4d后，EGFP阳性率及荧光强度达到高峰；EGFP基因表达不随细胞传代而消失。MOI=0、1、5、25、50、100时，EGFP阳性转染率分别为0．13％、31．09％、75．33％、92．66％、96．70％、98．38％。实验组阳性率与对照组（MOI=0）选择相比，差异均有统计学意义（P〈0．05）；MOI=25、50、100时，组问阳性率差异无统计学意义（P〉0．05），但与MOI=1、5比时差异（P〈0．05）。MTT试验观察10d内MOI=25、50、100组细胞增值活性与非转染细胞差异无统计学意义（P〉0．05）。选择MOI=25作为最佳转染滴度进行后续实验。转染后ADSCs成骨、成脂分化20d，茜素红染色见橘红色钙沉积，油红O染色见橙红色脂滴。1周冰冻切片观察细胞于体内呈梭形，均匀分布。结论慢病毒载体转染EGFP基因不影响ADSCs活性及成骨成脂分化能力，能为组织工程化神经修复缺损提供示踪种子细胞的方法。
- 李绍磊刘云江牛晓峰许银峰易建华杨有优江丽
- 关键词：脂肪干细胞转染绿色荧光蛋白慢病毒载体周围神经
- 去细胞异种神经复合同种异体脂肪干细胞修复猕猴周围神经缺损的免疫反应研究被引量：6
- 2012年
- 目的观察去细胞异种神经复合同种异体脂肪干细胞修复猕猴周围神经缺损后的全身及局部免疫排斥反应,评价该修复材料的安全性。方法健康成年雄性长白猪1只,体重48 kg,取胫神经制备去细胞异种神经;健康成年雄性猕猴1只,体重4.5 kg,分离培养脂肪干细胞;健康成年雌性猕猴10只,体重3～5 kg,制备25 mm长桡神经缺损动物模型,随机分为复合细胞组和无细胞组(n=5),前者采用去细胞异种神经复合第3代脂肪干细胞移植修复,后者采用去细胞异种神经移植修复。于术前及术后14、60、90 d抽取外周静脉血行淋巴细胞分析;术后5个月取材观察移植物组织免疫反应和神经再生情况,并与自体神经移植组作比较。结果复合细胞组与无细胞组术前及术后各时间点外周静脉血淋巴细胞数量、T淋巴细胞百分率及其数量、CD8+T淋巴细胞百分率、CD4+/CD8+T淋巴细胞比值间比较,差异均无统计学意义(P>0.05);术后14 d,复合细胞组CD4+T淋巴细胞百分率低于其余时间点,差异有统计学意义(P<0.05);同一时间点两组间比较,除术后14 d复合细胞组CD4+T淋巴细胞百分率低于无细胞组,差异有统计学意义(P<0.05)外,其余各时间点各指标组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。术后5个月,去细胞异种神经与周围组织有轻度粘连,神经外膜较自体神经厚,未见组织坏死、纤维瘢痕形成,移植物内见再生神经纤维,复合细胞组、无细胞组均有稀疏的CD3+、CD4+、CD8+、CD68+、CD163+T淋巴细胞散在分布,细胞浸润情况与自体神经移植组类似。结论去细胞异种神经移植修复猕猴周围神经缺损后未产生全身及局部免疫排斥反应;复合同种异体脂肪干细胞移植后也未发现免疫排斥反应,且术后早期可能抑制CD4+T淋巴细胞增殖。
- 黄喜军朱庆棠江丽郑灿镔朱昭炜路庆森许银峰顾立强刘小林
- 关键词：脂肪干细胞异种移植同种异体移植猕猴
- 灵长类动物桡神经缺损修复模型的功能学评价
- 2013年
- 目的 探讨灵长类动物桡神经缺损修复后功能学的评价方法.方法 解剖3只猕猴桡神经,建立5只猕猴双侧桡神经25 mm缺损的模型,分别用自体神经（A组）及去细胞猪神经（B组）桥接神经缺损（5侧/组）.术后观察猕猴一般情况及伸腕活动;于术前、术后1周、术后5个月,诱导、测量并计算术后累积最大伸腕角度（DEmax）和伸腕角度恢复率（R）以评价神经功能的修复效果.结果 桡神经在桡侧腕长伸肌第一肌支发出点以近可显露长度为52 ～ 62 mm,直径为3.3～4.1 mm;术后猕猴即时出现垂腕、垂指畸形,一般情况好,术后5个月A、B组DEmax和R的均值分别为120°、96°和99％、69％.结论 该模型安全、简便,可动态、定量评价神经功能恢复情况.
- 黄喜军朱庆棠江丽郑灿镔朱昭炜胡军何波路庆森许银峰
- 关键词：周围神经损伤神经再生猕猴
