广西壮族自治区自然科学基金(0542035)
- 作品数：4 被引量：13H指数：2
- 相关作者：蒋和生杨学明张立何荆洲郭亚芬更多>>
- 相关机构：广西大学广西水产研究所贵港扬翔饲料有限公司更多>>
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- 革胡子鲶生长激素基因克隆与序列同源分析被引量：8
- 2008年
- 应用RT-PCR技术从革胡子鲶(Clarias lazera)脑垂体RNA中扩增出生长激素(growth hormone,GH)基因cDNA片段,并克隆到质粒载体pMD18-T,鉴定测序。克隆的革胡子鲶GHcDNA开放阅读框全长603bp,编码由200个氨基酸残基组成的生长激素前体。5个科7种鲶形目鱼类GH基因序列同源比较结果表明,7种鲶形目鱼类间GH基因序列的同源性很高,平均为92.4%,大口鲶和鲶之间的同源性最高,为98.5%,革胡子鲶和鲶之间的同源性最低,为89.4%。并据此构建了鲶形目鱼类间的系统进化树,聚类分析结果与鲶形目鱼类传统的分类进化地位基本一致。
- 杨学明张立黄光华何荆州朱佳杰蒋和生
- 关键词：革胡子鲶生长激素基因克隆
- 革胡子鲶生长激素成熟肽cDNA克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：2
- 2008年
- [目的]构建革胡子鲶生长激素基因原核表达体系。[方法]采用PCR方法,扩增得到了革胡子鲶生长激素基因成熟肽的cDNA序列,将该序列克隆至原核表达载体pRSET-A,构建重组质粒pRSET-mGH,并在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中进行表达。[结果]革胡子鲶生长激素成熟肽cDNA序列全长534 bp,编码1个由178个氨基酸残基组成的生长激素成熟肽,分子量为20.28 kDa,等电点为5.93。SDS-PAGE和Western blot分析表明,表达的目的融合蛋白分子量为27.41 kDa,主要以非可溶性的包涵体形式存在于菌体沉淀中。目的融合蛋白的表达量高达细菌沉淀蛋白总量的36.8%。[结论]该研究为革胡子鲶生长激素的产业化开发和应用奠定了基础。
- 杨学明何荆洲张立黄雄军郭亚芬蒋和生
- 关键词：革胡子鲶生长激素成熟肽CDNA克隆原核表达
- 革胡子鲶GH成熟肽在大肠杆菌中表达条件的优化被引量：1
- 2010年
- 将携带革胡子鲶(Clarias lazera)生长激素(GH)成熟肽cDNA序列的重组表达载体pRSET-mGH转化入大肠杆菌Escherichia.coliBL21(DE3)pLysS中进行融合蛋白的表达。表达条件优化试验表明,表达菌株接种SOB培养基,培养2-3h后可用IPTG进行融合蛋白诱导表达;IPTG最佳诱导浓度为1.5 mmol/L,最佳诱导时间为4 h。本试验构建的原核表达体系为下一步革胡子鲶生长激素促生长制剂的研制奠定了基础。
- 杨学明何荆洲张立黄雄军郭亚芬蒋和生
- 关键词：革胡子鲶生长激素
- 革胡子鲶生长激素cDNA克隆与蛋白质结构分析被引量：5
- 2008年
- 从革胡子鲶(Clarias lazera(Burchell))的脑垂体组织中提取总RNA,应用RT-PCR方法,扩增得到了革胡子鲶生长激素(Growth hormone,GH)基因cDNA的开放阅读框(Open reading frame,ORF)序列。ORF全长为603nt,编码由22个信号肽氨基酸和178个成熟肽氨基酸共同组成的生长激素前体蛋白。序列同源比较结果表明,研究中得到的革胡子鲶生长激素氨基酸序列与GenBank中已报道的其他6种鲶形目鱼类的氨基酸序列同源性高达95.8%。二级结构预测分析结果表明,革胡子鲶生长激素蛋白中含有α螺旋、β折叠和β转角以及无规卷曲等二级结构,以α螺旋为主,是典型的α型结构蛋白质。此外,抗原性分析表明,在氨基酸序列中的4个区域均可形成优势抗原表位,其结构特点非常适合改造成为重组生长激素疫苗或单克隆抗体制剂加以开发利用。
- 杨学明何荆洲黄雄军李芳芳郭亚芬蒋和生
- 关键词：革胡子鲶生长激素CDNA克隆
