国家自然科学基金(30370661)
- 作品数：7 被引量：16H指数：2
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- 血管紧张素Ⅱ与其介导的蛋白质酪氨酸激酶JAK2信号通路在缺血再灌注肾损伤时小管上皮细胞逆向分化中的作用
- 2009年
- 目的探讨血管紧张素（Ang）Ⅱ与其介导的蛋白酪氨酸激酶JAK2信号通路在急性缺血再灌注肾损伤模型中发生的肾小管上皮细胞逆向分化的作用机制。方法（1）建立Wistar大鼠急性缺血再灌注肾损伤模型，采用放射免疫法检测肾脏局部AngⅡ的水平变化，采用免疫组织化学ABC法和RT—PCR，观察间充质细胞表面标记α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达。（2）模拟高、中、低浓度的肾素-血管紧张素系统（RAS）环境，体外观察培养的肾小管上皮细胞（NRK-52E）逆向分化的情况。（3）先后阻断AngⅡ受体（AT2R）及其介导的AngⅡ信号转导通路的JAK2，研究AngⅡ与JAK2通路对肾小管上皮细胞逆向分化的影响。结果（1）肾脏缺血再灌注损伤后0、24、48、72、96、120h，局部AngⅡ含量持续增高，分别为（406．7±106．1）、（463．0±112．9）、（526．6±128．3）、（649．5±131．5）、（875．g±150．2）、（980．8±155．2）ng／L，P〈0．05。（2）缺血再灌注后48h，肾小管上皮细胞开始表达α-SMA mRNA及蛋白质。（3）高浓度（10^-7mol／L）AngⅡ刺激可诱导体外培养的肾小管上皮细胞表达α—SMA，且呈剂量和时间依赖性。10^-9mol／L浓度AngⅡ刺激30min时，α-SMA表达水平最高。无论是阻断AT2R抑或JAK2信号通路，肾小管上皮细胞表达α-SMA均明显受到抑制。结论急性缺血再灌注损伤时肾小管上皮细胞可向间充质细胞逆向分化，局部RAS启动与其密切相关。AngⅡ可能通过AT2R及其介导的JAK2信号通路促发肾小管细胞的逆向分化。
- 姜傥周青松皮蕾黄彬
- 关键词：肾小管肾素-血管紧张素系统蛋白酪氨酸激酶类
- 肾小管上皮间充质转化细胞模型中WT1和Pax2重新表达的研究被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨肾小管上皮间充质转化(EMT)细胞模型中胚胎发育基因WT1和Pax2的重新表达及其规律,并研究上调表达外源性WT1对肾小管上皮细胞株(NRK52E)的影响。方法:采用10 ng/ml IL-1α刺激体外培养的NRK52E细胞,建立EMT细胞模型。采用脂质体转染技术,将pRc/CMV-D-WT1质粒瞬时转染NEK52E细胞。分别提取EMT细胞模型和质粒转染组不同时间点细胞的RNA和蛋白质,采用RT-PCR和Western blot检测NEK52E细胞WT1、Pax2、上皮细胞标志E-cadherin和间充质标志α-SMA的表达,研究基因表达的时效性变化规律,并观察细胞的形态。结果:成功建立EMT细胞模型,该模型中E-cadherin的表达显著减少,α-SMA的表达显著增多,细胞发生明显的成纤维化样改变。在EMT细胞模型中,出生后关闭的WT1和Pax2获得重新表达,且Pax2的表达早于α-SMA和WT1。在NEK52E细胞中上调表达WT1,细胞表达α-SMA,不表达Pax2,同时E-cadherin的表达显著减少,细胞出现成纤维化样改变。结论:Pax2和WT1基因是EMT中的关键基因,在EMT发生时呈序列启动,Pax2在EMT中处于WT1上游。胚胎发育基因WT1和Pax2的重新表达可能是EMT的重要机制。
- 黄彬姜傥皮蕾滕军旗
- 关键词：基因表达上皮间充质转化肾小管上皮细胞
- RNAi干扰WT1和Pax2表达对逆转肾小管上皮间充质转化的作用被引量：2
- 2011年
- 【目的】探讨抑制肾小管上皮间充质转化(EMT)过程中胚胎发育关键基因WT1和Pax2的表达对EMT的逆转作用。【方法】采用RNAi技术分别抑制WT1和Pax2。分别构建pshRNA-WT1和pshRNA-Pax2表达载体,采用脂质体转染技术,使质粒瞬时转染NEK52E细胞后用10ng/mLIL-1α刺激细胞,分别提取不同时间点细胞的RNA和蛋白质,采用RT-PCR和Western blot检测细胞WT1、Pax2、Snail、上皮细胞标志E-cadherin和间充质标志α-SMA的mRNA和蛋白质的表达,并观察NRK52E细胞的形态。【结果】构建的pshRNA-WT1和pshRNA-Pax2表达载体可在转染细胞内发挥RNAi作用抑制WT1和Pax2基因的表达,抑制率分别为80.4%和82.7%。分别抑制WT1和Pax2基因后EMT过程受阻,α-SMA和Snail的表达显著减少,E-cadherin的表达无显著性变化,细胞形态未发生明显的成纤维化样改变。【结论】WT1和Pax2基因是EMT中的关键基因,分别抑制胚胎发育关键基因WT1和Pax2均可使EMT受阻。阻断WT1和Pax2的表达有望中止EMT及肾纤维化的发生。
- 黄彬姜傥皮蕾滕军旗
- 关键词：RNAI上皮间充质转化肾小管上皮细胞
- pax2基因在肾小管上皮细胞转分化中的作用被引量：8
- 2007年
- 目的探讨pax2基因在大鼠慢性肾小管间质纤维化过程中的表达及其对肾小管上皮细胞转分化的可能作用。方法大鼠5/6肾切除造模,分别于术后2、4、6、8、10、12周取左肾皮质,采用逆转录(RT)-PCR及免疫组织化学的方法检测模型组和正常对照组的pax2和-αSMA的表达。结果病变组织见系膜细胞和基质增生,间质炎症细胞浸润,基底膜变厚。5/6肾切除模型组大鼠在术后第2周出现pax2mRNA的强表达,第4周达高峰,与正常对照组比较P<0.05,此后下降至痕量表达;α-SMA mRNA也在术后第2周表达逐渐增强,第8周达高峰,与正常对照组比较P<0.05,此后逐渐下降。免疫组织化学染色显示,5/6肾切除模型组pax2蛋白的表达、肾小管上皮细胞中α-SMA的表达与pax2mRNA、α-SMA mRNA的表达趋势相同。结论在大鼠慢性肾间质纤维化的过程中,受损的肾小管上皮细胞可向肌成纤维细胞转分化,肾小管发育胚胎基因pax2在此过程中的一过性表达可能起到重要的作用。
- 皮蕾姜傥欧阳涓周青松崔颖鹏黄彬
- 关键词：肾小管间质纤维化转分化
- 胚胎分化/发育基因pax2与WT1的序列启动在肾小管上皮细胞逆向分化中的意义被引量：1
- 2009年
- 目的:通过观察肾小管上皮细胞(TEC)胚胎分化/发育关键基因Wilm s肿瘤基因(WT1)和pax2的序列启动,探讨TEC逆向分化的分子机制及病理生理学意义。方法:从胚胎肾、肾脏损伤模型及体外细胞培养3方面入手,通过RT-PCR、免疫组织化学等技术,研究TEC逆向分化时,胚胎期控制TEC分化/发育的关键基因pax2和WT1的表达、pax2和WT1之间的关系以及它们与TEC逆向分化间的关系。结果:(1)胚胎期:pax2和WT1mRNA先后在胚胎11.5 d及14 d时开始出现表达并逐渐增强,出生14 d后仅有痕量表达。免疫组化显示,成年大鼠中仅肾小球足突细胞表达WT1,TEC中pax2和WT1表达阴性。(2)5/6慢性肾损伤模型:损伤第2周,部分TEC重新出现pax2和WT1的表达,第4周达高峰,两者表达趋势相吻合。pax2在第10周尚有一个新的表达高峰,随后逐渐下降至痕量。(3)TEC体外培养:经炎性因子IL-1α(10μg/L)、AngII(10-9mol/L)掺入培养后,TEC分别在0.5、24 h内重新表达pax2和WT1,随后α-SMA出现高表达,细胞呈现间充质样细胞特征。以WT1中和抗体、An-gII受体阻断剂封闭WT1和pax2基因的作用后,α-SMA表达水平明显降低,细胞基本保持原有特征不变。结论:控制胚胎肾分化/发育的关键基因pax2和WT1在成年肾遭受损伤时,可获得重新表达,呈现序列启动现象,TEC同时出现胚胎间充质细胞特征;pax2和WT1的重新表达与细胞浸浴环境(高浓度细胞因子)密切相关,可能作为内在启动机制参与TEC的逆向分化。
- 姜傥皮蕾袁飞周青松黄彬
- 关键词：肾小管上皮细胞基因PAX2基因WT1
- HSP 90在原发性肾病综合征发生和治疗中的意义被引量：3
- 2006年
- 【目的】热休克蛋白90(HSP90)是糖皮质激素受体(GR)的伴侣蛋白,本研究探讨HSP90在原发性肾病综合征(INS)发生和糖皮质激素(GC)在治疗中的作用本质。【方法】以INS患者和GC敏感、抵抗的细胞株为研究对象,分析其HSP90、GR表达水平及HSP90的亚细胞分布;并采用HSP90特异性阻断剂研究HSP90对GC反应性的影响。【结果】与对照组比较,INS患者HSP90mRNA表达水平明显增高;而且INS患者中GC抵抗组HSP90mRNA表达显著高于GC敏感组(P<0.05)。深入研究发现对照组的HSP90主要分布在细胞浆中,核内仅有微量分布;INS患者的HSP90表达有所增加,并且GC抵抗组与敏感组比较,HSP90明显趋向细胞核内分布(P<0.001)。用HSP90特异性阻断剂后发现激素敏感细胞株的GC反应性也显著下降(P<0.01)。【结论】研究表明HSP90的异常表达及亚细胞分布变化可能是导致GC抵抗的重要机制,其一方面可能影响内源性GC对神经-内分泌-免疫网络的功能调节,进而影响机体免疫内环境的稳定,从而参与INS等免疫损伤性疾病的发病;另一方面则可能干预患者对外源性GC的治疗反应,影响临床疗效。
- 欧阳涓姜傥谭敏崔颖鹏李晓艳
- 关键词：热休克蛋白90分子伴侣受体糖皮质激素
- 表现为急性肾衰竭的IgA肾病11例临床与病理分析被引量：1
- 2005年
- 目的:探讨IgA肾病并发急性肾衰竭(ARF)的临床与病理特点。方法:回顾分析11例IgA肾病并发ARF的临床与病理资料。结果:(1)本组11例IgA肾病患者并发ARF ,占我院同期IgA肾病的1.2 8% (11/86 0 ) ;(2 )本组患者7例患者以浮肿、少尿为首发症状,3例以反复肉眼血尿为主诉、1例以恶性高血压为主要症状,6例患者蛋白尿≥2 .0g/d ;(3)肾活检示系膜增生性肾炎7例、新月体肾炎1例、增生硬化性肾炎伴新月体形成1例,余2例为IgA肾病的基础上伴发急性肾小管间质性肾炎。(4)本组资料中8例患者行激素加MP/CTX冲击治疗,4例予以单纯对症处理;8例肾功能恢复正常,1例肾功能部分缓解,2例患者肾功能进展行维持性透析治疗,总有效率为81.8%。结论:IgA肾病并发ARF发生率不低,病理可表现为多种病理类型,病理改变轻,预后好,多数患者肾功能可以恢复正常。
- 周建中姜傥关伟明董秀清黄锋先
- 关键词：急性肾衰竭IGA肾病病理学肾小球肾炎过敏性紫癜
