“十一五”国家科技支撑计划(2006BAD06A04-6)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：罗俊游雷鸣王爱萍张改平郅玉宝更多>>
- 相关机构：郑州大学河南省动物免疫学重点实验室河南省农业科学院更多>>
- 发文基金：“十一五”国家科技支撑计划河南省基础与前沿技术研究计划项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 鸡源细胞基因沉默及快速筛选的实用型双标记RNAi载体被引量：1
- 2011年
- 利用人H1 RNA启动子、EGFP基因及Neomycin抗性基因,构建用于禽类细胞基因持续沉默和快速筛选的实用型RNAi载体。在将pCDNA3.1(+)载体上的SV40启动子替换为鸡源的β-actin启动子后,装入EGFP基因表达框以及用于驱动外源shRNA转录的人H1 RNA启动子,构建成同时具有EGFP和Neomycin抗性双标记的RNAi载体,并为载体引入独特设计的含媒介序列的多克隆位点以方便外源shRNA编码小片断插入后的快速筛选,载体设计非常实用。插入靶向EGFP和sIgMλ基因的shRNA编码序列后分别瞬时转染DF-1和DT40细胞,结果显示靶基因表达得到了明显抑制。联用EGFP和Neomycin双标记快速筛选sIgMλ轻链基因稳定沉默的DT40细胞克隆的结果也证实,H1启动子转录shRNA的干扰效果是高效的,双标记筛选策略不仅有效而且方便、快捷。
- 李培培游雷鸣罗俊鄂魏蒋志政郅玉宝张改平王爱萍
- 关键词：EGFPRNAI载体
- DT40细胞sIgMλ轻链基因敲除载体的构建
- 2009年
- 从鸡B淋巴DT40细胞系中克隆-βactin启动子,替换pCDNA3.1(+)载体中的SV40启动子,构建-βactin启动子驱动的Neomycin抗性基因表达框。将克隆的sIgMλ轻链基因两侧各约2 kb的序列插入到抗性表达框的两侧作为同源臂。PCR、酶切以及测序结果表明成功构建了靶向sIgMλ轻链基因的置换型打靶载体pCDNA-act-neo-HR。为建立sIgMλ轻链基因敲除的DT40细胞模型,探究sIgMλ轻链在IBDV感染DT40细胞过程中的作用奠定了基础。
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- 关键词：基因敲除同源重组
