山西省科技攻关计划项目(20090311057-4)
- 作品数：5 被引量：24H指数：2
- 相关作者：边云飞卫娜李俊男任俊峰杨慧宇更多>>
- 相关机构：山西医科大学第二医院山西医科大学山西省妇幼保健院更多>>
- 发文基金：山西省科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 肿瘤坏死因子受体2突变载体对巨噬细胞炎症反应的影响
- 2013年
- 目的探讨肿瘤坏死因子受体超家族1B(TNFRSF1B)196位基因多态性(T突变为G)与巨噬细胞TNF/TNFR2信号通路介导炎症反应的相关性。方法运用基因重组技术构建真核表达载体pcDNA6.0-TNFR2196Met和pcDNA6.0-TNFR2196Arg,采用脂质体转染法分别转染至巨噬细胞中,转染48 h后使用杀稻瘟菌素抗性筛选4周,建立稳定转染细胞系。将酶消化法培养的巨噬细胞分为四组:空白对照组、pcDNA6.0空质粒组、pcDNA6.0-TNFR2196Met组及pcDNA6.0-TNFR2196Arg组。采用酶切及测序法鉴定重组质粒,RT-PCR检测肿瘤坏死因子受体2(TNFR2)、cIAP1、cIAP2mRNA的变化;Western blot检测p-JNK、cIAP1、cIAP2、TNFR2及核因子κB(NF-κB)的蛋白表达;ELISA检测细胞上清液可溶性TNFR2(sTNFR2)、白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素6(IL-6)水平。结果酶切测序结果显示成功构建了TNFR2基因196Met和196Arg表达载体。转染到巨噬细胞后,与空白对照组和pcDNA6.0空质粒组比较,pcDNA6.0-TNFR2196Arg组、pcDNA6.0-TNFR2196Met组TNFR2、cIAP1、cIAP2、IL-1β、IL-6和p-JNK的表达增高(P<0.05);与pcDNA6.0-TNFR2196Met组比较,pcDNA6.0-TNFR2196Arg组TNFR2、cIAP1、cIAP2、IL-1β、IL-6和pJNK的表达明显降低(P<0.05),TNFR2196Arg介导的NF-κB活性显著降低。结论成功构建稳定表达TNFR2196Met、TNFR2196Arg载体,TNFR2突变通过TNF/TNFR2信号通路介导炎症反应,可能是参与慢性炎症性疾病的作用机制。
- 岳莉英卫娜白瑞杨慧宇王敏边云飞
- 关键词：巨噬细胞炎症反应
- 肿瘤坏死因子受体2编码基因重组质粒的构建及意义
- 2012年
- 目的 构建真核表达质粒pcDNA6.0-TNFR2^196MET和pcDNA6.0-TNFR2^196ARG.方法 人工合成TNFR2196MET目的 片段,与pMD18-T simple 载体连接形成克隆载体,再通过设计突变引物,PCR定点突变扩增出含有突变位点的质粒,转化到肠埃希菌感受态细胞JM109中,通过氨苄青霉素抗药性筛选出成功转化的阳性克隆,并进行扩增.抽提质粒进行测序鉴定,得到pMD18-T simple-TNFR^2196ARG.双酶切pMD18-T simple-TN-FR^2196MET、pMD18-T simple-TNFR^2196ARG及pcDNA6.0,将TNFR^2196MET、TNFR^2196ARG插入pcDNA6.0线性质粒,即构建成pcDNA6.0-TNFR^2196MET和pcDNA6.0-TNFR^2196ARG真核表达质粒,转化到Ecoli感受态中,筛选阳性克隆行菌液PCR和双酶切及测序鉴定.结果 酶切鉴定和测序分析验证TNFR2基因196MET和196ARG表达载体构建成功.结论 成功构建表达载体为下一步心血管疾病研究奠定了实验基础.
- 卫娜白瑞车星星王泽慧肖传实边云飞
- 关键词：突变心血管疾病
- 肿瘤坏死因子受体2基因多态性与冠心病分型的相关性分析被引量：1
- 2012年
- 目的研究肿瘤坏死因子受体2基因6号外显子rs1061622(+676)位点的基因型及血浆可溶性肿瘤坏死因子受体2与冠心病临床分型及其危险因素的关系,分析两者与冠心病分型的相关性。方法选取经冠状动脉造影证实为冠心病的患者250例,其中稳定型心绞痛54例、不稳定型心绞痛110例、急性心肌梗死86例;同时选取我院正常体检者98例作为对照组。记录所有研究对象的病史、体格检查、辅助检查、冠状动脉造影结果等临床资料。采用聚合酶链反应-连接酶检测反应的方法检测各组肿瘤坏死因子受体2(+676)位点的等位基因及基因型频率;应用酶联免疫吸附法测定各组血浆可溶性肿瘤坏死因子受体2水平。同时结合其基因型综合分析冠心病各临床分型与血浆可溶性肿瘤坏死因子受体2水平、基因型的关系及肿瘤坏死因子受体2基因型与血浆可溶性肿瘤坏死因子受体2间的关联度。结果 (1)肿瘤坏死因子受体2(+676)位点上有3种基因型,即TT、TG和GG型;(2)在冠心病组,肿瘤坏死因子受体2(+676)位点GG基因型频率(6.8%)高于对照组(4.1%),差异有统计学意义(P=0.008);冠心病组G等位基因频率高于对照组(χ2=3.993,P=0.046);(3)稳定型心绞痛组T/G等位基因频率与不稳定型心绞痛组、急性心肌梗死组相比差异有统计学意义(P<0.05),不稳定型心绞痛组与急性心肌梗死组相比差异无统计学意义;(4)在冠心病组中,血浆可溶性肿瘤坏死因子受体2水平显著高于对照组,差异有统计学意义,冠心病组3种基因型血浆可溶性肿瘤坏死因子受体2水平与对照组比较有统计学差异,但对照组和冠心病组中血浆可溶性肿瘤坏死因子受体2水平与各自的基因型和等位基因无明显关联;(5)TG+GG基因型的患者空腹血糖、总胆固醇、收缩压水平与TT基因型患者相比差异无统计学意义,且患冠心病的风险是TT型的1.648倍。结论肿瘤坏死因子受�
- 卫娜李俊男任俊峰肖传实边云飞
- 关键词：基因多态性冠心病
- 冠心病患者血浆TNF-α与CK-MB、LDH、cTnI水平及冠脉病变的相关性分析被引量：18
- 2012年
- 目的研究分析冠心病患者血浆肿瘤坏死因子(TNF-α)与冠脉病变及心肌酶学指标的相关性,探讨其临床意义。方法从山西医科大学第二临床医院选取经冠状动脉造影证实为冠心病的患者60例,其中稳定型心绞痛(SA)12例,不稳定型心绞痛(UA)31例,急性心肌梗死(AMI)17例,另设对照组28例。用酶联免疫吸附(ELISA)法测定各组血浆TNF-α浓度,用免疫标记法测定肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)及肌钙蛋白I(cTnI)浓度;Gensini积分法对冠脉狭窄程度进行定量评价,并分析TNF-α与冠脉病变程度的相关性。结果冠心病组血浆TNF-α、CK-MB、LDH浓度显著高于对照组(P<0.05);AMI组TNF-α、CK-MB、LDH、cTnI水平明显高于对照组、SA组和UA组(P<0.01);UA组TNF-α、CK-MB水平明显高于对照组和SA组(P<0.05),LDH水平明显高于SA组(P<0.01),TNF-α水平明显高于对照组(P<0.05),LDH水平明显低于对照组;SA组CK-MB水平与对照组比较差异无统计学意义。Gensini积分与TNF-α呈正相关(P<0.01);AMI组TNF-α与CK-MB、LDH、cTnI呈正相关(P<0.01)。结论冠心病患者血浆TNF-α炎症因子的水平明显升高,随冠脉病变的严重程度增高而增高,提示冠心病患者体内已存在炎症反应,TNF-α在其发病机制中起一定作用,可作为冠心病炎症活性的独立指标。CK-MB、LDH、cTnI反映心肌损伤及坏死的程度,联合评估两种指标的水平对于临床估计冠心病的危险程度具有重要的意义。
- 卫娜李俊男任俊峰边云飞
- 关键词：肌酸激酶同工酶肌钙蛋白I
- 联合左旋甲状腺素对难治性心力衰竭合并低T3综合征的治疗效果观察被引量：5
- 2014年
- 难治性心力衰竭又称顽固性心力衰竭,是指慢性心力衰竭（CHF）经规范治疗2 周以上,病情不见好转甚至有恶化倾向者.近年来CHF 患者甲状腺素的异常及临床意义引起了重视及关注[1].临床发现CHF 患者三碘甲状腺原氨酸（T3）水平有不同程度的降低,心力衰竭越重,T3降低越明显,但患者并无明显甲状腺功能减退的症状, 随着心力衰竭的纠正,T3逐渐回升,因此甲状腺激素水平的变化逐渐成为研究者和临床工作者的研究方向,而针对一些CHF 伴有低T3、四碘甲状腺原氨酸（T4）综合征患者中小剂量应用甲状腺素进行试验治疗取得了较好疗效[2].本研究旨在观察小剂量甲状腺素治疗难治性心力衰竭伴低T3、T4 综合征患者临床疗效及安全性.
- 王利荣杨慧宇边云飞
- 关键词：难治性心力衰竭低T3综合征左旋甲状腺素甲状腺激素水平三碘甲状腺原氨酸顽固性心力衰竭
