重庆市自然科学基金(2007BB5034)
- 作品数：1 被引量：4H指数：1
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- 小鼠IL-17A-GST融合蛋白的克隆表达被引量：4
- 2009年
- 目的:构建含有小鼠IL-17A(mIL-17A)基因的重组原核表达载体,获得高效表达mIL-17A的基因工程菌,以及较高产量的mIL-17A蛋白。方法:以PMA活化后小鼠脾脏单个核细胞的总RNA逆转录合成的cDNA为模板,PCR法扩增mIL-17A的编码序列,并分别亚克隆至pMD18-T载体和原核表达载体pGEX-4T-1中,经酶切和DNA测序鉴定后,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,产物经SDS-PAGE及Westernblot鉴定。结果:PCR产物大小及其双酶切鉴定均证明所克隆的基因是mIL-17A,DNA序列测定进一步证实与GenBank报道的序列完全一致。成功构建了重组原核表达载体pGEX-4T-1/mIL-17A,并在大肠杆菌中高效表达出相对分子质量(Mr)约40000的具有可溶性的融合蛋白,且Westernblot证实确为目的蛋白。结论:成功构建了基因重组体pGEX-4T-1/mIL-17A;并制备出可溶性IL-17A-GST融合蛋白。
- 张阳张晋渝石云赵卓刘晓斐庄园张卫军郭刚邹全明
- 关键词：白细胞介素-17GST融合蛋白可溶性表达
