国家自然科学基金(81072663)
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
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- 4-肼基苯磺酸特异性抑制SHP-2激活突变的乳腺癌细胞增殖
- 2013年
- 目的研究4-肼基苯磺酸对SHP-2激活突变的乳腺癌MDA-MB-231细胞株增殖的特异性抑制作用,为新型抗乳腺癌药物的开发提供些许参考。方法不同浓度的4-肼基苯磺酸处理SHP-2激活突变的MDA-MB-231细胞,用MTT法检测细胞的增殖。结果 4-肼基苯磺酸对乳腺癌MDA-MB-231细胞株的增殖有明显抑制作用,并呈剂量依赖性;同时对SHP-2低活性的对照组细胞无明显作用。结论 4-肼基苯磺酸可特异性地抑制SHP-2激活突变的乳腺癌MDA-MB-231细胞的体外增殖,这种抑制效果应是通过特异性抑制SHP-2异常增高的磷酸酶活性来实现的。
- 刘振邦汪思应
- 关键词：乳腺癌MDA-MB-231
- 白血病相关的激活突变SHP-2对小鼠体内血管新生能力的影响被引量：2
- 2012年
- 目的研究激活突变SHP-2对小鼠体内血管新生的影响，以进一步研究其在肿瘤发展过程中的作用。方法利用SHP-2D61G激活突变敲入（knockin）模型及WT（wildtype）小鼠，局部皮下注射含成纤维细胞生长因子（FGF）、血管内皮生长因子（VEGF）的基质胶）（Matrigel BasementMembraneMatirx），诱导血管新生，用比色法检测基质胶内血红蛋白（HB）的含量代表血管密度，用血细胞计数仪检测相应小鼠外周血HB浓度用以标准化基质胶内HB含量；并用免疫病理学方法检测基质）胶（Matrigel）内血管内皮细胞密度（CD31阳性）；用Transwell方法检测小鼠胚胎成纤维细胞（mouse embryonic fibroblasts，MEFs）迁移能力。结果SHP-2D61G杂合突变的小鼠（SHP-2D61G／＋）体内注射的基质胶栓内HB含量明显高于WT组（P〈0．01），CD31阳性细胞也明显增多，SHP-2D61G突变小鼠MEFs迁移能力明显增强（P〈0．01）。结论SHP-2D61G激活突变可能促进小鼠体内血管新生，这种促进作用可能与细胞迁移能力增强有关。
- 杨金莲杨帆郑红瞿成奎汪思应
- 关键词：SHP-2血管新生小鼠
- SHP-2酪氨酸磷酸酶野生、突变型真核表达载体构建及其表达产物磷酸酶活性检测被引量：3
- 2012年
- 目的构建pcDNA3.1 SHP-2野生型(WT)及SHP-2D61G突变型(MT)真核表达载体,为研究SHP-2激活突变对肿瘤恶性生物学行为的影响提供基础。方法用RT-PCR及定点突变法从小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)中扩增出目的片段,双酶切后定向连入pcDNA3.1载体,构建pcDNA3.1SHP-2野生型及SHP-2D61G/+真核表达质粒,经酶切、测序检测其构建的准确性;Western blot法检测转染NIH3T3细胞中SHP-2蛋白的表达水平;免疫共沉淀法获得表达在NIH3T3细胞中的SHP-2蛋白,用pNPP法检测其磷酸酶活性。结果构建的pcDNA3.1 SHP-2野生型及SHP-2D61G突变质粒经酶切初步检测后,测序检测发现MT SHP-2在181位核苷酸由WT的G突变为T,转染NIH3T3细胞株能够表达SHP-2蛋白;且转染MT的NIH3T3细胞株内SHP-2磷酸酶活性较WT组升高2倍(P<0.01)。结论成功构建了pcDNA3.1SHP-2野生型及SHP-2D61G突变型真核表达载体,SHP-2D61G突变的蛋白磷酸酶活性升高。
- 胡中倩汪心怡李菲菲储著朗邢小翠李娟查欣瞿成奎汪思应
- 关键词：SHP-2蛋白酪氨酸磷酸酶真核表达突变
