重庆市自然科学基金(2007BB5077)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 相关作者：王海燕蒋建新白云王凯黄钢更多>>
- 相关机构：第三军医大学大坪医院第三军医大学更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 人pri-miR-155重组腺病毒的制备及其表达与活性鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的制备表达人成熟miR-155的重组腺病毒,检测该免疫调控分子在肺癌细胞A549的表达及其生物学活性。方法以正常人基因组DNA为模板,PCR扩增约1000bp完整的pri-miR-155基因序列,克隆到T载体pTA2上,测序证实后,正向亚克隆入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建pAdTrack-CMV/pri-miR-155重组质粒,与pAdEasy-1腺病毒骨架质粒重组并扩增后转染293FT细胞,进行重组腺病毒的包装、扩增,对其进行安全性、滴度的测定。用此腺病毒感染A549细胞,采用RT-PCR法检测成熟miR-155的表达,双报告基因法检测其干扰活性。结果构建的人pAdTrack-CMV/pri-miR-155重组质粒经酶切及测序鉴定正确;用此腺病毒感染A549细胞后,RT-PCR检测成熟miR-155表达较无关序列病毒感染对照组显著增强。腺病毒感染A549细胞后,通过转染后双报告基因检测相对萤光素酶活性较对照组降低,显示此腺病毒感染A549细胞后,可有效表达成熟miR-155,并具有生物学活性。结论成功制备人pri-miR-155重组腺病毒,并在感染肺腺癌细胞A549后高效表达成熟有活性miR-155。
- 黄钢王海燕王凯蒋建新白云
- 关键词：MIR-155重组腺病毒免疫调控
