国家自然科学基金(30370656)
- 作品数：19 被引量：143H指数：8
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- 血管紧张素Ⅱ灌注诱导nephrin表达改变与足细胞凋亡被引量：15
- 2007年
- 目的研究血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）灌注对大鼠足细胞裂隙膜分子nephrin表达及足细胞凋亡的影响，以及探讨AngⅡ引起蛋白尿及肾小球硬化的机制。方法36只雄性Sprague Dawley大鼠分为AngⅡ灌注组（400ng·kg^-1·min^-1）、生理盐水灌注组和正常对照组，测定28d内大鼠血压及尿蛋白。分别于14、28d处死动物取肾，观察组织学改变，并用免疫荧光、免疫电镜检测nephrin分布。RT-PCR及Western印迹法分别检测nephfin mRNA及蛋白表达。TUNEL法检测足细胞凋亡。结果（11AngⅡ灌注组大鼠血压升高，14d达峰值并维持该水平至28d；AngⅡ灌注7d即出现蛋白尿，并持续增加。（2）AngⅡ灌注14d时，足细胞裂隙膜变窄；灌注28d时，足突增宽及节段性融合，部分足细胞有凋亡小体形成，少数肾小球出现节段性硬化。TUNEL法检测发现足细胞凋亡[（2．7±1．6）个／肾小球切面]，凋亡数与蛋白尿量呈正相关（r=0．86，P〈0．01）。（3）AngⅡ灌注14d时，肾皮质nephrin mRNA及蛋白表达上调（P〈0．05）。nephfin由正常的沿毛细血管袢线状分布向粗颗粒、团块状分布模式转变。AngⅡ灌注28d时，肾皮质nephrin mRNA及蛋白表达下降（P〈0．05），且nephfin蛋白表达与足细胞凋亡数呈负相关（r=-0．63，P〈0．01）。结论AngⅡ灌注诱导的nephrin表达及分布改变可能导致了足细胞凋亡及肾小球硬化的发生与发展。
- 贾俊亚朱吉莉丁国华陈铖梁伟杨红霞
- 关键词：蛋白尿足细胞凋亡
- 舒洛地特对糖尿病高血压大鼠足细胞podoealyxin表达的影响被引量：25
- 2009年
- 目的研究舒洛地特对糖尿病高血压大鼠的肾脏保护作用和足细胞podocalyxin（PCX）表达的影响。方法链脲佐菌素（STZ）注射后，醋酸脱氧皮质酮（DOCA）＋盐建立糖尿病高血压大鼠模型。设对照组（CTL组）、模型组（STZ＋DOCA组）、舒洛地特治疗组（GAG组）和舒洛地特＋替米沙坦治疗组（GAG＋ARB组），每组各6只大鼠。于建模后0、2、4、6和8周测尾动脉压、尿白蛋白和8周末尿N-乙酰-β-葡萄糖苷酶（NAG）。8周末取血检测胰岛素、血肌酐（Scr）、胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、Na^＋、K^＋。HE、PAS染色观察病理改变和。肾小球正切面足细胞计数。免疫组织化学检测podocalyxin在肾小球表达和分布。RT—PCR和Western印迹法检测podocalyxinmRNA和蛋白表达。结果（1）GAG＋ARB组4周末血压显著低于STZ＋DOCA组和GAG组（P〈0．05）。GAG组和GAG＋ARB组TG、TC和胰岛素与STZ＋DOCA组差异无统计学意义。（2）6周末GAG＋ARB组尿白蛋白量显著低于STZ＋DOCA组[（52．9±7．6）mg／24h比（102．2±6．9）mg／24h，P〈0．05]；8周末GAG组和GAG＋ARB组尿白蛋白量均显著低于STZ＋DOCA组（P〈0．05），而GAG＋ARB组尿白蛋白量显著低于GAG组[（33．8±6．8）mg／24h比（85．2±8．7）mg／24h，P〈0．05]。GAG＋ARB组和GAG组尿NAG均显著低于STZ＋DOCA组（P〈0．05）。（3）GAG组和GAG＋ARB组肾小球硬化指数（GSI）和间质纤维化指数（IF）均显著低于STZ＋DOCA组（P〈0．05），各组肾小球正切面足细胞数差异无统计学意义。（4）与STZ＋DOCA组相比，GAG组PCXmRNA和蛋白表达显著增加，而GAG＋ARB组PCX表达显著高于GAG组。结论舒洛地特可通过增加足细胞podocalyxin表达，减轻糖尿病高血压大鼠蛋白尿和病理损伤，与替米沙坦联用有叠加作用。
- 梁伟余碧影丁国华李珍杨红霞
- 关键词：足细胞舒洛地特替米沙坦PODOCALYXIN
- 全反式维甲酸对糖尿病大鼠足细胞损伤的保护作用被引量：21
- 2006年
- 目的探讨全反式维甲酸(ATRA)对糖尿病大鼠足细胞损伤的保护作用。方法24只链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠模型,随机分为糖尿病组(DM)和治疗组(T)各12只,另以12只正常大鼠作为对照组(N)。T组给予ATRA 20 mg·kg-1·d-1灌胃。于第4、8周末检测各组大鼠尿蛋白定量(24 h)、Cer、肾重/体重、尿中足细胞以及肾脏病理改变。结果DM组尿蛋白定量(24 h)、Ccr、肾重/体重、尿中足细胞数[8周时,0．84(0．60～1．50)个/ml]均显著高于同期N组[0．03(0-0．15)个/m1],而肾小球足细胞数(8周时,11．27±2．15)显著低于同期N组(14．07±2．07),且足细胞足突增宽、融合。T组尿蛋白定量(24 h)、Cer、肾重/体重、尿中足细胞数较同期DM组显著降低[0．46(0．25～0．70)个/ml],且病理改变减轻。结论ATRA可以减少糖尿病大鼠尿足细胞的排泄、降低尿蛋白,对肾脏足细胞损伤具有保护作用。
- 黄金平陈星华丁国华梁伟陈铖贾俊亚杨红霞
- 关键词：糖尿病肾病足细胞维甲酸
- 血管紧张素Ⅱ通过抑制AKT/蛋白激酶B磷酸化诱导肾小管上皮细胞凋亡被引量：6
- 2005年
- 目的观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)在诱导肾小管上皮细胞凋亡的信号传导是否有磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-AKT信号系统的参与,及该系统在诱导细胞凋亡中的作用。方法大鼠肾小管上皮细胞株NRK-52E分别与终浓度为0(对照组)、10-9mol/L、10-8mol/L、10-7mol/L、10-5mol/LAngⅡ共培养24h。用流式细胞仪检测细胞凋亡指数,用免疫组化方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。Western印迹检测PI3K及磷酸化AKT和总AKT蛋白表达,AKT的磷酸化水平用473位丝氨酸磷酸化AKT(AKT-ser473)水平与总AKT水平的比值表示。结果随着AngⅡ浓度的增加,10-6mol/LAngⅡ组与对照组相比,凋亡指数显著增加[(22.7±1.41)%比(3.0±0.75)%,P<0.01]。而10-9mol/LAngⅡ组与对照组相比,PCNA指数显著增强[(47.54±2.6)%比(22.63±2.5)%,P<0.01]。与对照组相比,PI3K-p85蛋白的表达随AngⅡ浓度增加表现为先激活后抑制。AKT的磷酸化具有明显的AngⅡ浓度依赖性,随AngⅡ浓度的增加而逐渐受到抑制,并与细胞凋亡指数呈显著负相关(r=-0.90,P<0.01)。结论AngⅡ可以诱导肾小管上皮细胞凋亡并抑制细胞的增殖,可能部分是通过抑制PI3K-AKT信号传导途径实现的。
- 朱吉莉丁国华王学玉
- 关键词：肾小管上皮细胞PI3K凋亡磷酸化蛋白激酶B负相关
- 肾脏中肾素-血管紧张素系统的生理和病理生理作用被引量：22
- 2008年
- 肾脏中肾素．血管紧张素系统（RAS）在肾脏生理功能的调节中有重要作用。近年来，肾脏RAS的新成分及新作用机制不断被发现。转基因动物研究使肾脏血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）在血压及水钠平衡调节中的作用进一步阐明；AngⅡ的非血流动力学作用已经确立；血管紧张素转换酶2（ACE2）及Ang 1～7对肾功能的调节作用也已得到认可。肾素／前肾素特异性受体、ACE的信号转导功能，以及AT1受体的转激活功能等，已成为肾脏生理科学研究的热点。这些研究对于人们认识肾脏局部RAS功能，探讨延缓慢性肾脏病的进展的治疗策略具有重要意义。
- 贾俊亚丁国华
- 关键词：肾脏肾素-血管紧张素系统信号转导
- 依普利酮对醛固酮灌注大鼠肾小球细胞凋亡的影响被引量：1
- 2008年
- 目的观察醛固酮（ALD）灌注对大鼠肾小球细胞凋亡的影响和ALD特异性拮抗剂依普利酮（Eplerenone）的干预作用。方法18只雄性SD大鼠随机分为空白对照组（A组），ALD灌注组（B组）和Eplerenone治疗组（C组），分别皮下埋置渗透性微泵（osmotic minipumps），B、C组均以1．5μg h的浓度持续灌注ALD，同时C组用Eplerenone（100mg·kg^-1·d^-1）灌胃，A、B组用生理盐水代替。隔周测量大鼠尾动脉收缩压，收集24h尿液测定尿蛋白排泄率（UAER），于第28天心脏取血检测血肌酐（SCr），取肾脏，光镜观察其病理改变，TUNEL法检测细胞凋亡。结果B组大鼠血压和UAER从第14天起均较同期A组显著增高（P〈0．05），C组血压和UAER较同期B组显著降低（P〈0.05）。PAS染色发现B组大鼠肾小球系膜外基质增多，轻度系膜细胞增殖；TUNEL法检测发现B组大鼠肾小球细胞凋亡明显增加，C组凋亡率较B组显著减少[（16．36±1．84）％vs（49．55±5．67）％，P〈0.05]。结论ALD灌注大鼠可导致肾小球病理损伤和细胞凋亡，Eplerenone可减轻ALD诱导的肾小球损伤。
- 任志龙梁伟胡凤琪丁国华杨红霞
- 关键词：醛固酮肾小球凋亡依普利酮
- 血管紧张素Ⅱ输注诱导大鼠足突滤孔膜改变增加蛋白尿产生被引量：5
- 2007年
- 目的:通过直接输注血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的方法观察大鼠尿蛋白及足细胞足突和裂孔结构损伤的变化,分析这些改变与足细胞裂孔膜蛋白nephrin表达改变的相互关系。方法:Wistar大鼠随机分为两组,AngⅡ组通过皮下埋置渗透性微泵(osmotic minipump)以400 ng/(kg.min)持续给予AngⅡ,对照组由生理盐水代替AngⅡ。大鼠每周检测24 h尿蛋白并收集肾组织标本,连续4周。电镜观察并计算肾小球足突宽度。Nephrin蛋白和mRNA检测分别应用免疫荧光及RT-PCR的方法。结果:AngⅡ组大鼠在第1周即出现蛋白尿,且与对照组相比具有显著性差异(P<0.05),并且随试验的进展蛋白尿逐渐增加。肾小球形态学显示在第1周时肾小球基底膜被拉伸变薄,裂孔膜宽度增加,nephrin表达增加;至第2周可见足细胞足突数量明显增多,单位长度基底膜上的裂孔数量增加,同时观察到nephrin的表达较对照组明显增加(P<0.05);到第3,4周时,随着足细胞进一步损伤,基底膜出现有不规则增厚和裸露,足突出现部分的融合和足突裂孔膜的消失,nephrin的表达逐渐下降至低于对照组水平。结论:AngⅡ可以直接导致足细胞结构完整性的破坏,引起蛋白尿,并与肾小球内nephrin的表达密切相关。表明在某些肾小球疾病或损伤中,足突裂孔膜结构和蛋白表达异常是蛋白尿产生的主要原因。
- 朱吉莉丁国华陈铖贾俊亚
- 关键词：足细胞足突蛋白尿
- 抑制Smad7的表达对肾小管上皮细胞的影响被引量：1
- 2005年
- 目的:本研究旨在观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导肾小管上皮细胞Smad7表达变化,以及对其凋亡及增殖的影响。方法:大鼠肾小管上皮细胞株NRK-52E分别与终浓度为0(对照组)、10-6mol/L、10-7mol/L、10-8mol/L、10-9mol/LAngⅡ共培养24h。通过AnnexinV-FITC/PIKit用流式细胞仪检测细胞凋亡指数,用免疫组化的方法检测增殖性细胞核抗原(PCNA)和Smad7蛋白的表达,RT-PCR检测Smad7mRNA的表达水平。结果:随着AngⅡ浓度的增加,10-6mol/LAngⅡ组与对照组相比凋亡指数显著增加,分别为(27.06±1.14)%vs(3.09±0.73)%(P<0.001)。与对照组相比,Smad7的表达在含有AngⅡ组中均呈现出低表达水平,并在一定范围内随AngⅡ浓度的增加而逐渐受到抑制,并与细胞凋亡指数成负相关(r=-0.82,P<0.05)。结论:AngⅡ可以抑制肾小管上皮细胞Smad7的表达,同时促进细胞凋亡,二者具有密切关系。
- 朱吉莉丁国华陈铖尤燕舞
- 关键词：细胞凋亡肾小管SMAD7SMAD7蛋白增殖性细胞核抗原细胞凋亡指数
- 不同降压药对醛固酮输注大鼠足细胞损伤的影响被引量：1
- 2008年
- 目的研究醛固酮（ALD）对肾小球足细胞的损伤作用并探讨醛固酮拮抗剂依普利酮（EPL）、氨氯地平（CCB）和替米沙坦（ARB）对ALD所致损伤的影响及机制。方法30只SD大鼠被随机分为对照组（CTL组）、ALD输注组以及ALD输注并用EPL、CCB或ARB治疗组。以1．5μg／h输注ALD造模，用EPL（100mg·kg-1·d-1）、CCB（10mg·kg-1·d-1）和ARB（3mg·kg-1·d-1）分别灌胃治疗。检测28d内血压及尿白蛋白排泄率（UAER）。于28d处死动物，检测血浆ALD、AngⅡ、血钾、钠、Scr；观察。肾脏光镜和电镜病理改变；TUNEL法检测细胞凋亡；免疫组化和RT—PCR法检测nephrin表达。结果（1）与CTL组相比，ALD组大鼠7d时血压开始升高，28d达高峰（P〈0．01）；EPL组血压和15AER均显著低于同时间点ALD组（P〈0．01）；CCB组UAER显著高于同时间点EPL组，但与ALD组差异无统计学意义。（2）ARB组血浆AngII水平显著高于ALD组、CCB组和EPL组（P〈0．01）。（3）ALD组肾小球出现系膜细胞增殖、系膜外基质增多、足突融合和微绒毛化等病理改变。EPL组肾小球损伤评分和凋亡率显著低于ALD组、CCB组和ARB组（分别P〈0．05，P〈0．01）。（4）ALD组nephrinmRNA和蛋白表达均高于CTL组，EPL组nephrin蛋白和mRNA表达低于ALD组（P〈0．01）。结论ALD输注可诱导肾小球足细胞损伤。CCB和ARB能显著降低血压，但不能减轻ALD所致损伤。EPL可通过非血流动力学作用部分阻断ALD的损伤效应。
- 梁伟陈铖丁国华石明石晶任志龙胡凤琪杨红霞
- 关键词：醛固酮足细胞依普利酮替米沙坦
- Nephrin信号转导机制研究进展被引量：4
- 2006年
- Nephrin作为肾小球足细胞膜上的跨膜蛋白,是足细胞裂隙膜重要的结构分子。近来发现,nephrin分子细胞内段的酪氨酸残基在被酪氨酸激酶fyn(属Src激酶家族成员)磷酸化后,能激活下游信号分子,形成足细胞内特有的信号转导通路,如nephrin-podocin-MAPK-AP-1、nephrin-CD2AP-PI3K-Akt/PKB、nephrin-Nck-Rac/CDC42等。这些信号通路参与了足细胞胚胎发生、细胞生存与细胞骨架重组等许多重要生理病理过程的调节。同样,nephrin蛋白及mRNA的表达也受许多因素的调节。研究nephrin及其信号转导机制对了解并防治肾小球硬化有重要意义。
- 贾俊亚丁国华
- 关键词：NEPHRIN信号转导磷酸化肾小球硬化
