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利用修饰的T7 RNA聚合酶基因建立一种植物耦联表达系统被引量：2: 2002年; 通过基因修饰,在T7 RNA聚合酶基因的5＇端添加了SV40大T抗原的核定位信号编码序列.利用CaMV35S启动子和修饰的T7 RNA聚合酶基因构建了植物表达载体pBBT7.同时,利用T7启动子和β-葡糖醛酸酶基因（gusA）构建了另一个植物表达裁体pBTG.通过农杆菌介导法将上述两个植物表达载体共转化烟草,共转化植株表现出较强的β-葡糖醛酸酶（β-glucuronidase,GUS）活性.上述结果表明T7 RNA聚合酶-T7启动子耦联表达系统在植物中是有效的,说明已成功构建了一种植物耦联表达系统.; 陈峰路子显常团结徐鸿林吴茜肖桂芳朱祯; 关键词：基因修饰核定位信号 T7启动子基因表达植物基因工程

烟草tga1a基因的表达对外源基因在植物中表达的影响被引量：1: 2002年; 烟草DNA结合蛋白TGA1a可特异地作用于CaMV35S增强子的激活序列as-1（-83～-63）,并表现为转录激活功能.为了研究tga1a基因的表达对外源基因在植物中表达的影响,将它置于维管束特异性启动子rolC下游,并与CaMV35S启动子控制的报道基因串联成一种反式调控系统,构建了植物表达载体,同时,以CaMV35S和rolC分别控制的报道基因构建植物表达载体为阳性对照.通过农杆菌介导方法转化烟草和分子鉴定,证明报道基因存在于转化烟草基因组中,分别测定了不同转基因单株的GUS活性,结果表明:rolC控制下的tga1a的表达显著增强了CaMV35S控制下的报道基因表达,其GUS活性明显高于CaMV35S或rolC单独调控报道基因的转化植株,单株的最高GUS活性达到两个阳性对照的10倍以上.组织化学定位证实该串联系统使GUS蛋白主要集中在维管束组织.这一研究结果为提高外源基因在转基因植株中的表达水平和外源基因的组织特异性表达创立了一个新模式.; 路子显常团结李旭刚徐军望李慧芬陈宛新冯德江肖桂芳朱祯; 关键词：外源基因 DNA结合蛋白植物转化报道基因植物基因工程

棉铃虫幼虫中肠类胰蛋白酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达被引量：4: 2002年; 根据昆虫类胰蛋白酶序列的保守性设计了一对引物 ,以棉铃虫 (Helicoverpaarmigera)幼虫中肠总RNA反转录出cDNA第一链作为模板 ,利用RT PCR ,分离出了一种棉铃虫类胰蛋白酶 (HaT)基因的cDNA序列。分析表明该cDNA序列的开放阅读框为 6 96bp ,编码一个由 2 31个氨基酸残基组成的多肽 ,推测的氨基酸序列具有His57、Asp10 2 、Ser192 组成的电荷中继网 ,决定胰蛋白酶底物专一性的Asp189,底物结合部位的Gly2 16和Gly2 2 6残基 ,及其它胰蛋白酶结构上的保守区域。氨基酸序列同源性比较表明 :HaT同其它鳞翅目昆虫类胰蛋白酶有较高的同源性 ,同源性在 4 4 %～ 79%之间。为研究棉铃虫类胰蛋白酶基因 (hat)编码产物的活性 ,将其插入原核表达载体 pGEX4T 3和 pET2 3b中 ,并在大肠杆菌中进行了诱导表达 ,结果表明 ,GST HaT融合蛋白在大肠杆菌中进行了特异表达 ,非融合形式的表达产物HaT具有胰蛋白酶催化活性。; 常团结陈蕾路子显陈宛新孟昆朱祯; 关键词：棉铃虫幼虫中肠类胰蛋白酶酶活性

有效去除农杆菌和籼稻转化系统优化被引量：19: 2003年; 为了提高根农杆菌籼稻转化效率 ,将修饰的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因sck和潮霉素磷酸转移酶基因hpt分别置于紧密相连的 2个T -DNA上 ,构建载体 pCDMARUSCK -HPT ,电激法将表达载体转化农杆菌LBA4 40 4获得工程菌。比较了提门叮和国产噻孢霉素对工程菌LBA4 40 4的抑制效果 ,试验得出提门叮在 5 0 0mg/L以内比噻孢霉素能更有效地去除水稻细胞中的农杆菌 ,而且低浓度条件下 (2 5 0mg/L)就能有效地抑制工程菌LBA4 40 4 ,并且有利于水稻转化细胞成功地再生植株。确立了工程菌LBA4 40 4菌液浓度OD值 0 8,浸染时间 5min为明恢 86合适的转化参数。在此基础上 ,采用优化的农杆菌介导法转化杂交籼稻优良恢复系明恢 86 ,获得转基因植株 12 7个克隆 ,转化效率 4 5 %。; 曾千春李旭刚马炳田陈松彪徐鸿林孟昆魏晓丽朱祯; 关键词：籼稻农杆菌介导豇豆胰蛋白酶抑制剂基因

修饰的cry1Ac基因导入籼稻明恢81获得抗虫纯合系被引量：23: 2002年; 采用细胞内定位技术对cry1Ac基因进行修饰 ,其表达产物定位于内质网及衍生自内质网的蛋白体。通过基因枪法成功地将经过修饰的cry1Ac基因导入到优良杂交籼稻恢复系明恢 81中。对潮霉素抗性植株的PCR和Southern检测及ELISA分析证实 ,修饰的cry1Ac基因已整合到受体水稻品种中并得以表达 ,自交加代结合潮霉素筛选于T2 代获得转基因纯合系。抗虫性测试表明 ,部分转基因纯合系高抗二化螟 (Chilosuppressalis)。; 曾千春吴茜周开达冯德江王锋苏军IAltosaar朱祯; 关键词：基因导入籼稻抗虫基因转基因水稻基因枪法

农杆菌介导籼稻明恢86高效稳定转化体系的建立被引量：41: 2003年; 以籼稻恢复系明恢86为材料,探讨受体材料、愈伤代龄、预培养时间、筛选时间等因素对转化效率的影响,并建立了高效稳定的农杆菌介导籼稻转化体系。转化技术参数如下,水稻花后15 d幼胚诱导的胚性愈伤(2～6代),作为转化受体材料,经4 d预培养,农杆菌侵染30 min,共培养3 d后,在30 mg·L-1潮霉素筛选出抗性愈伤,抗性愈伤经50 mg·L-1潮霉素筛选10～15 d后立即分化,幼胚的胚性愈伤转化频率可达6.98％,并且能够周年转化。; 苏军胡昌泉翟红利颜静宛陈在杰王锋; 关键词：农杆菌介导籼稻恢复系明恢86

一种简单易行的重组方法——三引物PCR法被引量：7: 2002年; 报道了一种不需要限制性内切酶和连接酶的重组DNA方法——三引物PCR法（TP-PCR）.TP-PCR反应体系中有2种模板和3种引物,从而在同一个反应体系中产生一个重组DNA分子.这种方法的主要优点是快速、高效且不依赖连接片段的限制酶位点.用这种方法已成功构建了融合蛋白基因——sck基因.; 邓朝阳宋贵生徐军望朱祯; 关键词：DNA重组融合蛋白基因

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国家高技术研究发展计划(2001AA212041)