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Pichia stipitis Y7对木质纤维素预处理水解液中发酵抑制剂糠醛的耐受性研究: 2014年; 对专利菌株(Pichia stipitis Y7)进行耐糠醛驯化,得到糠醛耐受性明显提升的菌株Y7-1。为解酵母菌株对糠醛的耐受性响应,运用聚丙烯酰胺凝胶电泳、LC-Q-TOF对驯化前后两株菌的差异蛋白进行鉴定。结果显示:在糠醛胁迫下,驯化前后的菌株在糖酵解途径、磷酸戊糖途径和三羧酸循环中的关键酶蛋白的表达有明显差异。; 莫春玲陈宁吕途杜济良杨秀山田沈; 关键词：纤维素乙醇糠醛树干毕赤酵母耐受性

纤维素酶细胞表面展示酵母菌群的构建及纤维素乙醇的发酵优化研究被引量：2: 2015年; 利用酵母细胞表面展示技术,以酿酒酵母菌株Saccharomyces cerevisiae Y5为受体,通过a-凝集素锚定方式,将来自丝状真菌Trichoderma reesei的内切葡聚糖酶II(EGII)、纤维二糖水解酶II(CBHII)以及来自Aspergillus aculeatus的β-葡糖苷酶I(BGLI)展示在细胞表面,构建同时表达3种纤维素酶的酵母菌群系统。结果表明,固定展示在细胞表面的纤维素酶在发酵过程中可保持较好的酶活性和稳定性;同时在EGII、CBHII和BGLI协同作用下使酵母细胞能水解纤维素并产生乙醇。将重组菌株Y5/EGII、Y5/CBHII和Y5/BGLI按1∶1∶1、1∶2∶1和2∶1∶1组合为不同的实验组,发酵结果显示,组合比为2∶1∶1的实验组效果最佳,最高乙醇浓度达到0.76 g/L,乙醇产量为0.33 g/g,相当于理论值的64.9%。; 杨非金怡莫春玲杨秀山田沈; 关键词：纤维素乙醇

利用Flo1p锚定蛋白在酿酒酵母表面展示三种纤维素酶的纤维素乙醇发酵被引量：3: 2014年; 为了简化纤维素乙醇生产工艺,实现纤维素利用与乙醇发酵的同步进行,通过酵母细胞表面展示技术,以酿酒酵母菌株Saccharomyces cerevisiae Y5为受体,通过絮凝素(Flo1p)锚定方式,将来自丝状真菌里氏木霉Trichoderma reesei的内切葡聚糖酶Ⅱ(EGII)、纤维二糖水解酶Ⅱ(CBHII)以及来自棘孢曲霉Aspergillus aculeatus的β-葡糖苷酶Ⅰ(BGLI)展示在细胞表面,构建同时表达3种纤维素酶的酵母菌群系统。经过免疫荧光验证展示酶的细胞蛋白定位,酶活测定,乙醇发酵性能验证,结果表明:展示表达的3种纤维素酶具有良好的稳定性和功能活性;在EGII、CBHII和BGLI协同作用下重组酵母菌株能够水解溶胀磷酸纤维素(Phosphoric acid swollen cellulose,简称PASC)并产生乙醇,乙醇浓度达到最大值0.77 g/L,乙醇产量为0.35 g/g,相当于理论值的68.6%。本研究成功构建了利用Flo1p作为锚定蛋白的絮凝素展示系统,初步实现了纤维素利用与乙醇发酵的同步进行,为利用酿酒酵母表面展示技术固定并表达纤维素酶提供了一定的理论依据。; 莫春玲杨越悦陈宁杨秀山田沈; 关键词：细胞表面展示纤维素乙醇

热带假丝酵母用未脱毒汽爆玉米秸秆产乙醇研究被引量：2: 2014年; 为阐明专利菌种Candida tropicalis Y1利用玉米秸秆产乙醇的能力,以未脱毒汽爆玉米秸秆为原料进行分步糖化发酵(SHF)及同步糖化发酵(SSF)产乙醇。研究结果表明,底物浓度为25%(w/v)、纤维素酶15FPU/(g底物)、纤维二糖酶Novozyme 188 20IU/(g底物)、接种量5%(v/v)及不需添加任何外源营养物质,该菌在SHF过程中的乙醇浓度为38.75g/L乙醇,为理论产率的77.9%,在SSF过程中的乙醇浓度为40.53g/L;同时,SSF与SHF相比,SSF可得到更多的木糖醇,且毒性物质乙酸的浓度维持在较低水平。说明该专利菌株不但有较强的耐发酵抑制剂的能力,而且有较好的代谢葡萄糖和木糖分别产乙醇和木糖醇的能力。; 金怡王震吕喆莫春玲田沈; 关键词：乙醇

利用不同启动子控制木糖代谢关键酶基因构建可共代谢葡萄糖木糖重组酿酒酵母被引量：4: 2014年; 利用不同强度的启动子调控木糖代谢关键酶活性,构建稳定代谢葡萄糖和木糖产乙醇的重组酿酒酵母。以本实验室专利菌株Saccharomyces cerevisiae Y5为宿主菌,将树干毕赤酵母Pichia stipitis CBS6054的木糖还原酶基因XYL1和木糖醇脱氢酶基因XYL2置于磷酸甘油酸激酶基因启动子(PGKp)控制下,酿酒酵母Y5内源的木酮糖激酶基因XKS1分别由己糖激酶基因启动子(HXK2p)及其内源启动子(XKS1p)控制。这3个基因连同各自表达元件导入宿主细胞中,打通其木糖上游代谢途径。酶活测定结果显示,HXK2p对木酮糖激酶表现出更强的启动效率。重组菌Y5-X3-1中木糖还原酶/木糖醇脱氢酶/木酮糖激酶(XR/XDH/XK)的酶活比值为1∶5∶4,其木糖消耗量是宿主菌的5倍,最高乙醇产量为24.35 g/L,达到理论值的73%。结果表明,通过调节XYL1、XYL2及XKS1启动子的强度,调控其表达水平,进而改变3种酶的活性水平,对于提高重组酿酒酵母利用木糖发酵产乙醇有明显效果。; 金怡王震莫春玲杨秀山田沈; 关键词：重组酿酒酵母木糖共发酵启动子

酿酒酵母细胞表面展示技术在燃料乙醇生产中的应用及研究进展被引量：6: 2012年; 酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae细胞表面展示表达系统是一种固定化表达异源蛋白质的真核展示系统,具有糖基化作用及蛋白翻译后折叠等优势,更利于基因工程操作。近年来,酵母细胞表面工程作为一种新兴策略来固定化淀粉水解酶、纤维素水解酶以及木聚糖降解酶,从而应用于燃料乙醇的生产。文中着重介绍了酵母细胞表面展示系统的基本原理、研究现状以及在生物乙醇生产中的应用前景及所面临的挑战。; 杨非曹萌金怡杨秀山田沈; 关键词：生物乙醇

汽爆玉米秸秆产乙醇的补料同步糖化发酵优化被引量：1: 2014年; 为提高反应系统中的底物浓度,减少酶用量,以蒸汽爆破预处理的玉米秸秆及高性能的酵母菌株Y5进行补料同步糖化发酵研究。通过同步糖化发酵策略的优化,经两次补料使反应体系底物浓度提高至25.7%,同步糖化发酵72h,即可获得41.7g/L的乙醇浓度,综合转化率64%。同时,纤维素酶及β-葡萄糖苷酶用量分别可降至7FPU/(g纤维素)及7IU/(g纤维素)。; 王震吕喆王金平杨秀山田沈; 关键词：同步糖化发酵补料响应曲面法

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国家自然科学基金(31100578)