国家自然科学基金(81271934)
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
- 相关作者：李锋熊伟李勇谭鹏关邯峰更多>>
- 相关机构：华中科技大学武汉科技大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金卫生部卫生公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- RANKL浓度对破骨细胞形成与活性的影响被引量：1
- 2014年
- 目的探讨不同浓度RANKL对骨髓单核细胞向破骨细胞分化和活性的影响。方法 50、100和150μg/L三种RANKL浓度诱导骨髓单核细胞向破骨细胞分化。抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察破骨细胞形态并计数,抗酒石酸酸性磷酸酶活性检测试剂盒检测上清中的抗酒石酸酸性磷酸酶活性,骨板吸收实验检测破骨细胞骨吸收活力。结果 100μg/L和150μg/L RANKL浓度组在破骨细胞数量、细胞大小、核数目,抗酒石酸酸性磷酸酶活性和骨吸收率方面均明显高于50μg/L组(P<0.01),而100μg/L和150μg/L组间没有明显差异。结论100μg/L RANKL浓度下破骨细胞形成和活性能力强且相对较经济,是破骨细胞诱导培养的理想浓度值。
- 李勇吴婷婷程豪谭鹏糜宝国张勇关邯峰熊伟廖晖陈安民李锋
- 关键词：骨髓细胞破骨细胞核因子ΚB受体活化因子配体
- 体外转染GFP-Bcl-2基因对低氧条件下间充质干细胞细胞周期的影响被引量：1
- 2013年
- 目的探讨低氧条件下诱导骨髓来源的间充质干细胞(MSCs)向目标细胞分化为相关疾病提供了潜在的临床治疗途径。方法将表达GFP-Bcl-2的慢病毒载体转染大鼠骨髓MSCs使其过量表达(GFP-Bcl-2-MSCs)。在低氧环境下诱导其分化并检测细胞凋亡和增殖。采用流式细胞术检测MSCs和GFP-Bcl-2-MSCs在低氧条件下MSCs细胞细胞周期分布。采用Western blot检测不同组细胞cyclinD1、cyclinE及PCNA表达变化。结果在体外低氧诱导条件下,Bcl-2基因对MSCs有明显的抗凋亡功能。与空载体对照组相比:实验组(GFP-Bcl-2-MSCs)细胞凋亡率下降27%,细胞增殖率升高了58%。但细胞周期分布及cyclinD1、cyclinE、及PCNA的表达无明显差异。结论研究证实了抗凋亡基因修饰的MSCs(GFP-Bcl-2-MSCs)在低氧环境下可抑制细胞凋亡,但细胞周期的相关机制需要进一步研究。
- 何佳邱敏熊伟李锋
- 关键词：间质干细胞细胞周期细胞低氧基因
- 带有雌激素受体编码区的KLF4表达载体的构建及其转染后对细胞的可调控表达
- 2013年
- 目的构建KLF4-ER基因表达的带有加强型绿色荧光蛋白(EGFP)的博来霉素抗性的pCGF5 IEGZ载体,利用其对小鼠巨噬细胞系RAW264.7进行稳定转染株的筛选并鉴定。方法以pEGFP-KLF4质粒为模板,设计带有酶切位点的KLF4上下游引物,以PCR扩增获得编码序列,其产物电泳鉴定后纯化回收,并将改良型小鼠雌激素受体的激素链接区序列与之融合,KLF4-ER片段纯化回收后插入pCGF5-IEGZ载体中;重组体转化细菌,筛选扩增后酶切鉴定;重组质粒转染细胞,倒置荧光显微镜观察EGFP的表达,使用zeocin筛选稳定株,流式细胞术检测转染率;Western Blot、RT-PCR检测转染后的KLF4表达;经Tamoxifen诱导后,DAPI核染色观察重组载体转运胞核中的表达以及抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色检测目的基因表达的效应。结果电泳鉴定KLF4全长片段及pCGF5 IEGZ-KLF4ER重组体双酶切结果符合设定要求,重组质粒构建成功;目的载体成功转入细胞中,转染19 d后流式细胞测定稳定株转染效率达95.31%;20 d KLF4蛋白及mRNA水平均明显高于空转组和阴性组(P<0.01)。Tamoxifen诱导靶基因的表达生物效应优于对照组。结论该实验成功地用pCGF5 IEGZ型载体将带有可受调控的雌激素受体编码区的目的基因导入通用的小鼠巨噬细胞系中,为今后研究靶基因在破骨细胞中可诱导性过表达提供了新的途径。
- 吴巍关邯峰李勇谭鹏李锋
- 关键词：基因表达调控诱变力试验
- ZnTiO_3纳米管阵列(NT-Zn)促进骨髓间充质干细胞成骨分化的实验研究被引量：1
- 2013年
- 目的合成以钛(Ti)为基底的ZnTiO3纳米管阵列(NT-Zn)表面涂层材料,分析它的表面物理化学性能和成骨分化能力。方法以纯Ti为基底,通过阳极氧化的方法 40V电压下在0.5 wt%氢氟酸(HF)溶液中生成二氧化钛纳米管阵列(TiO2-NT),再运用在醋酸锌溶液中水热处理的方法合成ZnTiO3纳米管阵列(NT-Zn)。场发射扫描电镜(FE-SEM)观察制备的NT-Zn表面形貌。原子发射光谱法测量在不同时间点溶液中Zn释放量。大鼠骨髓间充质干细胞(bMSCs)接种到材料表面,乳酸脱氢酶(LDH)评估材料毒性,CCK-8检测细胞增殖,碱性磷酸酶(ALP)染色、活性检测和成骨相关基因mRNA表达水平评估MSCs成骨分化状况。结果钛基底表面生成直径约80nm的TiO2纳米管阵列,Zn加载到纳米管内形成ZnTiO3纳米管阵列。NT-Zn缓慢释放Zn2+,具有良好生物相容性,促进碱性磷酸酶和成骨相关基因表达。结论NT-Zn材料易于合成,促进bMSCs成骨分化有利于骨整合。
- 李勇李锋高标霍开富熊伟
- 关键词：骨髓间充质干细胞成骨分化
