国家自然科学基金(81271901)
- 作品数：10 被引量：18H指数：3
- 相关作者：魏红山郝晓花黄玉波王建文刘燃更多>>
- 相关机构：北京地坛医院北京大学首都医科大学附属北京地坛医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金“首都临床特色应用研究”专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 高剂量O-糖基化修饰抑制剂Benzyl-α-GalNAc诱导体外培养肝细胞脂肪变
- 2013年
- 目的初步探讨蛋白质O-糖基化抑制剂Benzyl-α-GalNAc对肝细胞的影响。方法取雌性Balb／c小鼠（8～10周）20只随机分为正常组（n=10），Benzyl—d—GalNAc药物组（n=10），给Benzyl-α-GalNAc药物（5mg／kg，1次／d）灌胃。第2周末取小鼠血清及肝脏进行血清生化指标AIJT及AlJP测定及肝组织HE染色。培养HepG2细胞．Benzyl-α-GalNAc分别以0．5、1及5mg／ml与HepG2细胞共孵育。24h后进行油红O染液染色。5mg／ml药物组完全未贴壁，去除处理因素，继续培养12h观察细胞。Benzyl-α-Gal—NAc以3mg／ml处理HepG2细胞12h及24h观察细胞贴壁情况。培养L02细胞，Benzyl-α-GalNAc分别以0．1及0．5mg／ml与L02细胞共孵育。24h后进行油红O染液染色。结果药物组与正常对照组比较，肝组织切片显示轻微脂肪变。油红O染色显示药物处理组HepG2及L02细胞内的脂滴积聚。高浓度组细胞完全没有贴壁，24h后更换无药物培养基，去除处理因素12h后，可见HepG2开始贴壁生长。结论高浓度O-糖基化抑制剂Benzyl-α-GalNAc抑制体外肝细胞的黏附，并诱导轻微肝细胞脂肪变。
- 张晓静张仁雯郝晓花任慧李红敏刘燃王智强魏红山
- 关键词：肝细胞脂肪变
- Glt25d1基因敲低对刀豆蛋白A诱导的自身免疫性肝炎小鼠巨噬细胞和中性粒细胞的影响被引量：4
- 2020年
- 目的研究Glt25d1基因在刀豆蛋白A(concanavalin A,Con A)诱导的自身免疫性肝炎中的作用及其对巨噬细胞和中性粒细胞的影响。方法随机抽取6~8周无特定病原体雌性Glt25d1+/-小鼠及与其同窝出生的野生型(wild type,WT)小鼠,体质量(20±2)g,分为WT对照组、Glt25d1+/-对照组、WT造模组和Glt25d1+/-造模组,每组8只。造模组通过内眦静脉注射Con A,剂量为10 mg/kg,对照组给予相同剂量生理盐水注射。造模12 h后处死小鼠。检测小鼠血浆中丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(aspartateaminotransferase,AST)水平,观察肝组织病理。采用流式细胞术检测小鼠外周血、脾脏和肝脏中巨噬细胞和中性粒细胞的比例。采用定量逆转录PCR(quantitative reverse transcriptase-mediated PCR,qRT-PCR)检测肝脏中单核-巨噬细胞趋化蛋白-1(monocyte/macrophage chemotaxis proteinⅠ,MCP-Ⅰ)、巨噬细胞炎性蛋白1α(macrophage inflammatory proteinⅠα,MIP-Ⅰα)、巨噬细胞炎性蛋白2(macrophage inflammatoryproteinⅡ,MIP-Ⅱ)及淋巴细胞抗原6G(lymphocyteantigen6complexlocusG,Ly6G)等mRNA的相对表达量。结果 WT对照组和Glt25d1+/-对照组小鼠ALT [(52.00±18.19)U/L vs (45.00±6.85)U/L]和AST [(168.17±21.33)U/L vs(276.17±83.37)U/L]水平差异无统计学意义(t值分别为0.360、1.255,P值分别为0.7263、0.2589)。Con A造模12 h后,WT造模组小鼠ALT和AST水平分别为(3089.67±663.92)U/L、(3099.50±519.15)U/L,Glt25d1+/-造模组小鼠ALT和AST水平分别(11565.17±1381.38)U/L、(10875.17±1558.68)U/L,均显著高于未造模组(P均<0.05),Glt25d1+/-造模组小鼠ALT和AST水平均显著高于WT造模组(t值分别为5.530、4.733,P值分别为0.0003、0.0032)。肝组织HE染色示:WT对照组和Glt25d1+/-对照组小鼠肝组织未见明显损伤,Con A诱导12 h后,与WT Con A造模组小鼠相比,Glt25d1+/-造模组小鼠肝脏坏死面积更广、汇管区炎性细胞浸润更显著。Glt25d1+/-对照组�
- 高美欣何玲玲叶小慧杨君茹李佳张曼卡张健肖凡魏红山
- 关键词：自身免疫性肝炎巨噬细胞中性粒细胞
- 自身免疫性肝病患者血清GP73变化特征被引量：7
- 2014年
- 目的 明确自身免疫性肝病患者血清GP73的水平特征及可能的临床意义.方法 本研究共观察了健康体检、慢性乙型肝炎患者,以及自身免疫性肝病患者各80例的血清GP73水平.结果 与健康对照人群的血清GP73水平（35.84±11.8） ng/ml相比,自身免疫性肝病患者（112.3±72.55） ng/ml显著升高,也显著高于慢性乙型肝炎患者（86.44±60.69） ng/ml.但自身免疫性肝炎（107.4±90.6）ng/ml,原发性胆汁淤积性肝硬化（89.0±45.38） ng/ml,以及原发性硬化性胆管炎（113.3±50.87） ng/ml患者之间并无显著性差异,但均低于重叠综合症的患者（153.3±86.89ng/ml）.以健康体检人群为参照人群,以61.35 ng/ml为cut-off值,GP73诊断自身免疫性肝病的特异性和敏感性分别为75.0％和97.53％.ROC分析曲线下面积为为0.93（95％ CI：0.89-0.97）.结论 自身免疫性肝病患者血清GP73显著高于健康对照人群,尤其是那些重叠综合征的患者.对于GP73升高的患者,除考虑病毒性肝炎,肝癌外,也应该考虑自身性免疫性肝病的可能.
- 翟庆玲刘燃王智强黄玉波郝晓花冯鑫魏红山
- 关键词：肝炎高尔基体
- 戊型肝炎患者血清GP73变化特征及意义
- 2018年
- 目的观察戊型肝炎患者血清GP73变化特征。方法分析80例健康体检者(对照组)和66例戊型肝炎患者(观察组)血清GP73水平的变化。结果对照组研究对象血清GP73水平为(38.82±15.67)ng/ml,观察组患者血清GP73为(80.06±52.33)ng/ml,较对照组显著升高,差异具有统计学意义(t=6.785、P<0.001);患者血清GP73水平与丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性(r=0.28、P=0.015)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性(r=0.36、P=0.002)总胆红素(TBil)水平(r=0.47、P<0.001)均呈正相关,而与凝血酶原活动度(PTA)水平呈负相关(r=-0.329、P=0.004)。结论血清GP73显著升高的人群需考虑急性戊型肝炎病毒感染的可能。戊型肝炎患者的血清GP73水平可能与肝功能损伤程度具有一定的相关性。
- 蒋煜徐飞胡居龙华文浩李坪魏红山
- 关键词：肝炎戊型高尔基体糖蛋白73肝功能损伤
- Colgalt2基因敲除小鼠Kupffer细胞形态及亚型差异被引量：3
- 2016年
- 目的从Colgalt2基因敲除小鼠肝脏内分离Kupffer细胞,并比较其与正常小鼠Kupffer细胞形态分化和亚型分化的差异。方法采用胶原酶灌注法、percoll密度梯度离心法和免疫磁珠分选法分离纯化Kupffer细胞,并将分离的Kupffer细胞进行培养,显微镜下观察其形态的变化和差异。用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)分别刺激Kupffer细胞6小时、12小时和24小时,检测细胞亚型。结果分离获得Kupffer细胞数目为(4.42±0.63)×10~6/鼠肝,流式细胞仪检测细胞纯度为97.9%。培养后的细胞逐渐延伸为不规则形态,早期Colgalt2基因敲除小鼠Kupffer细胞形态分化相比正常小鼠有延迟,后期两者无显著差异。在未刺激状态下,Colgalt2^(-/-)小鼠M1型Kupffer细胞的比例小于Colgalt2^(+/+)小鼠,Colgalt2^(-/-)小鼠M2a型Kupffer细胞所占比例较高;LPS刺激6小时后,Colgalt2^(-/-)小鼠M2a型所占比例高于Colgalt2^(+/+)小鼠;LPS刺激12小时后,Colgalt2^(+/+)小鼠M2a型和M2c型Kupffer细胞所占比例小于Colgalt2^(-/-)小鼠;LPS刺激24小时后,Colgalt2^(-/-)小鼠M2c型细胞所占比例高于Colgalt2^(+/+)小鼠。结论应用胶原酶灌注法、percoll密度梯度离心法、免疫磁珠分选法可以获得纯度较高的小鼠肝脏Kupffer细胞,为后期的细胞实验奠定基础。Colgalt2基因的敲除会影响小鼠Kupffer细胞的形态分化和亚型分化。
- 王建文张一帆李玉凤杨琪郝晓花黄玉波魏红山
- 关键词：基因敲除KUPFFER细胞细胞形态
- Notch修饰相关糖基因EOGT1敲除大鼠模型的制备与基因型鉴定被引量：1
- 2016年
- 目的建立介导Notch分子O-GlcNAc糖基化修饰的糖基转移酶EOGT1基因敲除大鼠模型,为研究EOGT1功能及其在肝功能损伤中的作用奠定基础。方法通过TALEN基因敲除技术敲除EOGT1基因,获得EOGT1^(+/-)大鼠,将EOGT1^(+/-)大鼠杂交后获得EOGT1^(-/-)大鼠。通过PCR凝胶电泳技术及DNA测序技术对大鼠的基因型进行鉴定。结果成功建立3种基因型(EOGT1^(+/+)、EOGT1^(+/-)、EOGT1^(-/-))大鼠的鉴定方法,通过观察发现3种基因型大鼠的外观和行为表现上无显著差异。统计大鼠出生后20天的体重发现,EOGT1^(+/+)大鼠和EOGT1^(-/-)大鼠的体重有显著差异(t=2.257,P=0.0343),同时还发现EOGT1^(-/-)大鼠的生育繁殖能力降低。结论成功构建了EOGT1基因敲除大鼠模型,EOGT1基因敲除大鼠与野生型大鼠相比,体重偏低,生育繁殖能力降低。该模型的构建为研究Notch分子O-GlcNAc糖基化修饰在肝功能损伤中的作用奠定了基础。
- 郝晓花王建文张一帆叶小慧魏红山
- 关键词：基因敲除糖基转移酶NOTCH
- Colgalt2-酶联免疫试剂盒的制备被引量：1
- 2014年
- 目的 利用N末端Colgalt2多克隆抗体和C末端Colgalt2多克隆抗体,制备Colgalt2双抗体夹心酶联免疫试剂盒.方法 体外扩增Colgalt2的N-末端编码序列,构建其原核表达质粒,诱导纯化Colgalt2重组蛋白.免疫大耳白兔获得抗Colgalt2 N-末端重组蛋白的多克隆抗体.以Colgalt2 N-末端重组蛋白为抗原,利用ELISA和Western Blot技术检测多克隆抗体效价和特异性.以Colgalt2 N-末端多克隆抗体包被酶标板,同时利用HRP标记的C末端Colgalt2抗体,制备Colgalt2-ElISA试剂盒.结果 我们成功克隆表达了N末端Colgalt2基因片段,制备了兔抗Colgalt2多克隆抗体,ELISA分析表明该抗体效价较高（＞1∶1 280000）,Western Blot分析显示该抗体有良好的特异性.对我们所制备的不同浓度的Colgalt2重组蛋白进行分析显示,所制备的分析试剂盒,在1.25～25 μg/ml范围内具有较好分析线性.线性相关系数约为0.98.结论 所制备的Colgalt2-ELISA分析试剂盒可以用于标本内Colgalt2蛋白检测.
- 刘燃李红敏任慧王智强王建文杨琪郝晓花黄玉波魏红山
- 关键词：基因蛋白质工程酶联免疫吸附试验
- CRISPR/Cas9介导的Fam171a1基因敲除大鼠基因型鉴定及基因功能的初步研究
- 2017年
- 目的通过建立Fam171a1基因敲除大鼠模型,观察基因敲除后大鼠的表型变化,探索该基因的功能。方法采用CRISPR/Cas9打靶技术,获得Fam171a1^(+/-)基因型杂合子。Fam171a1^(+/-)大鼠交配获得Fam171a1^(-/-)基因型纯合子大鼠。采用DNA Analyzer 3730XL测序技术进行基因型鉴定。对功能未知基因Fam171a1进行基本生物信息检索。检测FAM171A1蛋白在野生型大鼠(wild type,WT)和Fam171a1^(-/-)基因型大鼠各组织的表达情况。对子代鼠20天体重、子代生育情况进行统计。采用全自动生化仪对血清生物化学指标进行检测。结果获得了稳定遗传的Fam171a1^(-/-)基因型大鼠。通过配笼繁殖共获得F2代125只,纯合子(Fam171a1^(-/-))25只、杂合子(Fam171a1^(+/-))71只、野生型(WT)29只,比例接近1∶2∶1。FAM171A1蛋白在WT大鼠肝脏等主要脏器表达,其中肺组织、脑组织和胰腺组织表达量较高,心、肝、脾和淋巴结中表达较弱,肾、胸腺和小肠组织中弱表达或不表达。同时,Fam171a1^(-/-)基因型大鼠各组织中不表达FAM171A1蛋白。Fam171a1^(-/-)子代大鼠出生20天体重显著低于WT大鼠(t=3.211,P=0.0017)。成年Fam171a1^(-/-)大鼠血清胆碱酯酶、总蛋白、AST和HDL水平显著高于WT(t=4.18,P<0.001;t=6.26,P<0.001;t=2.73,P=0.02;t=2.36,P=0.03)。与Fam171a1^(+/-)大鼠相比,Fam171a1^(-/-)大鼠生育能力无显著差异(t=0.2132,P=0.8330)。结论成功获得稳定遗传的Fam171a1基因敲除大鼠,Fam171a1基因可能参与SD大鼠的生长发育、肝功能的维持及脂代谢的调控。
- 李玉凤杨琪王建文叶小慧张曼卡郝晓花黄玉波魏红山
- 关键词：膜蛋白胆碱酯酶脂代谢
- Fam172a基因敲除小鼠的制备与基因型鉴定被引量：2
- 2017年
- 目的建立稳定的Fam172a基因敲除C57/B6J小鼠模型,观察基因敲除对小鼠生长发育的影响以及该基因在小鼠体内的生物学的作用。方法采用基因打靶敲除技术,获得杂合子(Fam172a^(+/-))小鼠。将所得Fam172a^(+/-)小鼠饲养于屏障环境中杂交获得纯合子(Fam172a^(-/-))小鼠。利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术对小鼠基因型进行鉴定,称量出生后20天、40天以及60天野生型(wild type,WT)小鼠及Fam172a^(-/-)小、鼠的体重。随机处死8周龄WT小鼠和Fam172a^(-/-)小鼠,取心、肝、脾、肺及肾组织,采用Western blot险测Fam172a基因的组织表达特异性。结果 PCR及Western blot结果均证明Fam172a基因在Fam172a^(-/-)小鼠体内完全删除。Farm172a^(-/-)小鼠与WT小鼠20天、40天以及60天体重的差异均有统计学意义(P均<0.05)。FAM172A蛋白在WT小鼠中的表达有组织特异性。Fam172a^(-/-)小鼠每胎产仔数略低于WT小鼠,差异无统计学意义(P>0.05)。各小鼠外观、行为和繁殖力无显著差异。结论 Fam172a基因敲除C57/B6J小鼠模型已成功构建,并繁育出足够数量的Fam172a^(-/-)小鼠进行下一步实验。Fam172a基因对小鼠体重和生长发育具有重要作用。
- 张一帆王建文杨琪郝晓花黄玉波魏红山
- 关键词：基因敲除小鼠
- 分泌蛋白编码基因THEM6克隆表达及组织细胞分布
- 2013年
- 目的体外克隆表达THEM6，诱导重组蛋白，制备多克隆抗体，明确在不同组织细胞的表达特征。方法以外周血单核细胞总RNA反转录得到的cDNA为模板，扩增THEM6基因片段，诱导剂IFrG诱导THEM6重组蛋白表达，制备多克隆抗体，分析特异性、检测效价。用CCK-8检测试剂盒，分析THEM6重组蛋白对Jurkat细胞增殖的影响；观察该蛋白的组织、细胞系表达分布。结果成功体外克隆THEM6．获得重组蛋白及抗THEM6的多克隆抗体，ELISA （enzyme-linked immuno sorbent assay）酶联免疫吸附测定检测效价〉1280000；低浓度THEM6重组蛋白对Jurkat细胞增殖有影响，THEM6蛋白在Jurkat细胞等多种细胞及淋巴、肝脏等多种组织中表达。，结论THEM6基因在多种组织细胞中有广泛表达。
- 李红敏任慧乔雍郝晓花刘燃王智强魏红山
- 关键词：乙型肝炎病毒重组蛋白多克隆抗体
