国家自然科学基金(0973126)
- 作品数：2 被引量：8H指数：2
- 相关作者：秦泽莲宋振华刘畅更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- Inhibition of periostin gene expression via RNA interference suppressed the proliferation, apoptosis and invasion in U2OS cells被引量：4
- 2010年
- 背景 Periostin 原来指明了造骨细胞特定的因素(OSF-2 ) 2 经常被发现高度在 vivo 在 vitro 和人的癌症纸巾在人的癌症房间线的各种各样的类型被表示。我们建议 periostin 在癌症房间在增长和侵略的过程期间是一个关键因素。我们在人的 osteosarcoma 房间线( U2OS )的功能上调查了 periostin 的效果，例如增长， apoptosis ，侵略和联系信号 pathway.Methods A 人的 PGCsi/U6 倡导者驱动的 DNA 模板被采用导致触发的短发卡 RNA ( shRNA ) RNA 干扰( RNAi )到在房间线 U2OS 的块 periostin 基因表示。U2OS 房间被划分成三个组：有象控制组(U2OS 组) 盐的缓冲的磷酸盐的房间 transfected，有是的 pGCsi 的房间 transfected 否定控制组(NC 组) 和有是的 periostin/pGCsi 的房间 transfected 试验性的组(pGCsi-periostin 组) 。然后，房间的 transfection 效率被观察在下面荧光灯显微镜。在房间的 periostin 和相关基因的表情被反向的抄写聚合酶链反应并且西方的弄污检测。房间生存能力用 methyl-thiazolyl tetrazolium 溴化物(MTT ) 被决定量的比色的试金。房间的侵略和迁居能力被 transwell 盘子测试与或没有细胞外的矩阵胶化。而且，房间周期和 apoptosis 的变化被到 U2OS 房间的 periostin/pGCsi 的 transfection 效率关于 70%-80% 的流动 cytometry.Results 分析。什么时候与 NC 组，相比， mRNA 的层次和在 pGCsi-periostin 组的 periostin 的蛋白质在 82% 减少了(F=564.71， P0.001 ) 并且 58%(F=341.51， P 0.001 ) 分别地。同时，更早的 apoptosis 价值增加了 417 (F=28.69， P 0.001 ) 。S 阶段 pGCsi-periostin 房间的百分比在 21% 减少了(F=47.00， P 0.001 ) 然而， G0-G1 阶段房间的增加了 12%(F=14.50， P 0.001 ) 。移植和侵略的能力在 41% 减少了(F=17.79， P 0.001 ) 并且 72%(F=197.08， P 0.001 ) 分别地。在 pGCsi-periostin 组的房间增长分别地在 transfection 以后在 48 和 120 个小时在 59% 和 72% 减少
- LIU Chang HUANG Si-jian QIN Ze-lian
- 关键词：WESTERN印迹逆转录聚合酶链反应
- 人periostin干扰载体的构建及其对成纤维细胞目的基因表达的影响被引量：6
- 2010年
- 目的:为了研究人成骨细胞特异因子-2(periostin,POSTN)基因对瘢痕疙瘩成纤维细胞功能的影响,构建shRNA质粒和慢病毒载体,观察其对293T细胞和瘢痕疙瘩成纤维细胞的POSNT基因表达的抑制作用,检测shRNA慢病毒载体对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响。方法:设计特异性干扰人POSTN基因的小发卡RNA序列,合成含有干扰序列的双链DNAoligo,与经双酶切后的质粒连接,转化感受态大肠杆菌DH5α并对阳性克隆进行PCR扩增测序鉴定。将构建的质粒采用脂质体共转染入293T细胞,36～48h后采用Westernblot的方法检测目的蛋白的表达情况,进而判断不同靶点的干扰效果。将干扰效果最好的序列包装shRNA质粒和慢病毒载体,利用生成的POSTNshRNA质粒和慢病毒分别感染293T细胞和原代瘢痕疙瘩成纤维细胞,检测两种细胞目的基因、蛋白的表达,进而观察基因干扰后瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖变化。结果:转染干扰质粒原代瘢痕疙瘩成纤维细胞、感染空质粒阴性对照细胞和正常皮肤成纤维细胞的POSTNmRNA表达分别为1.98±0.03、1.12±0.03和1.08±0.03,实验组对比阴性对照组细胞的敲减率为43%(F=688.291,P<0.001)。感染干扰慢病毒原代瘢痕疙瘩成纤维细胞、感染空病毒阴性对照细胞和正常皮肤成纤维细胞的POSTNmRNA表达分别为0.44±0.09、0.81±0.07和0.37±0.05,实验组对比阴性对照组细胞的敲减率为46%(F=90.06,P<0.001)。实验组POSTN蛋白表达水平(0.29±0.04)比阴性对照组细胞(0.53±0.09)的表达降低45%(F=33.43,P<0.001),正常皮肤成纤维细胞POSTN蛋白的表达水平为0.23±0.02。感染干扰质粒和慢病毒的原代瘢痕疙瘩成纤维细胞与空质粒转染的对照细胞相比,POSTN蛋白和mRNA的表达水平亦明显降低,并趋近正常皮肤成纤维细胞的表达。从感染慢病毒48h开始,干扰组瘢痕疙瘩成纤维细胞与空质粒转染的对照组细胞相比增殖明显减慢,抑制率达19%。�
- 刘畅宋振华秦泽莲
- 关键词：PERIOSTIN成纤维细胞RNA干扰瘢痕疙瘩慢病毒属
