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用酵母双杂交技术研究IGF-1与其结合蛋白3的相互作用被引量：3: 2001年; 为了探讨胰岛素样生长因子结合蛋白 3(IGFBP- 3)分子上的胰岛素样生长因子 1 (IGF- 1 )结合位点并找出其关键氨基酸残基组成 ,首先建立了研究 IGF- 1与 IGFBP- 3相互作用的酵母双杂交模型 ,可以定性和定量地分析两个蛋白质之间的相互作用大小 ;同时利用基因体外定点突变的方法 ,对推断出的 IGF- 1结合位点中的氨基酸突变 ,经 DNA序列分析 ,构建了 5种 IGFBP- 3突变体 .然后在酵母双杂交模型中通过对报告基因活性的定量分析 ,检测 IGF- 1与各种 IGFBP- 3突变体之间相互作用的大小 .结果表明 ,IGFBP- 3分子上的 Lys2 2 2 ,Gln2 2 3突变后 ,与 IGF- 1的结合力大大下降 ,而 Arg2 2 5,Pro2 2 6,Ser2 2 7突变后也导致与 IGF- 1结合力的部分下降 .从而初步确定了IGFBP- 3分子中第 2 2 2～ 2 2 7位的氨基酸区域为 IGF- 1的结合位点 ,并且 IGFBP- 3分子上 Lys2 2 2 ,Gln2 2 3在与 IGF- 1结合中起着重要作用 .; 杜清友刘宝英薛沿宁王会信刘农乐; 关键词：胰岛素样生长因子酵母双杂交系统

sTNFR1在昆虫细胞中的表达及鉴定被引量：3: 2002年; 目的 :研究可溶性肿瘤坏死因子受体 (solubleTNFαreceptor1,sTNFR1)在昆虫细胞中的表达。方法 :应用BAC_TO_BAC杆状病毒表达系统 ,构建含有sTNFR1基因的杆状病毒穿梭载体Bacmid ,转染sf2 1昆虫细胞进行高效表达 ,利用TALON金属鏊合层析进行重组蛋白的纯化。免疫印迹和细胞测活方法鉴定重组sTNFR1的生物学活性。结果 :从无血清培养上清中可纯化得到约 3mg L的重组蛋白。免疫印迹反应和细胞活性实验表明 ,重组蛋白具有良好的抗原结合能力和抑制TNF对L92 9细胞的细胞毒作用。结论 :重组sTNFR1在昆虫细胞中表达稳定 ,易于纯化。; 高波张杰刘云王会信薛沿宁; 关键词：肿瘤坏死因子受体1 杆状病毒昆虫细胞炎症反应生物学活性

用于蛋白质间相互作用研究的新型双杂交系统被引量：5: 2001年; 近年来 ,一些不依赖于转录因子活性的新型双杂交系统相继建立 ,如分离的泛素系统、蛋白质片段互补分析、阻遏物重构分析和SOS恢复系统等。同利用转录因子活性的酵母双杂交系统相似 ,这些方法也利用了一些活性蛋白的结构与功能特点来研究蛋白质间相互作用 ,这些活性蛋白不是转录因子 ,但也可在结构上进行分离并可通过重构使其生物活性得以恢复。由于这些新型双杂交系统的各自特点 ,使得它们成为酵母双杂交系统的有益补充和研究蛋白质间相互作用的有力工具。; 薛沿宁; 关键词：双杂交蛋白质间相互作用融合蛋白

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国家自然科学基金(39900182)