首都医学发展科研基金(2002-3030)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 相关作者：王臻李邦印李大伟王治伟张灵霞更多>>
- 相关机构：中国人民解放军总医院江西农业大学更多>>
- 发文基金：首都医学发展科研基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人颗粒裂解肽片段在大肠杆菌中的表达
- 2007年
- 目的:建立颗粒裂解肽(NKG5)的原核表达载体系统,并在大肠杆菌中获得表达。方法:采用寡核苷酸合成、PCR扩增得到NKG5编码序列,克隆到pGEM-T载体上,经测序正确后,再切下编码序列连接到重组表达载体pGEX-4T-1中,转化大肠杆菌BL21,用IPTG诱导重组工程菌表达,采用谷胱甘肽偶联的Sepharose4B纯化重组蛋白。结果:重组菌株可以表达GST-NKG5融合蛋白,用免疫印迹反应鉴定纯化的融合蛋白,在相对分子质量34000处有一条带。结论:获得了在大肠杆菌中低表达的颗粒裂解肽融合蛋白,为后续研究奠定了基础。
- 李邦印王臻李大伟张灵霞王治伟
- 关键词：颗粒裂解肽融合蛋白原核表达
- 人颗粒裂解肽突变子在大肠埃希菌中的构建与表达研究
- 2013年
- 目的构建NKG5突变基因的原核表达载体并进行表达研究。方法采用寡核苷酸合成的方法,拼接成为NKG5-Ser的编码序列,克隆到pGEMT载体上,测序正确后,再切下编码序列连接到质粒pGEX-4T-1中,重组表达载体转化大肠埃希菌BL21(DE3)pLysS,用IPTG诱导使融合蛋白高效表达。结果成功获得重组表达载体pGEX-4T-1-NKG5-Ser,转染大肠埃希菌BL21(DE3)pLysS,诱导表达后,SDS-PAGE和免疫印迹反应均显示显示出相对分子量(Mr)为35 kD的蛋白条带,证明融合蛋白表达成功。结论获得了突变NKG5与GST的融合蛋白,为进一步的工作打下了基础。
- 赵铭刘冰王臻李邦印张灵霞
- 关键词：颗粒裂解肽突变基因融合蛋白原核表达
