国家自然科学基金(81171103)
- 作品数：7 被引量：22H指数：4
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- 氧葡萄糖剥夺-再恢复后抑制小胶质细胞TLR9激活对神经元的保护作用被引量：3
- 2015年
- 目的:观察氧葡萄糖剥夺-再恢复(OGDR)后小胶质细胞BV-2 Toll样受体9(TLR9)激活对神经元凋亡的影响。方法:对BV-2细胞或TLR9-siRNA转染的BV-2细胞进行OGDR处理4 h后,将细胞上清添加至OGDR处理4 h的小鼠原代皮层神经元中,继续正常培养24 h后,倒置显微镜下观察神经元形态变化,TUNEL染色检测神经元凋亡,Western blotting检测神经元caspase-3蛋白的表达。实验分为正常BV-2组、negative control-siRNA组、TLR9-siRNA组、OGDR组、OGDR+NC-siRNA组、OGDR+TLR9-siRNA组和对照组(神经元OGDR后不添加BV-2细胞上清)。结果:OGDR后神经元胞体肿胀,折光性下降,出现空泡样变,轴突变细、扭曲、断裂。TUNEL染色各组均可见绿染凋亡小体。与对照组比较,其它组的caspase-3蛋白表达升高(P<0.05);与正常BV-2组比较,OGDR组和TLR9-siRNA组的caspase-3蛋白表达升高(P<0.05);OGDR+TLR9-siRNA转染组与TLR9-siRNA转染组和OGDR组比较,caspase-3蛋白表达下降(P<0.05)。结论:OGDR后BV-2细胞TLR9激活致神经元凋亡增多,caspase-3蛋白表达升高;抑制TLR9表达后,神经元损伤减轻。
- 彭晴霞杨碧莹潘经锐王鸿轩黎祥喷王艺东
- 关键词：小胶质细胞神经元TOLL样受体9
- 有效抑制小鼠小胶质细胞上Toll样受体9表达的siRNA的筛选被引量：1
- 2014年
- 目的筛选有效抑制小鼠小胶质细胞(BV-2细胞)上Toll样受体9(TLR9)表达的小干扰RNA(siRNA)序列,并检测转染复合物的细胞毒性。方法设计并合成针对TLR9的3对siRNA(siRNA-836、siRNA-1549和siRNA-2410)及一条带绿色荧光标记(FAM)的通用阴性对照FAM-siRNA。在X-treme GENE siRNA转染试剂介导下转染BV-2细胞。倒置荧光显微镜下观察转染后BV-2细胞FAM-siRNA的分布,流式细胞仪检测转染效率,q-PCR检测TLR9的mRNA表达,Western blot检测TLR9蛋白的表达,并比较其抑制率,筛选出有效抑制靶基因表达的siRNA。CCK-8检测细胞存活率的变化。结果 BV-2细胞转染FAM-siRNA后6 h,胞质内可见绿色荧光分布。FAM-siRNA表达阳性率为(91.87±4.77)%。转染TLR9 siRNA后,BV-2细胞中TLR9 mRNA表达明显下降。与阴性对照组及序列siRNA-836、siRNA-2410相比,序列siRNA-1549的TLR9沉默效能最高,使BV-2细胞上TLR9 mRNA表达于24 h和48 h分别降低(77.89±4.23)%和(65.36±11.07)%,TLR9蛋白表达分别下降(48.37±20.56)%和(44.30±14.31)%。CCK-8检测TLR9 siRNA转染组与对照组相应时间点比较,BV-2细胞存活率无明显变化(P>0.05)。结论序列siRNA-1549对BV-2细胞上TLR9表达的抑制效果最大,利用RNA干扰处理BV-2细胞,对细胞基本无毒性作用。
- 杨碧莹彭晴霞潘经锐王艺东
- 关键词：小神经胶质细胞RNA小分子干扰TOLL样受体9
- 小鼠脑梗死后小胶质细胞内Toll样受体9选择性上调被引量：6
- 2014年
- 目的:观察脑梗死后Toll样受体9(TLR9)表达量及其在神经元和神经胶质细胞中的表达变化。方法:线栓法制备C57小鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,90 min后再灌注。假手术组为对照。再灌注后6 h、3d、7 d和14 d处死动物(n=3),制备脑冠状位冰冻切片。免疫荧光染色观察TLR9表达量及其在神经元和神经胶质细胞中的表达变化。结果:梗死灶边缘区TLR9的表达量随时间增加,始终高于对侧及假手术组。病变全程偶见神经元胞内小点状TLR9,TLR9阳性率无时间、组间差异。激活态小胶质细胞聚集于梗死灶边缘区,胞内TLR9由散在小点状变为团块状粗颗粒样。TLR9阳性率随时间先升后降,始终高于对侧及假手术组。星形细胞和少突胶质细胞未见TLR9阳性染色。结论:脑梗死后,中枢定居细胞中神经元TLR9维持固有表达,仅小胶质细胞TLR9表达选择性上调,星形细胞及少突胶质细胞无TLR9表达。
- 纪原杨碧莹黄小雄潘经锐王鸿轩王艺东
- 关键词：脑梗死TOLL样受体9小神经胶质细胞
- 氧葡萄糖剥夺-再恢复小鼠小胶质细胞的激活及Toll样受体9表达的变化被引量：4
- 2013年
- 目的观察氧葡萄糖剥夺-再恢复(OGDR)对小鼠BV-2小胶质细胞的激活以及Toll样受体9(TLR9)表达的影响。方法采用OGDR法建立BV-2细胞缺氧、缺糖模型,以常氧培养的BV-2细胞作为对照。使用倒置相差显微镜观察BV-2细胞在OGDR后0、6、12、24、48、72 h形态的变化,CCK8法检测OGDR后不同时间点细胞存活率的变化,反转录PCR和Western Blot检测细胞内TLR9 mRNA和蛋白的表达。结果①OGDR后BV-2细胞由原来静止的分枝状变成激活的阿米巴状。②OGDR后,细胞存活率明显下降,0 h为对照组的(65.7±9.2)%;12 h下降至最低,为对照组的(44.8±2.3)%,后逐渐升高,48、72 h分别为对照组的(60.8±10.2)%、(72.3±10.0)%。③OGDR后,随着时间的延长,TLR9 mRNA表达逐渐升高,24 h达高峰,后逐渐降低,但72 h仍高于0 h时间点的表达。TLR9蛋白表达亦呈升高趋势,在72 h达高峰。对照组各时间点TLR9 mRNA、TLR9蛋白表达差异均无统计学意义。④相同时间点的比较,OGDR组OGDR后6～72 h,TLR9 mRNA表达均明显高于对照组(P<0.05,或P<0.01,);12～72 h,TLR9蛋白表达显著高于对照组(P<0.05,或P<0.01)。结论 OGDR后BV-2细胞被激活,其细胞内TLR9表达随着时间的延长逐渐增高,可能在脑缺血-再灌注后的炎性反应中,发挥重要作用。
- 杨碧莹马珊珊潘经锐纪原彭晴霞王艺东
- 关键词：TOLL样受体9小神经胶质细胞小鼠
- 氧葡萄糖剥夺-再恢复后小胶质细胞Toll样受体9信号通路的激活
- 2015年
- 目的观察氧葡萄糖剥夺-再恢复(OGDR)后小胶质细胞(BV-2细胞)Toll样受体9(TLR9)及其下游信号分子的表达变化。方法对BV-2细胞进行OGDR处理,模拟脑缺血再灌注的体内过程。以常氧培养的BV-2细胞作为对照。细胞免疫化学方法检测BV-2细胞的激活。在OGDR后0h、6h、12h、24h、48h、72h,荧光定量PCR检测细胞内TLR9mRNA表达,Western Blot检测细胞内NF-κB(P65)、磷酸化NF-κB(P-P65)、IRF7、磷酸化IRF7(P-IRF7)蛋白表达,ELISA检测细胞上清TNF-α、IL-1β和IFN-β的含量。结果 OGDR后BV-2细胞由原来静止的分枝状变成激活的阿米巴状,CD68染色阳性。除0h外,其余时间点OGDR组TLR9mRNA的相对表达量与对照组相应时间点比较均有上调,表达高峰位于24h。OGDR后各时间点P65和IRF7表达无明显变化。P-P65 0h、6h、12h明显增高,24h、48h、72h表达无明显增高。P-IRF7在0h、6h无明显增高,12h-72h明显升高。OGDR后TNF-α和IL-1β表达增多,TNF-α表达高峰于24-48h,IL-1β表达高峰位于48h。IFN-β表达无明显变化。结论 OGDR后小胶质细胞TLR9信号通路的活化以促炎途径为主。
- 王艺东杨碧莹潘经锐纪原彭晴霞
- 关键词：TOLL样受体9小胶质细胞炎症
- 脑缺血再灌注早期梗死灶边缘区TLR9信号通路的活化被引量：4
- 2011年
- 目的观察大鼠脑缺血再灌注早期梗死灶边缘区皮层Toll样受体9(Toll-like receptor 9,TLR9)信号通路的活化情况。方法制备Sprague-Dawley(SD)大鼠短暂大脑中动脉闭塞模型,缺血90 min后再灌注,随机分两组:6 h组(n=5)和3 d组(n=5),分别采用RT-PCR、Western-blot法测定梗死灶边缘区皮层TLR9、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)、干扰素调节因子7(interferon regulatory factor 7,IRF7)、干扰素-β(interferon-beta,IFN-β)的mRNA及蛋白表达。结果 6 h和3 d组TLR9、TNF-α、IRF7、IFN-β的mRNA表达量分别为(0.43±0.03)和(0.93±0.03)、(1.21±0.11)和(2.26±0.16)、(0.44±0.04)和(1.27±0.17)、(0.15±0.02)和(0.26±0.03),蛋白表达量分别为(0.75±0.04)和(1.35±0.04)、(0.93±0.04)和(1.05±0.02)、(0.54±0.03)和(0.73±0.02)、(0.82±0.02)和(0.93±0.03)(组间比较,均P<0.01)。同组内TNF-α的表达明显高于IFN-β的表达(均P<0.01)。结论 TLR9信号通路在脑梗死早期的炎症反应中可能起重要作用。
- 谢芬方建业潘经锐黄小雄王艺东
- 关键词：TOLL样受体9脑缺血再灌注
- TLR9信号通路在大鼠脑梗死灶周围组织中的双向转导被引量：7
- 2012年
- 目的观察Toll样受体9（TLR9）信号通路在大鼠脑梗死灶周围皮质组织中的转导变化。方法采用线栓法成功制备48只SD大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）模型，并设置假手术组（24只）作为对照。在脑缺血90min再灌注6h、3d、7d、14d时分别对大鼠进行神经功能缺损评分，取脑组织行TTC染色以测定梗死体积，取梗死灶周围皮质和对侧相应皮质行Westernblotting．测定TLR9、核因子NFKB（P65）、肿瘤坏死因子．a（TNFa）、干扰素调节因子．7（IRF7）、干扰素-β（IFNβ）的蛋白表达水平。结果再灌注6h、3d、7d、14d时，模型组大鼠的神经功能缺损评分和梗死体积随时间的延长逐渐减小；梗死侧TLR9、IRF7、IFNB蛋白的表达逐渐增加，而NFKB（P65）、TNFa蛋白的表达呈先上升后下降的趋势，表达高峰在7d。同一蛋白的表达量在不同时间点间比较差异均有统计学意义（p〈0．05）；同一观察时间点比较，梗死侧各蛋白的表达量高于对侧相应皮质，差异有统计学意义（P〈0．05）。再灌注6h、3d和7d时NFKB（P65）、TNF—d蛋白表达分别高于IRF7、IFNl3，而再灌注14d时NFKB（P65）、TNFa蛋白表达分别低于IRF7、IFNβ，差异均有统计学意义（P〈0．05）。在假手术组各时间点均未检测到上述蛋白的表达。结论大鼠短暂性脑缺血再灌注后，TLR9的炎症通路和细胞保护通路相继被激活，可能参与了脑梗死后炎症损伤和组织修复过程。
- 黄小雄谢芬潘经锐杨碧莹王艺东
- 关键词：TOLL样受体9脑缺血再灌注信号转导通路
