江苏省高校自然科学研究项目(08KJD310008)
- 作品数：4 被引量：5H指数：1
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- BA-ELISA定量检测人血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa、CD62p的表达及其临床应用被引量：2
- 2012年
- 目的建立测定血小板膜糖蛋白功能的生物素亲和素酶联免疫吸附(BA-ELISA)方法,并探讨其临床应用价值。方法采用抗血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPⅡb/Ⅲa)单抗7E3和抗血小板CD62p单抗SZ51及生物素亲和素系统建立BA-ELISA方法,并应用该方法检测50名健康志愿者、30例急性心肌梗死(AMI)、30例急性脑梗死(ACI)和30例糖尿病(DM)患者的血小板膜糖蛋白功能,并与流式细胞术(FCM)测定结果进行比较。同时,应用该方法对抑制性单抗SZ21和阿司匹林抑制血小板活化的功能效果进行测定。结果该方法检测血小板计数敏感度低达3.13×109/L(7E3包被板)和6.25×109/L(SZ51包被板),批内和批间变异系数分别为6.23%～8.35%和4.38%～5.78%。测得AMI、ACI和DM患者ADP诱导的(未诱导的)血小板的GPⅡb/Ⅲa和CD62p表达量均显著高于健康志愿者(均P<0.01)。BA-ELISA测定表明,SZ21和阿司匹林可抑制ADP诱导的血小板功能(但P>0.05)。该方法和FCM同时测定健康志愿者、AMI、ACI和DM患者的GPⅡb/Ⅲa和CD62p表达水平。测定数据经直线回归分析得r=0.86。结论 BA-ELISA检测血小板的膜糖蛋白,可精确判断血小板的功能状态,为指导临床预防、诊治、评估疾病提供简便、可行的方法。活化的血小板膜糖蛋白测定可从凝血的角度对上述疾病的早期诊断、病情进展的判断、抗血栓药物的评估及疾病预后的判断起到辅助作用。
- 张有涛赵益明朱明清蒋敏程寅峰史进方顾国浩阮长耿
- 关键词：血小板膜糖蛋白酶联免疫吸附试验
- BA-ELISA定量检测人血小板膜糖蛋白Ⅱb／Ⅲa、CD62p的表达及其临床应用被引量：1
- 2012年
- 目的建立测定血小板膜糖蛋白功能的生物素一亲和素-酶联免疫吸附（BA-ELISA）方法，并探讨其临床应用价值。方法采用抗血小板膜糖蛋白Ⅱb／Ⅲa（membraneglycoproteinⅡb／Ⅲa，GPⅡb／Ⅲa）单抗7E3和抗血小板CD62p单抗SZ51及生物素一亲和素系统建立BA-ELISA方法，并应用该方法检测50名健康志愿者、30名急性心肌梗死（AMI）、30名急性脑梗死（ACI）和30名糖尿病（DM）患者的血小板膜糖蛋白功能，并与流式细胞术（FCM）测定结果进行比较。同时，应用该方法对抑制性单抗SZ21和阿司匹林抑制血小板活化的功能效果进行测定。结果该方法检测血小板计数敏感度低达3．13×10^9／L（7E3包被板）和6．25×10^9／L（SZ51包被板），批内和批间变异系数分别为6．23％～8．35％和4．38％-5．78％。测得AMI、ACI和DM患者ADP诱导的（未诱导的）血小板的GPⅡb／ⅢaCD62p表达量均显著高于健康志愿者（P〈0．01）。BA-ELISA测定表明，SZ21和阿司匹林可明显抑制ADP诱导的血小板功能。该方法和FCM同时测定健康志愿者、AMI、ACI和DM患者的GPⅡb／Ⅲa和CD62p表达水平。测定数据经直线回归分析得r=0．86。结论BA-ELISA检测血小板的膜糖蛋白，可精确判断血小板的功能状态，为指导临床预防、诊治、评估疾病提供简便、可行的方法。活化的血小板膜糖蛋白测定可从凝血的角度对上述疾病的早期诊断、病情进展的判断、抗血栓药物的评估以及判断疾病的预后起到辅助作用。
- 张有涛赵益明朱明清蒋敏程寅峰史进方顾国浩阮长耿
- 关键词：膜糖蛋白酶联免疫吸附试验
- 抗人凝血因子Ⅷ-C1C2区单克隆抗体的制备及鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的制备抗人凝血因子Ⅷ(FⅧ)C1C2区单克隆抗体(mAb),并对其进行生化和生物学鉴定。方法采用基因重组技术表达FⅧ-C1C2区蛋白(rFⅧ-C1C2),以rFⅧ-C1C2免疫8周龄Balb/C小鼠,小鼠脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合后,ELISA法筛选阳性克隆,制备稳定分泌抗rFⅧ-C1C2mAb的细胞株,并对mAb进行生化和免疫学鉴定。结果获得一株抗rFⅧ-C1C2区单克隆抗体阳性克隆2B11,命名为SZ-133。琼脂糖双扩散鉴定为IgG1类,Westernblot法证实SZ-133可与rFⅧ-C1C2区蛋白及重组的全长FⅧ特异性结合,但不影响FⅧ的凝血活性。结论表达了rFⅧ-C1C2,并制备出了抗人凝血因子Ⅷ的单克隆抗体SZ-133,它能特异识别血浆及重组的FⅧ,有可能用于基础和临床应用研究。
- 张婷婷赵益明李振宇沈飞阮长耿
- 关键词：原核表达单克隆抗体
- 人血小板膜糖蛋白功能测定的酶联免疫分析方法的建立被引量：1
- 2010年
- 目的建立测定血小板膜糖蛋白(GP)功能的酶联免疫分析(ELISA)方法 ,并对其灵敏度、批内和批间差异进行方法学考核。方法以抗血小板CD62P单抗SZ51和抗血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPⅡb/Ⅲa)单抗7E3分别包板,加入经ADP诱导的或未诱导的正常人富含血小板血浆(PRP),以生物素标记的抗GPIb单抗SZ2(Biotin-SZ2)反应后,加入亲和素标记的辣根过氧化物酶(Avdin-HRP)检测,邻苯二胺(OPD)显色后,酶标仪读取吸光度(A)值。对其灵敏度及批内、批间差异作方法学评估,应用该方法对抑制性单抗SZ-21和阿司匹林抑制血小板活化的功能效果进行测定,并与流式细胞术(FCM)测定结果进行比较。结果该方法可检测血小板计数低达6.25×109/L(SZ51包被板)和3.13×109/L(7E3包被板)的标本,批内和批间变异系数均小于10%。测得50名健康正常人ADP诱导的(未诱导的)血小板的CD62P和GPⅡb/Ⅲa的A值分别为0.68±0.21(0.18±0.09)和0.87±0.29(0.44±0.14)。ELISA测定结果表明,SZ21和阿司匹林可明显抑制ADP诱导的血小板功能。流式细胞仪测定ADP诱导的(未诱导的)人血小板表面CD62P和GPⅡb/Ⅲa的阳性细胞百分率分别为(60.1±7.12)%[(2.56±0.61)%]和(86.32±17.82)%[(20.25±14.56)%],其批内和批间变异系数均<10%。结论该方法可以测定血小板功能活化剂或抑制剂对血小板功能的影响,可以测定血栓性疾病或血栓形成相关性疾病引起的血小板活化程度。
- 张有涛赵益明何杨朱明清阮长耿
- 关键词：血小板膜糖蛋白酶联免疫吸附试验
