国家自然科学基金(81271794)
- 作品数：10 被引量：25H指数：3
- 相关作者：张舒林叶娟赵俊伟孙战强刘文第更多>>
- 相关机构：上海交通大学河南中医药大学郑州大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市科委科技支撑计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 结核分枝杆菌RD12区T细胞表位分布情况预测及分析被引量：13
- 2014年
- 目的预测并分析结核分枝杆菌(MTB)RD12区4个抗原的CD4+T和CD8+T细胞表位分布情况。方法在NCBI数据库上查询并获得各个抗原的氨基酸序列,用Blast分析其与MTB复合群及人类蛋白的同源性。利用SYFPEITHI、NETCTL、BIMAS和NetMHC数据库预测并分析MTB的RD12区抗原CD8+T细胞表位的分布情况;利用NetMHC数据库预测并分析MTB的RD12区抗原的CD4+T细胞表位的分布情况。然后,综合CD4与CD8表位预测,筛选出优势表位肽段。结果通过预测与分析,初步筛选出MTB的RD12区4个抗原的CD8+T细胞候选表位16个;CD4+T细胞的强结合候选表位234个,弱结合候选表位505个,综合CD4与CD8表位预测并分析,最终筛选出13个优势表位肽段。结论预测出来的T细胞候选表位将为结核病的特异性诊断及新的抗结核多表位疫苗的研究奠定基础。
- 叶娟张舒林刘文第
- 关键词：结核分枝杆菌T细胞表位分析
- NKT细胞及其在抗结核免疫中作用的研究进展被引量：1
- 2016年
- NKT细胞是一种同时具有T细胞与NK细胞表面标志的新型淋巴细胞。具有CD1d限制性的NKT细胞在抗结核免疫中具有重要作用。本文综述NKT细胞在抗结核病免疫中的研究进展。
- 刘毅张舒林
- 关键词：NKT细胞抗结核免疫
- 分枝杆菌脂聚糖的分离、纯化及其结构和功能分析被引量：2
- 2014年
- 【目的】建立分离、纯化分枝杆菌脂聚糖的方法,初步比较分析不同菌株来源的脂阿拉伯甘露聚糖(Lipoarabinomannan,LAM)和脂甘露聚糖(Lipomannan,LM)的结构差异及研究脂聚糖刺激对巨噬细胞环氧合酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)蛋白表达的影响。【方法】应用Triton X-114液相法提取脂聚糖,电洗脱法分离纯化,基质辅助激光解析电离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF-MS)进行分子量鉴定;基于特异性识别非还原性末端α-D-甘露糖基的刀豆球蛋白(Concanavalin A,Con A)分析新诺分枝杆菌JDM601、结核分枝杆菌H37Rv标准株和耻垢分枝杆菌mc2155脂聚糖的结构差异;进一步用Western blot检测脂聚糖刺激的RAW 264.7巨噬细胞COX-2蛋白的表达。【结果】通过电洗脱法成功纯化出3种菌株脂聚糖;MALDI-TOF/TOF-MS鉴定发现,分子量从小到大依次为新诺分枝杆菌JDM601、耻垢分枝杆菌mc2155和结核分枝杆菌H37Rv来源的脂聚糖。Western blot显示,Con A能与结核分枝杆菌H37Rv标准株来源的LAM相互作用,而不能与新诺分枝杆菌JDM601和耻垢分枝杆菌来源的LAM相互作用;并且发现Con A与新诺分枝杆菌JDM601来源的LM有很强的反应,然而与其余两种来源的LM反应很弱。3种菌株来源的脂聚糖均能刺激RAW 264.7巨噬细胞COX-2蛋白的表达。【结论】首次成功对来源于中国临床分枝杆菌分离株的脂聚糖进行了分离纯化,初步探讨了不同菌株来源分枝杆菌脂聚糖的结构差异,并表明LAM和LM均能刺激巨噬细胞诱导COX-2蛋白的表达,为进一步研究其对宿主的毒力和免疫机制奠定了基础。
- 玄松花赵俊伟孙战强周业成张朝宝余晓丽郭晓奎刘文第张舒林
- 关键词：分枝杆菌脂阿拉伯甘露聚糖
- 两种组合显色系统用于分枝杆菌快速药物敏感性试验的性能研究
- 目的建立一种用于分枝杆菌快速药物敏感性试验（简称'药敏试验'）的3,3’-[1-（苯氨酰基）-3,4-四氮唑]-二（4-甲氧基-6-硝基）苯磺酸钠（XTT）/1-甲氧基-5-甲基酚嗪硫酸甲酯（1-methoxy-PMS,...
- 孙战强
- 关键词：分枝杆菌属微生物敏感性试验
- 文献传递
- 结核分枝杆菌特异性抗原ESXO的重组制备及其免疫原性评估被引量：1
- 2012年
- 目的评估结核分枝杆菌(MTB)重组特异性抗原ESXO在大肠埃希菌中的高效表达,并评价其免疫原性。方法采用常规分子克隆方法获得MTB重组蛋白ESXO。酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测84份确诊结核病(TB)患者血清和48份健康人血清中相应的抗结核ESXO抗体水平,评价血清学抗原活性,并与结核早期分泌蛋白ESAT-6和CFP-10的检测结果进行比较。结果重组特异性抗原ESXO在大肠杆菌中获得成功表达,其在E.coli BL 21 plysS(DE3)中以可溶性和包涵体两种形式存在,相对分子质量(27 300)与预期相符,血清学抗原活性评估结果显示其特异度和敏感度分别为94.0%(45/48)和32.1%(27/84),特异度与ESAT-6和CFP-10相当,敏感度高于ESAT-6。结论结核特异性抗原ESXO有望成为新的TB诊断与疫苗设计的候选抗原。
- 封莉叶娟王凤平赵俊伟吴兴福张舒林
- 关键词：克隆基因表达血清学诊断
- 结核分枝杆菌特异性抗原Rv3117的克隆表达和诱导小鼠免疫应答的实验研究被引量：2
- 2012年
- 目的克隆表达结核分枝杆菌Rv3117蛋白,并进行诱导小鼠免疫应答的初步研究。方法通过聚合酶链反应(PCR)扩增结核分枝杆菌Rv3117基因,克隆入pET32a载体,构建重组质粒pET32a-Rv3117,转化入大肠埃希菌BL21(E.coli)plysS(DE3),异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,镍柱亲和纯化,通过SDS-PAGE鉴定其表达情况;以目的蛋白免疫C57BL/6小鼠血清并行Western blotting分析。结果成功构建原核表达载体pET32a-Rv3117,获得纯化的目的蛋白,其在E.coli BL21 plysS(DE3)中主要以可溶性形式表达,相对分子质量(48 100)与预期相符。Western blotting分析结果显示在目标位置有阳性条带。结论成功克隆结核分枝杆菌重组蛋白Rv3117,其能够诱导C57BL/6小鼠的免疫应答。
- 汤俊明陈翠翠王学才赵俊伟张舒林
- 关键词：结核分枝杆菌WESTERNBLOTTING
- 分枝杆菌主要抗原成分对C57BL/6小鼠肝脏NKT细胞的免疫作用
- 2017年
- 目的·评价分枝杆菌主要抗原成分对C57BL/6小鼠肝脏NKT细胞的免疫作用。方法·采用尾静脉注射法将牛分枝杆菌BCG活菌、全菌裂解物(WCL)、总脂抗原(TLIP)、培养滤液蛋白B(CFP-B)、脂聚糖(lipoglycan)分别免疫C57BL/6小鼠,免疫后第3、6、12日时分离小鼠肝脏细胞,用流式细胞术检测小鼠肝脏NKT细胞含量变化。以未经抗原免疫小鼠作为对照。结果·流式细胞术检测结果显示:对照组、lipoglycan组、CFP-B组、TLIP组、WCL组和BCG组小鼠肝脏内NKT细胞百分比分别为(0.040 0±0.020 62)%、(0.027 8±0.039 93)%、(0.035 6±0.047 46)%、(0.411 1±0.245 38)%、(0.118 9±0.054 19)%、(0.078 9±0.045 95)%。统计学分析结果显示:小鼠肝脏内NKT细胞百分比,TLIP组和WCL组显著高于对照组(P<0.01),且TLIP组高于WCL组;其余抗原组与对照组的差异无统计学意义(P>0.05)。结论·分枝杆菌主要抗原成分中,TLIP可显著增加C57/BL6小鼠肝脏内NKT细胞数量。TLIP具有潜在的抗结核免疫作用,值得进一步研究。
- 刘毅王丹霓雷航史会影孙妍孙战强张舒林
- 关键词：分枝杆菌NKT细胞
- 结核分枝杆菌Rv0315重组蛋白ELISPOT辅助诊断活动性肺结核的应用价值被引量：1
- 2013年
- 目的用酶联免疫斑点试验(ELISPOT)评价结核分枝杆菌重组蛋白Rv0315在活动性肺结核病诊断中的应用价值。方法选取初治肺结核病患者25例和健康体检者28名分别作为结核组和对照组,应用Rv0315蛋白作为抗原对受试者外周血单核细胞进行ELISPOT检测斑点形成细胞(SFCs)的数量,判断结核分枝杆菌感染情况,并与结核早期分泌靶向抗原(ESAT6)和培养滤液蛋白10(CFP10)抗原的检测结果进行比较。结果以Rv0315、EAST6和CFP10作为抗原,用ELISPOT方法检测结核分枝杆菌感染的敏感度分别为84.0%(21/25)、80.0%(20/25)和92.0%(23/25),特异度分别为89.2%(25/28)、89.2%(25/28)和92.8%(26/28),其中Rv0315的敏感度高于EAST6但低于CFP10。结论应用重组蛋白Rv0315作为抗原建立的ELISPOT方法具有应用于活动性肺结核病辅助诊断的潜在价值。
- 周业成陈翠翠叶娟赵俊伟玄松花杨志荣张舒林
- 关键词：结核分枝杆菌酶联免疫斑点技术细胞免疫
- 结核分枝杆菌新型抗原Rv3117联合DDA/MPL佐剂作为亚单位疫苗在小鼠体内的免疫评估被引量：1
- 2015年
- 目的用结核分枝杆菌(M.tuberculosis)特异性抗原Rv3117联合双十八烷基二甲基溴化铵(DDA)/单磷酰脂质体A(MPL)佐剂构建结核亚单位疫苗(Rv3117/DDA/MPL),并在C57BL/6小鼠体内评估其加强卡介苗(BCG)首次免疫后的免疫效应。方法采用分子克隆方法构建重组质粒p ET32a-Rv3117,转入感受态大肠埃希菌BL21(DE3)PLys S,诱导表达并纯化目的蛋白,用Triton X-114相分离法去除目的蛋白中的内毒素,然后与DDA/MPL佐剂充分乳化构建亚单位疫苗。C57BL/6小鼠随机分为对照组(未予任何处理)、PBS组(免疫PBS)、BCG组(单纯首次免疫BCG)、BCG+DDA/MPL组(首次免疫BCG,2周后用佐剂DDA/MPL加强免疫2次)和BCG+Rv3117/DDA/MPL组(首次免疫BCG后用亚单位疫苗Rv3117加强免疫2次),每组5只。分别采用酶联免疫斑点检测(ELISPOT)和酶联免疫吸附测定(ELISA)技术对免疫小鼠的细胞免疫和体液免疫进行评估。结果成功克隆表达并纯化结核特异性抗原Rv3117。ELISPOT和ELISA结果显示:受10.0μg/m L结核菌素纯化衍生蛋白(PPD)刺激后,与对照组、PBS组、BCG组和BCG+DDA/MPL组比较,BCG+Rv3117/DDA/MPL组小鼠T细胞产生γ干扰素(IFN-γ)的水平明显升高(P<0.05);BCG+DDA/MPL组培养上清液中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素6(IL-6)、白介素12(IL-12p70)细胞因子水平均显著高于对照组和PBS组(P<0.05),总抗体Ig G和Ig G1亚型水平亦较高;而BCG+Rv3117/DDA/MPL组上述指标水平均显著优于BCG+DDA/MPL组(P<0.05)。结论亚单位疫苗Rv3117/DDA/MPL在C57BL/6小鼠体内可增强BCG的细胞免疫和体液免疫效应。结核分枝杆菌特异性抗原Rv3117有望成为新的结核疫苗设计及结核诊断的候选抗原。
- 叶娟高孟哲张舒林陈力孙战强
- 关键词：结核分枝杆菌亚单位疫苗体液免疫
- 结核分枝杆菌Rv2986c对小鼠树突状细胞成熟和功能的影响被引量：4
- 2017年
- 目的探索结核分枝杆菌Rv2986c蛋白诱导小鼠树突状细胞成熟及Na?ve CD4^+T细胞极化的作用。方法克隆表达Rv2986c蛋白,用纯化后的蛋白刺激小鼠树突状细胞,流式检测树突状细胞MHC-Ⅱ表面分子,ELISA检测培养上清中IL-6和IL-12p40分泌情况。将Na?ve CD4^+T细胞与经Rv2986c刺激后的树突状细胞共培养,检测培养上清中IFN-γ的分泌水平。结果成功克隆表达了Rv2986c蛋白。经Rv2986c蛋白刺激后,树突状细胞MHC-Ⅱ表面分子表达水平显著增高,IL-6和IL-12p40释放水平显著升高。淋巴细胞共培养上清液中IFN-γ分泌量显著增加。结论结核分枝杆菌蛋白Rv2986c能促进小鼠树突状细胞成熟,激活抗原递呈作用,诱导CD4^+T向Th1型极化。
- 孙妍王心倩吴启航赵隆麒李海波占卫红张舒林余晓丽
- 关键词：结核分枝杆菌树突状细胞
