国家自然科学基金(30360062)
- 作品数：16 被引量：46H指数：4
- 相关作者：张富春李轶杰王焱冰张钰庄淑珍更多>>
- 相关机构：新疆大学新疆医科大学空军总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金教育部“春晖计划”更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 增强DNA疫苗免疫应答的新进展被引量：1
- 2006年
- DNA疫苗为编码抗原蛋白的真核表达载体,注入体内后在原位表达所编码的抗原并诱导免疫应答,在预防感染、治疗自身免疫性疾病、过敏性疾病和肿瘤等疫病中有着很好的应用前景。但与灭活疫苗相比,其免疫效价还比较低。有多种策略能够增强或调节DNA疫苗诱导的免疫应答,其中,作为外源基因载体的质粒的组成及插入的有关基因均可直接或间接地影响免疫反应的效果,在构建DNA疫苗质粒时,加入细胞因子、融合信号、泛素等基因以及ISS序列,另外还可以通过设计一些对抗原提成细胞有影响的分子共注射,以及加入转移分子,都可以明显增强DNA疫苗的免疫效果,从而有利于研制更有效的DNA疫苗。
- 周璨林张富春
- 关键词：DNA疫苗免疫应答免疫刺激序列
- 草原兔尾鼠卵透明带3融合蛋白抗原的制备及免疫反应性被引量：2
- 2007年
- 目的大量制备重组的草原兔尾鼠卵透明带3（Recombinant Lagurus lagurus zona pellucida 3, r-LZP3 ）融合蛋白，并检测其免疫反应性。方法经密码子优化的Lzp3基因在E.coli BL21（DE3）中以包涵体形式表达融合蛋白，表达产物经洗涤、纯化、溶解、复性后，用Western blot、ELISA和抗生育试验鉴定免疫反应性。结果得到纯度达93％的r-LZP3蛋白。Western blot显示表达产物与LZP3小鼠抗血清出现特异性反应条带。ELISA表明免疫小鼠血清中LZP3抗体滴度达1：45000以上。抗生育试验表明r-LZP3蛋白免疫小鼠的避孕率为25％，平均每胎产仔数减少4-5只。结论已获得了大量具有显著免疫活性的r-LZP3蛋白，为控制草原兔尾鼠鼠害的研究提供了重要的抗原。
- 王焱冰李轶杰张富春
- 关键词：草原兔尾鼠卵透明带3融合蛋白免疫反应性免疫不育
- 在活体小鼠中筛选lZP3基因RNAi有效靶位点的研究被引量：4
- 2006年
- ZP3作为精子结合的靶对象在卵母细胞受精中起着关键作用,也因此而成为研究哺乳动物受精机理的焦点。本研究参照新疆草原兔尾鼠卵透明带3(zonapellucida3geneofLaguruslagurus,lZP3)的mRNA,选择了针对lZP3mRNA的3个区域合成寡聚核苷酸连接到干扰载体pGenesil-1上,构建了3个针对lZP3mRNA的重组干扰载体,和pCDNA3-lZP3表达载体采用脂质体法共转染Hela细胞以及通过尾静脉大容量快速注射法(Hydrodynamics-basedtransfectionmethod,HD法)共注射小鼠,半定量RT-PCR和real-timePCR检测Hela细胞和小鼠肝脏中lZP3mRNA的表达情况,以筛选干扰lZP3mRNA的有效靶位点。结果表明,通过HD法共注射干扰载体和表达载体后,外源基因mRNA在小鼠肝脏中的表达和共转染Hela细胞后在Hela细胞中的表达情况是一致的,有2个干扰载体可以有效干扰lZP3mRNA的表达。研究还说明,利用HD法以小鼠作为实验材料筛选RNA干扰的有效靶位点是一条切实可行的方法。
- 庄淑珍李菁菁郑耀虎张富春
- 关键词：RNA干扰靶位点共转染
- RNA干扰技术治疗疾病被引量：10
- 2007年
- RNA干扰(RNA interference,RNAi)现象最早发现于秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans),随后发现该现象普遍存在于真菌、植物和哺乳动物等真核生物,并行使基因调控和抵御外源基因片段侵袭的作用。目前,RNAi分子机制和RNAi在基因功能方面的研究已经取得了突破性的进展。鉴于RNAi在基因沉默中的特异性、高效性和易操作,其在药物筛选和疾病治疗等方面有着广泛的应用前景。然而,RNAi技术用于治疗疾病的安全性尚待确定,分子传递途径也有待进一步的研究。
- 李菁菁马正海张富春
- 关键词：RNA干扰基因治疗小干扰RNA
- 壳聚糖介导增强DNA疫苗皮肤免疫效果的研究被引量：5
- 2006年
- 目的:探讨壳聚糖(chitosan)包裹DNA疫苗皮肤免疫效果。方法:以chitosan包裹不同的草原兔尾鼠卵透明带3(LZP3)基因DNA疫苗pcDNA3-Lzp3(pLzp3)和pLC,通过皮肤擦拭免疫小鼠,以ELISA方法检测抗体水平,对卵巢做病理切片检测。结果:ELISA结果显示用chitosan包裹的pLC组在皮肤免疫中显示出优势,卵巢病理切片结果正常。结论:Chitosan包裹质粒皮肤免疫小鼠较纯质粒免疫效果更为显著。
- 王焱冰李轶杰潘鑫艳陈蓉张富春
- 关键词：卵透明带3皮肤免疫
- 草原兔尾鼠透明带3嵌合体DNA疫苗增强抗体水平的研究
- 构建含高表达信号肽、提高抗原溶解性片断及新型佐剂C3d的草原兔尾鼠透明带3真核表达载体,探讨提高草原兔尾鼠透明带3DNA疫苗免疫原性的策略。通过基因重组依次在去信号肽和跨膜区的草原兔尾鼠透明带3核心序列两端分别融合人α胰...
- 李轶杰张富春王焱冰金华利王宾
- 关键词：草原兔尾鼠DNA免疫
- 文献传递
- siRNA干扰lZP3 mRNA表达的研究
- 2007年
- 【目的】为探索新疆草原兔尾鼠(Lagurus lagurus)卵透明带3(lZP3)在精卵结合中的机理,有效的控制草原兔尾鼠的生育;【方法】将RNA干扰载体pGenesil-ZP31和真核表达质粒p-ACLC一起通过尾静脉大容量快速注射法(Hydrodynamics-based transfectionmethod,HD法)共注射小鼠。【结果】半定量RT-PCR和real-timePCR结果表明,2种质粒共注射时,pGenesil-ZP31的干涉作用至少发生在注射后的8h到10d之间;顺序性注射实验中,注射pGenesil-ZP31后间隔8h和1d再注射p-ACLC时,pGenesil-ZP31能在一定程度上干涉lZP3mRNA的表达,间隔3d以后lZP3mRNA的表达几乎不受影响,未出现干涉现象。而注射p-ACLC后间隔1h、2h、4h和8h再注射pGenesil-ZP31,lZP3mRNA的表达也受到了抑制,间隔24h时抑制现象则消失;【结论】以载体为基础的体内RNAi过程具有时间依赖性,为在卵母细胞水平进一步研究siRNA对lZP3的干涉机制提供借鉴。
- 庄淑珍郭继娜郑耀虎李菁菁张富春
- 关键词：草原兔尾鼠RNA干扰载体卵透明带3
- 分子佐剂C3d增强草原兔尾鼠卵透明带3DNA疫苗的免疫应答被引量：13
- 2006年
- 为增强免疫不育的效果,探讨分子佐剂C3d对草原兔尾鼠透明带3(LaguruslagurusZonaPellucida3,LZP3)基因免疫的调节作用。构建了含3个拷贝C3d的lzp3基因真核细胞表达质粒pcDNA3-LZP3-C3d3(pcD-LC),以不含C3d的质粒pcDNA3-LZP3(pcD-L)为对照,体外转染HeLa细胞,RT-PCR和Westernblot分别检测到lzp3mRNA和蛋白的表达。对NIH雌性小鼠肌肉进行基因免疫注射,ELISA结果表明pcD-LC免疫诱导的特异性抗LZP3-IgG水平明显高于pcD-L对照组(P<0.05),且有长期免疫应答效应;MTT结果显示pcD-LC能够诱导淋巴细胞增殖活性的提高。抗生育实验表明pcD-LC免疫组显著降低窝产仔数(P<0.05),且卵巢切片正常。研究结果证实C3d能够增强lzp3DNA疫苗的特异性免疫应答并达到抗生育效果,为DNA疫苗控制草原兔尾鼠的深入研究提供了基础。
- 王焱冰李轶杰张富春
- 关键词：草原兔尾鼠卵透明带3DNA免疫应答抗生育
- DNA疫苗免疫机制及构建优化载体的研究被引量：1
- 2007年
- 自20世纪90年代DNA疫苗在免疫学上被第一次提出来以后,10多年来DNA疫苗以其独特的优点而倍受青睐,但近来越来越多关于其免疫效力低下和对灵长类及人等大型动物收效甚微的论证制约着其广泛的应用。即是从DNA疫苗免疫机制方面对构建优化疫苗载体的最新研究进展综述。
- 张钰李轶杰张富春
- 关键词：DNA疫苗核酸免疫佐剂CTL免疫原性
- 质粒纳米乳剂的制备与阴离子交换色谱测定方法被引量：1
- 2007年
- 以纳米乳剂为载体包裹草原兔尾鼠卵透明带3DNA疫苗,制备获得了纳米乳剂DNA疫苗,并对其进行了质量评价。采用界面乳化法制备质粒纳米乳剂,用电子显微镜测定了其粒径及其分布,根据质粒的带电特性,利用强阴离子Q SepharoseTMXL色谱柱分离纳米乳剂和游离质粒,建立了强阴离子交换柱质粒纳米乳剂包封率的快速测定方法。结果表明:制备的纳米乳剂DNA疫苗的平均粒径为(23±10)nm,包封率为80.5%。选择0.05mol/L的Tris-HCl为平衡液,流速为0.7mL/min,紫外检测波长260nm,柱温30℃,进样量为2mL的实验条件,质粒的含量和峰面积的线性关系良好(r=0.9983),加样回收率在95%以上,该方法简便快速、灵敏度高,重复性好,可用于纳米乳剂DNA疫苗包封率的快速测定。
- 张爱莲吴道澄刘菲张富春
- 关键词：阴离子交换色谱纳米乳剂包封率
