国家自然科学基金(30770736)
- 作品数：9 被引量：13H指数：2
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- QDs-SA和Cy3荧光标记阿尔茨海默病细胞模型β淀粉样蛋白的比较研究被引量：2
- 2010年
- 目的:观察利用量子点(QDs)标记的链霉亲和素复合物(QDs-SA)和传统荧光染料Cy3分别标记的阿尔茨海默病(AD)转基因细胞模型β淀粉样蛋白(Aβ)在荧光强度和抗光漂白性能的差异。方法:将pcDNA3.1/APP质粒转染至HEK293细胞建立稳定表达株,Western blot法检测转染细胞APP蛋白的表达,细胞免疫荧光检测Aβ蛋白生成。建立AD转基因细胞模型,分别应用QDs-SA和Cy3细胞免疫荧光染色技术靶向标记转基因细胞模型的Aβ蛋白,激光共聚焦显微镜下对荧光强度和抗光漂白特性进行检测。结果:Western blot法在稳定转染pcDNA3.1/APP质粒的细胞中检测到APP目的蛋白谱带,而未转染的空载体转染组细胞未见APP蛋白表达。共聚焦荧光显微镜下观察到:①APP基因转染后能够生成大量Aβ蛋白;②QDs-SA特异标记的Aβ蛋白主要分布在细胞膜和胞质,显现出均匀分布的高密度橙红色强荧光;③Cy3特异标记Aβ蛋白荧光强度较QDs-SA标记弱,且细胞膜染色不均匀,部分细胞膜区域有染料少量团聚;④QDs-SA相较于传统Cy3荧光染料的平均荧光强度值更大(P<0.05),488 nm激发光连续激发12 min,QDs-SA荧光标记的Aβ蛋白仍发射较强的橙红色荧光,荧光强度下降了29.25%,而传统荧光染料Cy3荧光强度下降幅度达76.82%。结论:QDs-SA能有效识别AD转基因细胞模型中Aβ蛋白,且在光稳定性和荧光强度等方面均优于传统的Cy3荧光染料标记的免疫荧光成像。
- 唐薇婷冯莉肖波李蜀渝龙莉莉杨晓苏龙小艳
- 关键词：阿尔茨海默病量子点Β淀粉样蛋白分子成像激光共聚焦显微镜
- 量子点及Cy3免疫荧光染色标记阿尔茨海默病转基因细胞模型APP的比较研究(英文)被引量：2
- 2010年
- 目的:对比观察量子点标记的链霉亲和素复合物(QDs-SA)和传统荧光染料Cy3分别标记阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)转基因细胞模型淀粉样前体蛋白(APP)的荧光成像性能,为量子点早期应用于AD的分子影像诊断提供依据。方法:应用激光共聚焦荧光成像和流式细胞技术,对QDs-SA量子点以及传统荧光染料Cy3靶向标记AD转基因细胞模型中APP的荧光成像和抗光漂白特性进行检测。结果:激光共聚焦显微镜下QDs-SA特异标记的APP在胞膜中明显表达,呈连续分布的橙红色荧光,细胞膜未见明显的QDs-SA团聚现象。Cy3特异标记APP膜蛋白荧光强度较QDs-SA标记所示的高强度橙红色荧光弱,且胞膜染色不均匀。QDs-SA量子点的平均荧光密度值(34.2336±4.2455)明显高于传统Cy3荧光染料(21.6023±3.0102,P<0.05);488 nm激发光连续激发12 min,QDs-SA量子点荧光标记的APP仍发射较强的橙红色荧光,荧光强度仅下降27.87%,明显低于传统染料Cy3的荧光强度下降幅度79.60%(P<0.05)。流式细胞仪检测QDs-SA量子点和Cy3活细胞标记膜蛋白APP阳性率分别为(54.4700±3.4433)%和(54.3800±8.5229)%,差异无统计学意义(P>0.05),QDs-SA量子点荧光标记APP的流式荧光图形呈宽端型,流式平均荧光强度值(1 045.4167±47.3623)明显高于Cy3标记的平均荧光强度值(658.5467±55.0591),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:QDs-SA量子点荧光探针能有效识别AD转基因细胞模型中的APP;QDs-SA量子点标记APP荧光成像在光稳定性和荧光强度等方面均优于传统的Cy3荧光染料标记的免疫荧光成像。
- 冯莉李蜀渝肖波陈锶刘人恺张勇
- 关键词：阿尔茨海默病量子点APP分子成像
- 大鼠脑缺血区皮层XIAP表达的动态变化及其意义被引量：2
- 2009年
- 目的观察大鼠脑缺血区皮层XIAP表达的动态变化,探讨其在缺血后抗神经元凋亡过程中的可能机制。方法采用RT-PCR,免疫组化和western blot等方法分别从mRNA和蛋白水平测定脑缺血区皮层不同时间点XIAP表达的变化。结果XIAP转录水平和蛋白表达的改变呈时间依赖性;RT-PCR显示模型组大鼠在脑缺血后3h就有XIAP mRNA转录水平的明显上调,持续至24h后逐渐下降;免疫组化和western blot显示在脑缺血后6h有XIAP蛋白表达的增加,12h时XIAP蛋白表达至高峰(P<0.01),48h基本恢复至缺血前水平。结论XIAP在脑缺血过程中可能具有抗凋亡作用。
- 冯莉肖波毕方方吴小妹刘人恺张忱
- 关键词：缺血性脑损伤X连锁凋亡抑制蛋白
- GLP-1对AD转基因鼠氧化应激的保护作用被引量：1
- 2013年
- 目的:胰高血糖素样肽1(GLP-1)对AD转基因鼠氧化应激的保护作用及其可能机制。方法:将C57BL分为假手术组、AD组、GLP-1干预组,假手术组为正常小鼠,其他两组为AD转基因小鼠,GLP-1干预组分别侧脑室注入不同浓度(5、10、20、50、100nmol)的GLP-1,连续5d,假手术组注入同等剂量PBS。3组免疫组化检测小鼠海马Aβ蛋白表达;QDs-SA量子点检测脑组织GFAP蛋白;运用分光光度仪检测海马组织海马超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量。结果:与假手术组比较,AD模型组Aβ含量明显升高,海马GFAP阳性细胞明显深染,体积增大,数量增多,AD组SOD活性降低,MDA含量均明显高(P<0.05);干预组不同浓度的GLP-1注入能减少Aβ含量,增高SOD活性,降低MDA含量。结论:AD转基因鼠模型中Aβ含量明显升高,产生氧化应激损伤,GLP-1能通过降低氧化应激损伤减少细胞内Aβ聚集。
- 刘人恺杨春水肖波冯莉
- 关键词：阿尔茨海默病GLP-1氧化应激
- 幽门螺杆菌对多巴胺能细胞系SH-SY5Y损伤作用的体外研究被引量：5
- 2009年
- 目的探讨幽门螺杆菌(HP)对多巴胺能细胞系SH-SY5Y的损伤作用及其机制。方法体外培养多巴胺能细胞系SH-SY5Y细胞分别加入HP上清蛋白(HP组)、1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)(PD组)和培养液(对照组),用噻唑蓝(MTT)染色法检测细胞存活率,用共聚焦显微镜、分光光度仪检测细胞内活性氧(ROS)和线粒体呼吸链酶复合体活性。结果HP组和PD组细胞的存活率明显下降,高浓度HP组细胞生存率明显低于中、低浓度HP组(均P<0.05)。与对照组比较,HP组和PD组细胞内ROS水平明显减少、线粒体呼吸链酶复合体活性下降(均P<0.05)。结论HP分泌成分对多巴胺能细胞有与MPP+相似的损伤作用,氧化应激反应及线粒体功能受损可能是其导致多巴胺能细胞损伤的机制。
- 刘人恺冯莉肖波罗晨吴志国龙莉莉卢晓琴
- 关键词：幽门螺杆菌线粒体损伤
- Smac/DIABLO在大鼠缺血皮质的变化及意义
- 2009年
- 目的:观察大鼠缺血区皮质Smac/DIABLO的动态变化,探讨Smac/DIABLO在缺血后神经元凋亡过程中的可能作用机制。方法:SD大鼠130只,随机分为对照组50只和模型组80只,采用RT-PCR、免疫组化和Western blot方法分别从mRNA和蛋白水平测定2组大鼠缺血区皮质在脑缺血后不同时间点Smac/DIABLO的表达变化。结果:Smac/DIABLO基因转录水平和蛋白表达的改变呈时间依赖性。RT-PCR显示模型组大鼠在脑缺血后3 h就有明显的Smac/DIABLO mRNA表达上调,持续至24 h后逐渐下降,48 h时恢复至缺血前水平;免疫组化和Western blot显示在脑缺血后3 h Smac/DIABLO蛋白表达增加,6 h蛋白表达至高峰(P<0.01),48 h基本恢复至缺血前水平。Smac/DIABLO mRNA转录水平改变提前于Smac/DIABLO蛋白表达。结论:Smac/DIABLO可能在脑缺血后神经细胞凋亡过程中起重要作用。
- 冯莉肖波毕方方吴小妹刘人恺张忱
- 关键词：缺血性脑损伤SMAC/DIABLO细胞凋亡
- GLP-1对阿尔茨海默病细胞模型保护作用的体外研究被引量：1
- 2013年
- 目的:探讨胰高血糖素样肽1(GLP-1)对APP瑞典突变体质粒转染构建的阿尔茨海默病(AD)细胞模型的保护作用及可能机制。方法:将人肾上皮细胞系HEK293分为对照组、转染组、GLP-1干预组,对照组不予任何处理,其他两组构建APP瑞典突变体质粒转染的AD细胞模型,GLP-1干预组分别加入不同浓度(5、10、20、50、100μmol/L)的GLP-1;3组均在培养前及培养6、12、24、48及72 h收集细胞上清液,ELISA检测β淀粉蛋白(Aβ)含量,QDs-SA细胞免疫荧光染色检测Aβ的变化,运用DCFH-DA检测细胞内活性氧(ROS)。结果:与对照组比较,转染组Aβ含量及ROS水平明显升高(P<0.05);GLP-1干预组不同浓度的GLP-1和培养时间增加均能减少Aβ含量和ROS水平。结论:APP瑞典突变体质粒转染的AD细胞模型会使Aβ含量明显升高,产生氧化应激损伤,GLP-1能通过降低氧化应激损伤减少细胞内Aβ聚集,并具有浓度-时间依赖性。
- 刘人恺杨春水肖波吴志国
- 关键词：阿尔茨海默病氧化性应激淀粉样蛋白
- 量子点和量子点-Aβ-Ab探针对活体动物的毒性研究
- 2011年
- 目的通过组织形态学和动物行为学观察、肝肾功能测定系统考察量子点及制备的量子点-Aβ-Ab探针的生物毒性作用,以此评价量子点及探针的生物相容性。方法将正常C57BL小鼠30只随机分为量子点(QDs)组、量子点-Aβ-Ab(QDs-Aβ-Ab)组和对照组,每组10只,分别行量子点、量子点-Aβ-Ab探针、PBS侧脑室注射后,行HE染色、尼氏体染色、动物行为学观察及肝肾功能测定。结果 HE染色和尼氏染色示QDs组、QDs-Aβ-Ab组海马CA1区神经元形态正常,尼氏体清晰可见,与对照组无差异。行为学观察7 d,3组小鼠进食进水正常,二便正常,无举尾、无皮肤毛发颜色改变,无步态异常、无兴奋抑制反应,无死亡。QDs组和QDs-Aβ-Ab组血清ALT、AST、BUN和CRE水平与对照组无明显差异(P>0.05)。结论量子点及量子点-Aβ-Ab探针对小鼠整体毒性作用小,生物相容性好。
- 刘人恺肖波曾畅吴志国冯莉
- 关键词：量子点生物相容性C57BL小鼠
- 星形诺卡菌对多巴胺能细胞损伤的体外研究
- 2008年
- 目的探讨与帕金森病可能相关的星形诺卡菌导致多巴胺能细胞损伤的可能机制。方法测定星形诺卡菌作用于多巴胺能细胞系SH-SY5Y后细胞存活率的变化、线粒体呼吸链复合物Ⅰ活性及细胞内活性氧、线粒体膜电位的改变,并与MPP+所致的多巴按能细胞损伤进行对比。结果星形诺卡菌作用于多巴胺能细胞系SH-SY5Y,可致细胞存活率显著下降;星形诺卡菌与细胞共孵4～38h,细胞内活性氧减少、膜电位降低、线粒体呼吸链复合物Ⅰ活性显著下降。结论氧化应激及线粒体功能受损是导致多巴胺能细胞损伤的可能机制,最终致细胞变性死亡。
- 刘人恺肖波杨晓苏冯莉
- 关键词：帕金森病星形诺卡菌线粒体损伤
