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BrdU标记小鼠视网膜祖细胞的研究被引量：1: 2013年; 为了探讨BrdU(5-Bromo-2′-deoxyuridine)体外标记视网膜祖细胞(RPCs)的适宜浓度,将不同浓度BrdU(0.2、1、5和10μmol/L)与小鼠孕龄(E)17.5dRPCs共培养48h后,进行增殖或分化培养。用免疫荧光检测BrdU标记百分率及细胞分化潜能,用细胞计数法检测其增殖能力,用乳酸脱氢酶(LDH)法检测其细胞毒性。结果发现,0.2μmol/L BrdU不能明显标记RPCs,而1、5和10μmol/L 3种浓度BrdU均可有效标记RPCs,且三者的标记率相近(P>0.05),1μmol/L BrdU无明显细胞毒性,对RPCs增殖、分化亦无明显影响,而5μmol/L和10μmol/L Br-dU均能抑制细胞增殖,并引起LDH释放增加,说明有明显的细胞毒性,10μmol/L BrdU还会阻碍RPCs向MAP2+神经元方向分化,但对其向GFAP+或glutamine synthetase+神经胶质细胞分化无明显影响。本研究表明,1μmol/L BrdU既能有效标记E17.5RPCs,又无显著毒副作用,是较适宜的浓度。; 孙雪荣董志章邓飞胡惠玲葛坚; 关键词：BRDU 细胞毒性分化

清热祛湿健脾方抗乙型肝炎肝纤维化的研究被引量：1: 2017年; 目的:观察清热祛湿健脾方对慢性乙型肝炎肝纤维化的临床疗效及其对TGF-β1和PDGF的影响。方法:将本院100例慢性乙型肝炎早期肝硬化患者纳入研究,随机分为对照组及观察组,各50例。2组患者均接受多烯磷脂酰胆碱胶囊改善肝功能、恩替卡韦抗病毒治疗,观察组在对照组治疗方案基础上加用清热祛湿健脾方,2组均接受为期24周的治疗疗程,治疗结束后比较2组患者肝功能、肝纤维化指标、肝脏彩超结果以及外周血清TGF-β1和PDGF浓度变化。结果:1)治疗后2组患者肝功能、肝纤维化指标、肝脏彩超结果均较治疗前有所改善,其中观察组改善幅度较对照组明显,差异均有统计学意义(P<0.05);2)治疗后2组患者外周血清TGF-β1和PDGF水平均较治疗前下降,其中观察组下降趋势较对照组明显,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:清热祛湿健脾方可明显改善慢性乙型肝炎肝纤维化的病情,其作用机制可能与下调外周血清TGF-β1和PDGF水平有关。; 鲁艳平郑娟丽杨从意陈慧基赵志恩; 关键词：慢性乙型肝炎肝纤维化 TGF-Β1 PDGF

人Ism1表达载体的构建及其在293T细胞的表达: 2013年; 目的:构建人Ism1基因真核表达载体,并验证其在真核细胞中的表达,为相关研究奠定基础。方法:采用高保真DNA聚合酶和GC缓冲液从A549细胞扩增获取人Ism1编码序列全长,经酶切、连接、转化后,挑取阳性克隆进行菌液PCR、双酶切,及测序鉴定;用构建成功的Ism1表达载体转染293T细胞,用实时定量RT-PCR检测Ism1表达水平。结果:构建的Ism1载体经菌液PCR,双酶切鉴定后,测序结果完全正确,载体转入293T细胞后,Ism1表达量显著上升。结论:成功构建能在真核细胞中表达的人Ism1基因载体,将为相关研究提供便利。; 孙雪荣邓韵婷崔红晶郑慧玲薛传静荆霞刘新光; 关键词：基因重组 293T细胞

早、晚代MEF用于人胚胎干细胞培养的能力差异及分泌机制被引量：1: 2016年; 目的比较早、晚代小鼠胚胎成纤维细胞(Mouse embryonic fibroblasts,MEF)维持人胚胎干细胞(Humanembryonic stem cells,h ESCs)正常生长的能力差异,并从分泌因子角度探讨其机制,为开发基于晚代MEF的h ESCs培养体系奠定基础。方法以P3或P9代MEF为饲养层培养h ESCs;通过添加碱性成纤维细胞生长因子(Basic fibroblastgrowth factor,b FGF)调节MEF分泌因子表达;用β-半乳糖苷酶活性染色检测细胞衰老;用定量RT-PCR检测基因的m RNA表达水平;用ELISA检测TNF-a的分泌量。结果 P3代MEF增殖较快,能维持h ESCs正常增殖,而P9代MEF呈现衰老表型,不能维持h ESCs正常增殖。P9代MEF表达多种分泌因子(Grem1、Tgfb1、Inhba、Bmp4和Tgfb2)及衰老相关分泌表型(Senescence-associated secretory phenotype,SASP)因子(Il-1a和Tnfa)的水平均明显高于P3代MEF。加入b FGF后,P3和P9代MEF的Grem1、Tgfb1和Inhba的表达均明显升高,而Bmp4和Tgfb2表达均下降。结论 P9代MEF保留对b FGF的反应性,但有明显衰老表型及SASP,SASP的出现可能是P9代MEF不能维持h ESCs正常生长的重要原因。; 周家宝全湛柔黄春燕李远全钟观清刘玉生王登川朱朱石本艳刘新光孙雪荣; 关键词：小鼠胚胎成纤维细胞细胞衰老分泌

Plasmocin对人胚胎干细胞支原体污染的杀灭效果被引量：1: 2013年; 目的人胚胎干细胞(hESCs,human embryonic stem cells)应用广泛,但来源有限。前期检测发现本室培养的H9 hESCs有支原体污染。本研究拟探讨高效支原体杀灭剂plasmocin去除hESCs支原体污染的可能性,及其对hES增殖、分化的影响。方法常规培养hESCs细胞,用切割法进行传代。分别用低(12.5μg/ml)、中(25μg/ml)、高(37.5μg/ml)浓度plasmocin处理hESCs 2～3周,用PCR法检测支原体,用结晶紫染色观察hESCs克隆大小,显微镜下观察hESCs分化状况。结果低、中、高浓度plasmocin处理2周均不能杀灭hESCs的支原体,延长高浓度plasmocin处理时间至3周,亦未能杀灭支原体。实验发现,plasmocin呈剂量依赖性抑制hESCs增殖,且高浓度plasmocin可诱导hESCs分化,而高浓度bFGF(40 ng/ml)则能部分阻断plasmocin抑制增殖和诱导分化的作用。结论plasmocin未能去除hESCs的支原体污染,可能与支原体产生抗药性及hESCs的克隆生长特性有关。; 孙雪荣王卫鸿陈嘉邓韵婷周家宝钟平全湛柔刘新光; 关键词：胚胎干细胞支原体 BFGF 增殖

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广东省医学科学技术研究基金(A2012420)