国家重点基础研究发展计划(2006CB504404)
- 作品数：14 被引量：80H指数：6
- 相关作者：焦新安潘志明陈祥黄金林孟闯更多>>
- 相关机构：扬州大学华中农业大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 嵌合鞭毛蛋白fliC/esat的佐剂效应研究
- 目的:为研究嵌合表达结核分枝杆菌(MTB)抗原ESAT-6的鞭毛蛋白的免疫佐剂效应。方法:PCR方法扩增鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白基因fliCi及MTB抗原ESAT-6编码序列,通过overlap PCR将ESAT-6编码序列...
- 张辉文科黄金林胡茂志申峻松潘志明焦新安
- 关键词：ESAT-6鞭毛蛋白佐剂TH1应答
- 文献传递
- 表达绿色荧光蛋白的单核细胞增生李斯特菌重组菌株的构建及其生物学特性被引量：1
- 2009年
- 目的为了对单核细胞增生李斯特菌运送外源抗原所诱导免疫应答特性进行评价,开展了以原核方式运送模式蛋白GFP的研究。方法利用SOEing PCR的方法把LLO的启动子与GFP融合在一起,通过同源重组的方式整合到yzuLM1-2actA和plcB基因片段之后,在LLO启动子的作用下实现GFP的表达。结果PCR扩增证实目的基因gfp融合到李斯特菌基基因组中,重组菌对小鼠的LD50为4.31×108,毒力比yzuLM1-2显著降低。以重组菌株免疫小鼠后获得的血清进行Western blot显示在27kD处出现特异印迹带;ELISA测定结果显示能诱导小鼠产生较高的抗GFP的抗体水平。结论研究结果表明减毒LM所运送的GFP能诱导小鼠产生较强的免疫应答的特性,这为减毒株yzuLM1-2运送外源保护性抗原的研究奠定了基础,也为开展减毒重组菌与抗原递呈细胞之间的相互作用及其诱导的免疫应答分析提供了必要条件。
- 殷月兰焦新安杨芸张晨菊周海霞潘志明黄金林
- 关键词：单核细胞增生李斯特菌绿色荧光蛋白重组菌株生物学特性
- 小鼠巨噬细胞系体外感染卡介苗的应答被引量：1
- 2010年
- 【目的】探讨小鼠巨噬细胞系RAW264.7体外感染卡介苗的应答。【方法】体外感染RAW264.7细胞23h后,分析细胞形态和细胞表面共刺激分子的表达。然后去除培养上清中的卡介苗,继续培养不同时间,通过CFSE、annexin V/PI和Rh123标记,分析宿主细胞的应答。【结果】卡介苗感染23h后,细胞生长状态良好,细胞内能明显观察到吞噬泡中的BCG。细胞表面共刺激分子CD40、CD54、CD80、CD86、CD11b的表达明显升高,CD11c、I-Ad以及H-2Kd的表达变化不明显。CFSE标记卡介苗后,随着培养时间的延长,荧光强度逐渐减弱,但是4天后仍然明显地高于对照组。除去培养上清中的卡介苗后继续培养,含有卡介苗的细胞逐渐减少,继续培养60h后基本检测不到。另外,卡介苗感染不能诱导细胞凋亡,线粒体膜电位先升高后降低,5d后,基本上与对照组一致。【结论】通过以上分析,为卡介苗免疫机理的研究提供了重要数据。
- 胡茂志陈义芳韩璐季琰郑佳玉孟闯周海霞陈祥焦新安刘秀梵
- 关键词：卡介苗RAW264.7共刺激分子线粒体膜电位
- 结核分枝杆菌RD1区rv3873基因的原核表达及其产物的细胞免疫特性初步分析被引量：2
- 2010年
- 目的克隆表达结核分枝杆菌RD1区Rv3873蛋白并初步分析其细胞免疫特性。方法应用PCR技术扩增rv3873基因,插入表达载体pET30a(+),构建原核表达重组质粒pET-Rv3873,重组质粒在宿主菌BL21(DE3)诱导表达,利用表达的蛋白腹腔注射免疫小鼠,以细胞增殖和ELISPOT试验测定融合蛋白的细胞免疫应答。结果克隆的rv3873测序与已发表序列100%同源,融合蛋白大小43ku,淋巴细胞增殖实验显示该蛋白能引起小鼠T细胞免疫反应,ELISPOT实验结果表明多肽pep3873刺激特异性IFN-γ分泌细胞多于IL-4分泌细胞。结论成功地克隆表达了Rv3873蛋白,并发现该蛋白具有良好的细胞免疫特性。
- 周海霞陈祥郑佳玉牛中伟潘志明焦新安
- 关键词：结核分枝杆菌IFN-Γ
- 小鼠骨髓源性树突状细胞的体外诱导被引量：1
- 2007年
- 分离树突状细胞（DC）的原理是依据DC的低密度和半黏附特性，DC缺乏Fc受体，可对获得的DC进一步纯化。这种方法获取的DC数量有限。细胞因子诱生法是目前体外扩增DC常用的方法。其中，扩增效果最好的细胞因子是粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM—CSF）和白细胞介素4（IL-4）。
- 胡茂志戴华焦新安张辉潘志明高明燕程宁宁刘秀梵
- 关键词：树突状细胞粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子体外诱导髓源性鼠骨白细胞介素
- 副猪嗜血杆菌的耐药性研究
- 副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)病表现为猪的多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎,该病已成为影响世界养猪业的最重要的细菌性疾病之一。本研究用琼脂稀释法检测了本室2007-2008年分离自我国13个...
- 周学利蔡旭旺陈焕春徐晓娟赵雅欣陈品张璇
- 关键词：副猪嗜血杆菌耐药性血清型毒力
- 文献传递
- 牛γ-干扰素ELISA检测方法的建立与初步应用被引量：16
- 2010年
- 以纯化的rHis-BoIFN-γ制备兔多抗血清,辛酸—硫酸铵两步法对体内诱生的抗rBoIFN-γ单抗腹水进行纯化,用美洲商陆素(Pokeweed mitogen,PWM)刺激奶牛全血产生的分泌性天然BoIFN-γ筛选出与之反应最佳的单抗5E11。将单抗5E11以40μg/mL浓度包被,与1∶3 000倍稀释的兔抗rHis-BoIFN-γ多抗血清(13.8μg/mL)配对,以1∶6 000稀释的商品化酶标羊抗兔IgG为指示抗体,建立了BoIFN-γ抗原捕获ELISA检测方法,该方法可以检出2.56 U/100μL(30.5 pg/100μL)的rHis-BoIFN-γ、8U/100μL的rBac-BoIFN-γ和1U/100μL的分泌性天然BoIFN-γ。以商品化试剂盒作为平行对照,将获得的奶牛临床检测血浆样品使用BoIFN-γ抗原捕获ELISA法进行检测,结果显示两种方法检测符合率达到83.9%。本研究建立的BoIFN-γ抗原捕获ELISA检测方法可有效检测分泌性IFN-γ,为进一步开发BoIFN-γELISA检测试剂盒奠定了基础。
- 陈祥牛中伟徐正中孟闯孙林黄金林潘志明焦新安
- 关键词：Γ-干扰素单克隆抗体
- 重组牛γ-干扰素单克隆抗体的研制被引量：13
- 2009年
- 为制备针对重组牛γ-干扰素(rBoIFN-γ)的单克隆抗体(mAb),以纯化的原核表达融合蛋白rHis-BoIFN-γ为免疫原,用纯化的rGST-BoIFN-γ为筛选抗原,应用淋巴细胞杂交瘤技术,研制抗rBoIFN-γ的mAb。结果获得13株稳定分泌抗BoIFN-γmAb的细胞株,命名为1C12、1F7、1G5、3E6、4D5、5E11、5G4、6F8、6G6、7E9、8D3、8F8和9G11。腹水的效价除单抗9G11外,其余效价都在1∶80 000以上;除5G4mAb亚类为IgG2b外,其余均为IgG1。Dot-ELISA结果表明,所得单抗只与融合蛋白rHis-BoIFN-γ和rGST-BoIFN-γ反应,而不与其它重组细胞因子和对照细菌反应,显示其良好的特异性。Western blot显示所获单抗能与相应的融合蛋白发生反应,出现特异性条带。同时所获单抗均能与牛IFN-γ标准品反应。13株单抗均为针对rBoIFN-γ的特异性mAb,为进一步研究rBoIFN-γmAb在牛的免疫调控、牛疫病的致病机制及其诊断中的应用奠定基础。
- 张成全陈祥牛中伟杨卫冲徐正中孟闯潘志明黄金林焦新安
- 关键词：原核表达单克隆抗体
- 结核分枝杆菌Ⅶ型分泌系统的研究进展被引量：1
- 2010年
- 孙林霍如松焦新安
- 关键词：结核分枝杆菌革兰氏阴性菌细胞外基质毒力因子细胞表面
- 猪链球菌IgG结合蛋白的原核表达及其与不同动物IgG的结合性被引量：3
- 2009年
- 猪链球菌IgG结合蛋白(SPG)是一种可与多种动物IgG结合的细胞壁蛋白,广泛地存在于猪链球菌的各个血清型中,被认为是共同抗原。然而其在猪链球菌中的生物学意义并不清楚。本实验用PCR方法从猪链球菌1/2、1、2和9型菌株基因组中扩增SPG基因,构建pET28a-SPG重组表达载体,将其转入大肠杆菌BL21菌株。IPTG诱导表达后,重组蛋白经SDS-PAGE及Western blotting鉴定为可高效表达。镍亲和层析及分子筛两步纯化后获得纯度较高的目的蛋白。Western blotting及ELISA试验结果表明,所有纯化的目的蛋白均可与不同动物IgG结合,其中与人和猪IgG的结合能力相对较高,但不同血清型猪链球菌SPG与同种动物IgG的结合活性没有明显差异。
- 王婧张安定李冉金梅林
- 关键词：猪链球菌原核表达亲和性
