天津市应用基础与前沿技术研究计划(13JCQNJC11400) 作品数:4 被引量:29 H指数:3 相关作者: 于泳浩 谢克亮 王国林 李媛 陈红光 更多>> 相关机构: 天津医科大学总医院 南开大学附属医院(天津市第四医院) 更多>> 发文基金: 天津市应用基础与前沿技术研究计划 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
Nrf2在氢气治疗严重脓毒症肠损伤中的作用 被引量:18 2014年 目的 探讨Nrf2在氢气治疗严重脓毒症肠损伤中的作用.方法 将152只雄性ICR小鼠按随机数字表法分为假手术组、氢气对照组、脓毒症组和氢气治疗组4组,每组38只.采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症模型,假手术组和氢气对照组不进行CLP,其他操作相同.氢气对照组和氢气治疗组于假手术或CLP后1h、6h分别吸入2%氢气1h.每组取20只小鼠,观察术后7d内的生存率.每组剩余18只小鼠,分别于术后6、12和24 h各处死6只,取部分肠组织,用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测Nrf2、高迁移率族蛋白B1 (HMGB1)的蛋白表达;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Nrf2 mRNA表达;于术后24 h取部分中段空肠,行苏木素-伊红(HE)染色,光镜下观察肠组织损伤程度.结果 假手术组和氢气对照组各指标差异均无统计学意义.脓毒症组小鼠7d生存率较假手术组明显降低(0比100%,P<0.05);氢气治疗组小鼠7d生存率较脓毒症组明显升高(55%比0,P<0.05).与假手术组比较,脓毒症组术后6、12和24 h肠组织Nrf2的蛋白表达(灰度值)和mRNA表达均明显升高(Nrf2蛋白6 h:1.973±0.350比1.000±0.000,t=4.411,P=0.002; 12 h:2.367±0.186比1.000 ±0.000,t=10.210,P=0.000; 24 h:2.517±0.280比1.000±0.000,t =9.521,P=0.000;Nrf2 mRNA 6 h:1.606±0.271比1.000 ±0.000,t=3.631,P=0.002; 12 h:1.692±0.399比1.000±0.000,t=3.233,P=0.005;24 h:1.784±0.341比1.000±0.000,t=3.894,P=0.001),术后24 h肠组织HMGB1表达(灰度值)明显升高(1.507±0.220比1.000±0.000,t=3.948,P=0.004).与脓毒症组比较,氢气治疗组术后6、12和24 h肠组织Nrf2的蛋白和mRNA表达明显升高(Nrf2蛋白6 h:2.583±0.395比1.973±0.350,t=2.765,P=0.024; 12 h:2.725±0.235比2.367±0.186,t=2.674,P=0.028; 24 h:2.930±0.212比2.517±0.280,t=2.595,P=0.032; Nrf2 mRNA 6 h:2.008±0.400比1.606±0271,t=2.405,P=0.029;12 h:2.188 ±0.475比1.692±0.399,t=2.317,P=0.034;24 h:2.333±0.406比1.78 李媛 谢克亮 陈红光 王卫娜 王国林 于泳浩关键词:NRF2 脓毒症 氢气 肠组织 高迁移率族蛋白B1 Rho激酶在氢气保护LPS诱导的Caco-2细胞上皮屏障功能障碍中的机制研究 被引量:2 2016年 目的探讨Rho激酶(ROCK)在氢气改善离体脓毒症肠屏障功能中的作用。方法常规培养人结肠上皮细胞Caco-2,分为6组(n=3):对照组(C组)、富氢培养基组(H组)、脂多糖(LPS)处理组(L组)、富氢培养基+LPS组(HL组)、Rho激酶抑制剂Y-27632组(Y组)、Y-27632+LPS组(YL组)。H组给予0.6 mmol/L富氢培养基;LPS和Y-27632的处理浓度分别为50 mg/L、25μmol/L。建立Transwell小室模型,定期检测跨上皮电阻值(TEER值),当TEER值达到800Ω·cm^2后给予处理,于6、12、24 h检测TEER值,24 h时检测FITC-右旋糖酐通过率。细胞接种于6孔板,融合达80%~90%后给予处理,实时聚合酶链式反应技术检测闭锁小带蛋白1(ZO-1)mRNA和ROCK mRNA表达情况;蛋白免疫印迹技术检测ZO-1蛋白和ROCK蛋白表达水平。结果与C组比较,H组12、24 h TEER值升高(P<0.05),FITC-右旋糖酐通过率、ZO-1蛋白和ROCK蛋白表达水平差异无统计学意义;Y组6、12、24 h TEER值升高(P<0.05),FITC-右旋糖酐通过率差异无统计学意义,ZO-1 mRNA表达增加,ROCK mRNA表达减少(均P<0.05);L组6、12、24 h TEER值降低,FITC-右旋糖酐通过率增高,ZO-1 mRNA和蛋白表达均下降,ROCK mRNA和蛋白表达均增加(P<0.05)。与L组比较,6、12、24 h YL组TEER值增高,FITC-右旋糖酐通过率降低,ZO-1 mRNA表达增加,ROCK mRNA表达降低(均P<0.05)。与L组比较,HL组6、12、24 h TEER值增高,FITC-右旋糖酐通过率降低,各时间点ZO-1蛋白表达上升,ROCK蛋白表达下降(均P<0.05)。结论氢气可保护脓毒症肠屏障功能,改善肠上皮屏障完整性和通透性,增加肠细胞间紧密连接蛋白表达,这些保护机制可能与氢气抑制LPS诱导的ROCK过度表达有关。 马小叶 于洋 张红涛 谢克亮 于泳浩关键词:RHO相关激酶类 脂多糖类 CACO-2细胞 氢气对重度烧伤小鼠早期肺损伤的影响 被引量:5 2017年 目的探讨氢气对重度烧伤小鼠早期肺损伤的影响。方法取160只ICR小鼠,按随机数字表法分为假伤组、氢气组、单纯烧伤组、烧伤+氢气组,每组40只。单纯烧伤组和烧伤+氢气组小鼠背部制作40%TBSA Ⅲ度烫伤(以下称烧伤)模型,假伤组和氢气组小鼠模拟致假伤。分别于伤后1、6 h,氢气组和烧伤+氢气组小鼠吸入体积分数2%氢气1 h,假伤组和单纯烧伤组小鼠吸入空气1 h。伤后24 h,各组取6只小鼠肺组织,行HE染色,观察肺组织病理变化,并计算肺组织损伤病理学评分。各组另取8只小鼠,取下腔静脉血和肺组织,采用ELISA法检测血清和肺组织中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、IL-6的含量,分光光度法检测血清和肺组织中SOD活性。各组另取6只小鼠,取动脉血测定PaO2,取肺组织,称量肺湿干质量,计算肺湿干质量比。计算各组剩余20只小鼠伤后7 d内的存活率。对数据行单因素方差分析、LSD检验和log-rank检验。结果(1)伤后24 h,假伤组和氢气组小鼠肺组织未见异常;单纯烧伤组小鼠肺间质水肿,肺泡毛细血管壁严重破裂,出现大量炎性细胞浸润;烧伤+氢气组小鼠肺间质轻度水肿,肺泡毛细血管充血伴少量破裂出血,炎性细胞浸润较单纯烧伤组少。假伤组、氢气组、单纯烧伤组和烧伤+氢气组小鼠肺组织损伤病理学评分分别为(0.7±0.5)、(0.8±0.5)、(6.1±1.0)、(2.8±0.8)分,单纯烧伤组小鼠肺组织损伤病理学评分较假伤组显著升高(P〈0.001),烧伤+氢气组小鼠肺组织损伤病理学评分较单纯烧伤组显著降低(P〈0.001)。(2)伤后24 h,氢气组小鼠血清和肺组织中HMGB1、IL-6含量与假伤组相近(P值均大于0.05),单纯烧伤组小鼠血清和肺组织中HMGB1、IL-6含量较假伤组显著升高(P值均小于0.001),烧伤+氢气组小鼠血清和肺组织中HMGB1、I 秦超 边映雪 冯甜甜 张金辉 于泳浩关键词:烧伤 HMGB1蛋白 白细胞介素6 超氧化物歧化酶 氢气 Nrf2在氢气改善脓毒症小鼠脑功能障碍中的作用 被引量:7 2014年 目的 探讨核因子E2相关因子2(Nrf2)在氢气改善脓毒症小鼠脑功能障碍中的作用.方法 按随机数字表法将雄性ICR小鼠分为假手术组、氢气对照组、脓毒症组和氢气治疗组,每组20只.采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症模型;氢气治疗组于术后1h、6h吸入2%氢气1h.各组于术后24 h取脑组织,光镜下观察海马组织病理学改变和神经元凋亡情况;蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测海马组织核Nrf2和总Nrf2的蛋白表达;检测海马组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)、8-异前列腺素F2α(8-iso-PGF2α)的水平.术后4~9d通过Morris水迷宫实验检测小鼠的学习和记忆能力.结果 与假手术组和氢气对照组比较,脓毒症组海马CA1区正常椎体神经元明显减少,神经元凋亡指数明显增高;核Nrf2和总Nrf2表达明显增加;海马SOD和CAT活性明显降低,MDA和8-iso-PGF2α浓度明显增高;术后4~8d小鼠逃避潜伏期明显延长,游泳速度无差异,探索期在目标象限时间百分比和穿过站台次数明显减少.与脓毒症组相比,氢气治疗组海马CA1区正常椎体神经元明显增加(个:67.33±6.89比42.33±6.02,P<0.01),神经元凋亡指数明显降低[(30.00±4.77)%比(80.50±6.99)%,P<0.01];核Nrf2和总Nrf2表达均明显增加[核Nrf2(A值):5.07±0.35比3.04±0.34,总Nrf2(A值):4.24±0.58比2.91±0.37,均P<0.01];海马SOD和CAT活性明显提高[SOD (U/mg):120.96±13.44比81.16±12.28,CAT(U/mg):9.11±1.28比5.64±1.88,均P<0.01],MDA和8-iso-PGF2α浓度明显降低[MDA (nmol/mg):16.12±1.49比27.64±1.87,8-iso-PGF2α(pg/mg):183.43±13.07比864.07±49.92,均P<0.01];术后5~8d小鼠逃避潜伏期明显缩短,游泳速度无差异,探索期在目标象限时间百分比[(37.06±1.16)%比(24.42±1.82)%,P<0.01]和穿过站台次数(次:7.13±0.98比4.88±0.99,P<0.01)明显增加.假手术组和氢� 刘玲玲 谢克亮 陈红光 东晓晴 王国林 于泳浩关键词:核因子E2相关因子2 氢气 脓毒症 脑功能障碍