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实时荧光定量聚合酶链反应诊断面肩肱型肌营养不良被引量：4: 2009年; 目的建立面肩肱型肌营养不良（FSHD）的实时荧光定量PCR（FQ—PCR）检测方法。方法常规酚-氯仿法抽提基因组DNA，通过EcoRI酶切及琼脂糖凝胶电泳，回收38kb以下DNA作为模板，根据4号染色体上D424序列设计特异的引物和探针，对115例研究对象进行FQ—PCR检测，根据荧光曲线与阳性对照的比较判断结果。结果16例已知EcoRI片段大小的FSHD患者FQ—PCR检测结果为13例阳性，78名健康人检测结果除3例阳性外其余均为阴性，16例经临床诊断的新FSHD患者和5名高危者中分别有15例和3例检测结果为阳性。统计学分析FQ—PCR方法与传统印迹杂交方法（K=0．765，P=0．002）及临床诊断（k=0．844，P=0．000）之间的一致性，结果有统计学意义。结论我们创建了以FQ—PCR技术对FSHD进行基因诊断的新方法。该方法能克服印迹杂交方法费时费力、有放射性污染的缺点，且能较好解决由于4q-10q易位及p13E-11探针结合部位缺失造成传统杂交基因诊断方法欠准确的问题，具有较好的临床应用价值。; 苏全喜李婉仪张成熊符申本昌洪铭范卢锡林; 关键词：肌营养不良面肩肱型聚合酶链反应易位

面肩肱型肌营养不良实时荧光定量PCR诊断方法的影响因素分析被引量：1: 2011年; 目的分析探讨面肩肱型肌营养不良(FSHD)实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)诊断方法的影响因素。方法通过改变镁离子终浓度、PCR扩增中退火温度、退火时间或延伸时间、RNase H酶用量和活性等,确定FQ-PCR诊断FSHD的最佳反应条件。结果退火温度55℃、时间20s、镁离子终浓度5.0mM、RNase H酶用量100U、RNase H酶在95℃下灭活8min为最佳反应条件,其中RNase H的活性选择对FSHD诊断的特异性影响较大。结论通过降低RNase H酶的活性可提高诊断的特异性,最终确立了FSHD的FQ-PCR基因诊断最佳反应条件。; 苏全喜李婉仪张成熊符洪铭范刘爱群田素娟; 关键词：肌营养不良面肩肱型 RNASE

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广东省自然科学基金(8151008018000002)