“十二五”国家科技计划农村领域(2011AA100302)
- 作品数：4 被引量：6H指数：1
- 相关作者：史巧芸王凤阳郭莳雨张珈宁荣辉更多>>
- 相关机构：海南大学中国热带农业科学院更多>>
- 发文基金：“十二五”国家科技计划农村领域中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 布鲁氏菌外膜蛋白16基因的克隆及原核表达被引量：6
- 2013年
- 为了成功克隆外膜蛋白16(outer membrane proteins 16,Omp16)基因并对其进行原核表达,试验根据GenBank中羊布鲁氏菌M5-90株外膜蛋白Omp16基因序列(登录号:JF918760.1)设计1对引物,从布鲁氏菌基因组中扩增出大小约为507bp的目的基因片段,凝胶回收纯化目的片段,连接入pMD20-T质粒,转化E.coli DH5α并测序,测序正确后再亚克隆入pET-28a(+)表达载体,构建重组质粒pET-Omp16,转化入E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导其表达,最后用Western blotting分析方法鉴定诱导得到的蛋白。结果表明,成功构建了pET-Omp16原核表达载体,并在E.coli BL21中表达了Omp16基因,诱导得到的蛋白经鉴定与目的蛋白大小一致,证明成功表达了目的基因。
- 贾晓晓焦寒伟郭莳雨史巧芸荣辉张珈宁朱华培杜丽成鹰王凤阳
- 关键词：布鲁氏菌克隆原核表达
- 五指山小型猪PDCD10 cDNA的克隆及生物信息学分析
- 2013年
- 为了克隆五指山小型猪程序性死亡因子10(PDCD10)cDNA基因并进行生物信息学分析,试验以构建的五指山小型猪外周血白细胞cDNA文库为材料,采用菌落PCR的方法,克隆得到PDCD10全长cDNA序列,运用生物信息学软件分析其核苷酸序列并预测其编码蛋白的理化性质及二级结构等。结果表明:经比对分析发现,五指山小型猪PDCD10基因的核苷酸序列及其氨基酸序列与人、小鼠、牛、鸡、非洲爪蟾、斑马鱼、黑腹果蝇等具有较高的相似性。生物信息学分析结果表明,该cDNA序列全长1 250 bp,在序列3'末端有终止信号AATAAA。含636 bp(184～819 nt)的开放阅读框,编码212个氨基酸。该蛋白理论等电点(PI)及分子质量分别为7.80和24 701.57 u。
- 杜丽荣辉张珈宁侯冠彧周汉林郭莳雨贾晓哓史巧芸王凤阳
- 关键词：五指山小型猪CDNA文库克隆
- 五指山小型猪DAZAP2cDNA的克隆及其生物信息学分析
- 2013年
- 为了克隆五指山小型猪DAZ相关蛋白2(DAZAP2)cDNA全长并进行生物信息学分析,试验以构建的五指山小型猪外周血白细胞cDNA文库为材料,采用菌落PCR方法克隆得到DAZAP2全长cDNA序列,并运用生物信息学软件对其核苷酸序列进行分析,预测其编码蛋白的理化性质及二级结构等。结果表明:五指山小型猪DAZAP2基因的核苷酸序列及其氨基酸序列与人、苏门达腊猩猩、斑马鱼、非洲爪蟾、牛、褐家鼠等动物具有很高的相似性。DAZAP2 cDNA全长943 bp,5'非翻译区长69 bp,3'非翻译区长367 bp,含有1个完整的开放阅读框,编码168个氨基酸。该蛋白的分子质量为17 311 ku,等电点为7.48。
- 杜丽荣辉张珈宁侯冠彧周汉林郭莳雨贾晓哓史巧芸王凤阳
- 关键词：五指山小型猪CDNA文库克隆
- 布鲁菌Omp31基因的克隆、表达及其蛋白的生物信息学分析
- 2013年
- 为了进一步研究Omp31蛋白的功能,试验利用DNAMan软件设计上、下游引物,通过PCR技术从马耳他布鲁菌M5-90株中克隆获得Omp31基因,构建原核表达重组质粒pET28a-Omp31,并转化E.coli BL21(DE3)感受态;再以IPTG诱导重组蛋白表达,进行SDS-PAGE和Western-blot检测,并运用生物信息学软件对所获得的核苷酸序列进行分析。结果表明:成功克隆了马耳他布鲁菌外膜蛋白Omp31基因,并构建出重组质粒pET28a-Omp31;经IPTG诱导,得到与预期大小相符的目的蛋白;生物信息学分析发现,Omp31蛋白核苷酸序列包括1个723 bp的开放读码框,编码240个氨基酸;该蛋白二级结构中存在大量无规则卷曲和少量α螺旋。
- 郭莳雨成鹰贾晓晓史巧芸荣辉张珈宁朱华培杜丽焦寒伟王凤阳
- 关键词：克隆原核表达生物信息学分析
