国家自然科学基金(81271837)
- 作品数：12 被引量：16H指数：3
- 相关作者：王林定汪小五陈伟曾宪聪方圆更多>>
- 相关机构：安徽医科大学安徽医科大学第一附属医院安庆市第一人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省高校省级自然科学研究项目安徽省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 卡波肉瘤相关疱疹病毒细胞抗原片的制备
- 2020年
- 目的成功制备了卡波肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)的细胞抗原片,并验证其有效性,为检测KSHV血清标本提供了一种可行的办法。方法培养了能够稳定表达卡波肉瘤相关疱疹病毒核相关抗原(LANA)的BCBL-1细胞。BCBL-1细胞是感染过KSHV并且细胞基因组中包含KSHV基因的细胞。待细胞生长活力旺盛且状态良好时,收集细胞并用4%的多聚甲醛固定到预先处理好的抗原片上,完成封闭、待测血清的孵育和荧光二抗的孵育后,通过免疫荧光显微镜观察检测结果。结果通过免疫荧光技术发现,感染过KSHV的患者血清样本能观察到荧光标记的二抗激发的荧光,而未感染过KSHV的标本则没有观察到荧光标记的二抗激发的荧光。结论成功制备了能用于检测血清的卡波肉瘤相关疱疹病毒的细胞抗原片,为进一步研究卡波肉瘤相关疱疹病毒的流行病学提供方法。
- 文志周畅华玮董凯旋叶磊郑豪徐涵王林定
- 关键词：LANA免疫荧光
- HCMV重组嵌合抗原表达质粒构建及免疫反应的初步鉴定
- 2014年
- 目的选用人巨细胞病毒(HCMV)抗原性强且亲水性较高片段构建融合抗原表达质粒,诱导其表达,纯化目的蛋白;并初步鉴定其免疫反应性。方法通过Protean软件分析了HCMV UL32、UL44、UL83序列,设计合理引物;各基因片段用Overlap方法连接,并引入BglⅡ、BamHⅠ酶切位点,使之可通过酶切与质粒pQE-80L连接。重组质粒转化入感受态BL21(DE3)菌株,经PCR、酶切鉴定目的基因后再诱导、表达、纯化,获得目的蛋白,采用Western blot法检测免疫反应性。结果诱导后的重组菌pQE80-L-UL32-UL44-UL83经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)证实蛋白表达在包涵体。纯化后获得大小约为52 ku的目的蛋白,采用Western blot法检测证实重组嵌合抗原能与HCMV阳性血清有反应。结论构建了重组嵌合抗原表达质粒,并诱导、表达、纯化获得目的蛋白。Western blot法鉴定嵌合抗原是HCMV特异性抗原且有免疫反应性。
- 曾宪聪汪小五陈伟王林定
- 关键词：人巨细胞病毒免疫反应性
- 肺炎支原体P116基因FP2片段的免疫优势和细胞黏附活性被引量：2
- 2021年
- 目的通过对肺炎支原体P116基因FP2段的453 bp片段进行了克隆表达,探讨肺炎支原体P116蛋白对A549细胞的黏附性。方法肺炎支原体感染者血清和肺炎支原体抗体用Western blot和ELISA检测纯化的P116蛋白片段的免疫原性及效价。P116-FP2多克隆抗体和A549细胞黏附试验用免疫荧光评价肺炎支原体的黏附、黏附抑制。结果 P116-FP2蛋白具有免疫原性,用该蛋白构建的ELISA方法具有较高的敏感性和特异性。制备的P116-FP2抗体可阻断肺炎支原体黏附A549细胞。随着多克隆抗体效价的增加,肺炎支原体对A549细胞的黏附率明显降低。结论初步证明P116-FP2蛋白具有免疫反应性。P116-FP2多克隆抗体能够抑制肺炎支原体对A549细胞的黏附。
- 林康文志周畅李文丽吴焕武刘丹艳朱玉林王林定
- 关键词：肺炎支原体A549细胞多克隆抗体
- 安徽省安庆地区卡波肉瘤相关疱疹病毒感染的危险因素分析被引量：3
- 2014年
- 目的探讨安徽省安庆地区卡波肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)在普通人群中的感染情况,并初步分析KSHV感染的危险因子。方法选择KSHV ORF65、ORF73和K8.1编码的病毒蛋白为抗原,采用酶联免疫法对1 006份普通健康人群血清进行KSHV抗体检测。结果在检测的1 006份血样中,KSHV抗体的总阳性率为5.3%,其中男性为5.6%,女性为5.5%。KSHV感染率与梅毒感染有显著相关性,但是其与年龄、性别、血型及乙肝五项间无明显相关性。结论中国安徽安庆地区的普通健康人群KSHV的感染率较低,其中KSHV的感染率与性病梅毒感染具有显著相关性。
- 段强张莹曾宪聪汪小五吴悦杜爱能刘璐璐陈振刘淑均李进王林定
- 关键词：血清阳性率
- KSHV K15蛋白多克隆抗体的制备及其初步鉴定
- 2016年
- 目的制备卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)K15蛋白多克隆抗体,并将其应用于细胞内K15蛋白的检测。方法选择K15基因第8个外显子(K15P_(ex8))序列做为模板,构建K15P_(ex8)的表达载体p QE-80L-K15P_(ex8)。诱导重组菌蛋白表达,免疫新西兰兔,制备抗K15P_(ex8)多克隆抗体,并用间接ELISA法测定抗体效价。将p FJ和p FJ-K15P两种重组质粒分别转入HEK 293T细胞,用Western blot法检测抗K15P_(ex8)多克隆抗体对K15P-Flag蛋白的识别。结果由K15P_(ex8)制备的抗K15P_(ex8)多克隆抗体效价大于1∶6 400,能特异性识别重组质粒p FJ-K15P转染293T细胞产生的K15P-Flag融合蛋白。结论初步证明K15P_(ex8)蛋白有免疫反应性,该多克隆抗体可用于重组的K15P-Flag融合蛋白的检测。
- 陈伟方圆汪小五许常青朱晨辰杨宇张龙龙王林定
- 关键词：多克隆抗体
- 甘肃省敦煌地区普通人群卡波肉瘤相关疱疹病毒感染的血清学分析被引量：5
- 2017年
- 目的研究卡波肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)在甘肃敦煌地区普通人群中的血清阳性率,并分析KSHV感染的危险因素。方法随机收集1 000例敦煌地区普通人群血清,以KSHV 3个基因片段orf65、orf73、orf k8.1编码蛋白为抗原,间接ELISA检测样本中KSHV抗体,SPSS软件分析危险因素。结果 1 000份血清中,KSHV抗体总阳性率为19%,男性阳性率(22.9%)高于女性(16.6%)(P=0.016);KSHV感染与梅毒螺旋体(P=0.004)和丙肝病毒(P=0.027)感染间有相关性,而与年龄、乙肝五项无关。多因素Logistic回归分析显示梅毒螺旋体感染的OR(95%CI)为10.142(1.920~53.577)。结论甘肃敦煌地区普通人群中KSHV的感染率较高,且与性别有关;梅毒螺旋体感染是该地区KSHV感染最重要的独立危险因素。
- 方圆许常青周畅陈伟王林定
- 关键词：血清阳性率
- 肺炎支原体P1蛋白的制备及其应用的初步研究被引量：2
- 2014年
- 目的研究肺炎支原体(MP)特异性抗原免疫反应性及检测合肥地区138份儿童血清样本感染MP的情况,并初步分析其危险因素。方法构建含r P1-513基因的克隆和表达质粒分别命名为T-r P1-513和PQE-80L-r P1-513。诱导PQE-80L-r P1-513重组菌蛋白表达。Western blot法检测其免疫反应性和ELISA法筛选血清样本感染MP的阳性标本。结果 Western blot法检测约30 ku的r P1-513蛋白有免疫反应性。ELISA法筛选出34份阳性血清,同时用商业MP ELISA试剂盒检测出24份阳性血清,两种P1蛋白作为抗原ELISA检测法检出率分别为24.6%和17.4%,且两个检出率差异有统计学意义(P<0.05)。MP感染与C-反应蛋白有显著相关性,但与性别、年龄、白细胞无相关性。结论初步证明r P1-513蛋白具有免疫反应性,且以此蛋白构建的ELISA法有较高的灵敏度和特异性,为临床诊断MP提供一定的帮助。
- 汪小五曾宪聪陈伟王林定
- 关键词：肺炎支原体儿童
- 安徽蚌埠地区卡波氏肉瘤相关疱疹病毒的血清阳性率研究被引量：6
- 2013年
- 目的研究安徽蚌埠地区卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)在普通人群中的感染情况,并初步分析KSHV感染的危险因子。方法选择KSHV ORF65、ORF73和K8.1编码的病毒蛋白为抗原,采用酶联免疫法对1 008份普通人群血清进行了KSHV抗体检测。结果在检测的1 008份血样中,KSHV抗体的总阳性率为4.3%,其中男为3.9%,女为4.6%。统计学分析结果显示,KSHV感染率没有性别差异,在年龄上也基本无差异。结论在中国安徽北部地区的普通人群KSHV的感染率较低,且KSHV的感染与年龄及性别之间无明显相关性。
- 张莹曾宪聪汪小五刘淑均李进王林定
- 关键词：血清阳性率
- KSHV信号膜蛋白K15的致病机制被引量：1
- 2022年
- 人类疱疹病毒-8(HHV-8)是卡波西肉瘤(KS)的致病因子,又被称为卡波西肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)。KSHV编码的信号膜蛋白K15通过与宿主细胞蛋白的相互作用激活多种细胞内信号通路,诱导血管生成和炎症反应。对K15蛋白的基本作用机制,包括其直接和间接介导的细胞信号通路的研究有助于深入了解K15蛋白在KS发病机制中的潜在作用,也对该病的靶向治疗有重要的参考价值。
- 王心琛桂思语华玮董凯旋(综述)王林定
- 关键词：发病机制细胞信号通路
- KSHV K15P及其突变体的慢病毒包装与稳定细胞株的筛选及其对内皮细胞增殖迁移的影响被引量：1
- 2019年
- 目的包装包含卡波肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)K15P及其突变体K15P(YF)基因的慢病毒颗粒,并对此基因在EA.hy926细胞内稳定表达进行研究。方法通过PCR方法扩增获得KSHV K15P、K15P(YF)基因片段,使用限制性内切酶Not I与BamH I酶切和TA克隆法构建T载体与慢病毒表达载体pHAGE-CMV-MCS-K15P-Puro、pHAGE-CMV-MCS-K15P(YF)-Puro,通过lip2000将构建好的慢病毒表达载体与两种辅助包装质粒PSPAX2和pMD2.g共转染HEK 293T细胞,48 h后收集慢病毒。慢病毒感染EA.hy926细胞并通过嘌呤霉素筛选稳定表达株,Western blot检测K15P与K15P(YF)蛋白的表达。Transwell与CCK8实验检测K15P对内皮细胞的增殖迁移影响。结果成功构建慢病毒表达载体,筛选出稳定表达K15P、K15P(YF)蛋白的EA.hy926细胞。在EA.hy926细胞Transwell迁移实验中,与空载体组和K15P突变体组(0.98±0.23)比较,K15P组(2.25±0.15)的EA.hy926细胞的迁移能力明显增强(P<0.01),三组细胞迁移量差异有统计学意义(F=113.5,P<0.01);CCK8增殖活性实验中,与空载体组和K15P(YF)组(109.23±12.58)比较,K15P组(138.69±7.47)的EA.hy926细胞的增殖能力明显增强(P<0.01),三组细胞增殖活性差异有统计学意义(F=40.78,P<0.01)。结论K15P蛋白增强了内皮细胞的增殖与迁移,而K15P(YF)突变体的促进细胞增殖迁移能力减弱,提示K15P蛋白可能在KS的发生发展中参与重要作用。
- 周畅许常青许方玮方圆陈伟文志林康王林定
- 关键词：慢病毒
