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国家高技术研究发展计划(2006AA02Z158)

作品数:7 被引量:14H指数:2
相关作者:沈关心朱慧芬雷萍吴砂袁晓梅更多>>
相关机构:华中科技大学江苏省寄生虫病防治研究所陕西省人民医院更多>>
发文基金:国家高技术研究发展计划国家教育部博士点基金湖北省“十一五”科技攻关项目更多>>
相关领域:医药卫生生物学更多>>

文献类型

  • 6篇中文期刊文章

领域

  • 6篇医药卫生

主题

  • 4篇蛋白
  • 4篇受体
  • 3篇单链
  • 3篇单链抗体
  • 3篇融合蛋白
  • 3篇铁蛋白
  • 3篇转铁蛋白
  • 3篇转铁蛋白受体
  • 3篇细胞
  • 3篇抗体
  • 2篇趋化
  • 2篇趋化因子
  • 2篇淋巴
  • 2篇淋巴组织
  • 2篇SCFV
  • 2篇TFR
  • 2篇次级淋巴组织...
  • 1篇抑制肿瘤
  • 1篇增生
  • 1篇双价抗体

机构

  • 5篇华中科技大学
  • 1篇陕西省人民医...
  • 1篇江苏省寄生虫...

作者

  • 5篇朱慧芬
  • 5篇沈关心
  • 3篇雷萍
  • 2篇袁晓梅
  • 2篇刘静
  • 2篇沈昕
  • 2篇吴砂
  • 1篇朱荫昌
  • 1篇王国斌
  • 1篇曹利民
  • 1篇赵晓蓉
  • 1篇潘兴飞
  • 1篇黄宇
  • 1篇李文涵
  • 1篇肖代雯
  • 1篇赵晓萍
  • 1篇司进
  • 1篇代维
  • 1篇黄韬
  • 1篇叶庆

传媒

  • 3篇中国免疫学杂...
  • 1篇中华微生物学...
  • 1篇基础医学与临...
  • 1篇Journa...

年份

  • 2篇2009
  • 2篇2008
  • 2篇2007
7 条 记 录,以下是 1-6
排序方式:
抗TfR-scFv-EGFP融合蛋白的构建与表达
2009年
目的:抗转铁蛋白受体单链抗体(TfR-scFv)-EGFP融合蛋白真核表达载体的构建与表达。方法:设计两对引物引入连接肽(Gly4Ser)3以及酶切位点HindⅢ和BamHⅠ,采用重叠延伸PCR扩增与构建具有前导肽的L-VH-Linker-VL单链抗体基因,亚克隆至pEGFP-N1,转染COS-7细胞,倒置相差荧光显微镜下观察荧光蛋白表达,流式细胞术(FCM)检测细胞分泌上清与乳腺癌细胞MCF-7及黑色素瘤细胞A375结合活性。结果:测序表明获得了正确的L-VH-Linker-VL单链抗体基因序列;亚克隆至pEGFP-N1后,表达载体转染COS-7细胞,经荧光显微镜观察转染细胞,及通过流式细胞术(FCM)检测细胞分泌上清,证实抗TfR-scFv-EGFP融合蛋白在转染细胞中分泌性表达,并能够与天然高表达TfR的细胞特异性结合。结论:抗TfR-scFv-EGFP融合蛋白真核表达载体构建成功,其表达产物具有与TfR阳性细胞结合的活性。
代维刘静黄鹤文雪袁晓梅雷萍朱慧芬沈关心
关键词:转铁蛋白受体单链抗体重叠延伸PCR
抗TfR scFv-SLC融合蛋白的构建、表达与鉴定
2009年
目的:构建、表达和鉴定抗转铁蛋白受体(TfR)单链抗体(scFv)-次级淋巴组织趋化因子(SLC)融合蛋白。方法:以pDsRed2-N1-CCL21为模板,设计引物,采用PCR扩增得到两端有EcoRⅠ、NotⅠ酶切位点的SLC基因。以EcoRⅠ、NotⅠ双酶切pET28a+scFv载体和PCR产物,连接后转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导TfRscFv-SLC融合蛋白的表达。SDS-PAGE、Western blot分析TfR scFv-SLC的表达特性。FCM测定scFv-SLC与肿瘤细胞结合活性。结果:EcoRⅠ和NotⅠ双酶切鉴定可见约350bp的小片段,与SLC的理论值相符,DNA测序结果表明含有TfRscFv-Linker-SLC序列,表明pET28a+scFv-SLC融合基因表达载体构建成功。IPTG诱导产物经SDS-PAGE分析可见约41kD的条带,符合scFv-SLC理论值。FCM结果显示TfR scFv-SLC可与MCF-7、HepG2细胞结合,且结合的阳性率较TfRscFv有所提高。结论:成功构建与表达scFv-SLC融合蛋白,且能与MCF7、HepG2等细胞特异性结合。
潘兴飞刘静沈昕许海霞姚欣欣陈广生胡军朱慧芬雷萍沈关心
关键词:转铁蛋白受体次级淋巴组织趋化因子融合蛋白
次级淋巴组织趋化因子浓度梯度抑制肿瘤细胞免疫逃逸被引量:4
2007年
目的探讨人次级淋巴组织趋化因子(SLC)浓度梯度对肿瘤细胞免疫逃逸的影响。方法根据SLC浓度梯度,实验分6组;流式细胞术检测肿瘤细胞HLA-Ⅰ类分子的表达、肿瘤细胞凋亡,Western blot检测肿瘤细胞胞内BCL-2表达,ELISA检测肿瘤细胞培养上清中生长转化因子β(TGF-β)水平。结果在一定浓度范围内,随SLC浓度增加,肿瘤细胞的HLA-Ⅰ类分子表达增高,肿瘤细胞凋亡增多;BCL-2表达增高,而肿瘤细胞TGF-β分泌水平降低。结论SLC具有抑制肿瘤细胞免疫逃逸的作用。
吴砂袁晓梅朱慧芬沈关心
关键词:次级淋巴组织趋化因子肿瘤细胞免疫逃逸
ASGPR单链抗体-蜂毒肽融合蛋白的构建及其溶红细胞效应被引量:1
2007年
去唾液酸糖蛋白受体(asialoglycoprotein receptor,ASGPR)是一种异源低聚物的内吞受体,定位于肝脏实质细胞朝向窦状隙一侧的细胞膜表面,在介导肝脏疾病靶向治疗方面具有潜在应用价值。我们在获得抗ASGPR单链抗体CI的基础上,
曹利民朱慧芬赵晓蓉叶庆吴砂李文涵赵晓萍朱荫昌司进沈关心
关键词:单链抗体细胞效应融合蛋白去唾液酸糖蛋白受体蜂毒肽RECEPTOR
Antisense RNA of Survivin Gene Inhibits the Proliferation of Leukemia Cells and Sensitizes Leukemia Cell Line to Taxol-induced Apoptosis被引量:2
2008年
The effects of survivin antisense RNA on proliferation of leukemia cell line HL-60 and taxol-induced chemotherapy was explored. A cDNA fragment of survivin obtained by RT-PCR was inserted into a plamid vector named pcDNA3 in the reverse direction. The vector encoding antisense RNA of survivin was confirmed by restriction enzyme digestion and DNA sequencing. The recombi-nant plasmid was delivered into HL-60 cells by electroporation. Growth curves were plotted based on cell counting. Trypan blue dye exclusion assay and MTT assay were carried out after the cells were incubated with taxol. DNA gel electrophoresis and nuclear staining were performed for cell apoptosis assay. The correct construction of the recombinant plasmid has been identified by restriction enzyme digestion and DNA sequencing. A stable down-regulation has been achieved in HL-60 SVVas cells after G418 selection. Compared to HL-60 cells, the proliferation of HL-60 SVVas cells was signifi-cantly inhibited (P<0.05). Cytotoxicity assays indicated that IC50 of HL-60 SVVas for taxol was rela-tively lower than controls (P<0.01). Apoptosis assays revealed that taxol-induced apoptosis was de-tected in HL-60 SVVas cells incubated with 50 ng/ml taxol for 12 h, while in HL-60 cells incubated with 100 ng/ml taxol for 72 h. It was suggested that Survivin antisense RNA could inhibit the prolif-eration of HL-60 cells and enhance taxol-induced apoptosis in HL-60 cells, which may lay an ex-perimental foundation for further research on gene therapy in leukemia.
李文涵王晓娟雷萍叶庆朱慧芬张悦邵静芳杨敬沈关心
关键词:细胞增生
抗转铁蛋白受体双价抗体的构建、表达及鉴定被引量:2
2008年
目的:抗转铁蛋白受体(TfR)双价抗体(bsFv)构建、表达及其与细胞结合的活性鉴定。方法:以抗TfR的单链抗体(scFv)为模板,设计引物引入中间连接肽(G4S)及酶切位点AscI,通过PCR方法扩增两条scFv片段,将其连接并克隆至原核表达载体pAB1,转化大肠杆菌TG1,阳性菌经IPTG诱导表达,FCM检测bsFv与K562,HepG2肿瘤细胞结合的活性及特异性。结果:酶切鉴定及DNA测序证明该bsFv构建成功;SDS-PAGE、Western blot鉴定表明表达蛋白分子量与bsFv理论值一致;FCM结果证明bsFv可与K562,HepG2肿瘤细胞特异性结合,且结合的阳性率较scFv有所提高。结论:成功构建了抗转TfR的bsFv,且能与K562,HepG2肿瘤细胞特异性结合。
肖代雯朱慧芬沈昕邢薇黄宇雷萍黄韬王国斌沈关心
关键词:转铁蛋白受体单链抗体双价抗体
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