国家自然科学基金(81271846)
- 作品数：6 被引量：14H指数：2
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- 相关机构：解放军医学院解放军第三〇二医院解放军第302医院更多>>
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- 化学发光法检测HCVIgG抗体方法的建立和初步应用被引量：3
- 2015年
- 目的利用化学发光原理建立一种检On,0HCVIgG抗体的方法，用于HCV感染的检测并为试剂盒研制奠定基础。方法方法学建立。2013年1月至6月完全随机选取的解放军第三。二医院的198份丙型肝炎患者和222份献血员的血清样本。采用间接ELISA方法，用基因工程表达的丙型肝炎病毒（HCV）-NS3、HCV-Core抗原包被化学发光微孔板，辣根过氧化物酶标记抗人IgG抗体，初步建立HCVIgG抗体的化学发光检测方法，进一步与已批准的丙型肝炎病毒抗体检测试剂（化学发光法）同时检测并进行结果对比。结果自制试剂与对照试剂的阳性符合率为99．0％（196／198），阴性符合率为98．2％（218／222），总符合率为98．6％（414／420）。用自制试剂同时检测同1份HCV阳性血清重复10次，其变异系数〈10％。结论初步建立了HCVIgG抗体的化学发光检测方法，此法特异性强、敏感性高，适用于献血员的筛选和临床HCV感染的检测及流行病学调查。
- 侯俊胡燕邬顺全白冰珂姜棋予史素娟王保君欧卫军貌盼勇
- 关键词：丙型肝炎抗体免疫球蛋白G
- 三种不同转染方法拯救病毒的比较研究
- 2013年
- 目的比较3种不同转染方法，探索最佳的拯救病毒策略。方法3种转染方法包括：①含T7RNA聚合酶启动子的全长肠道病毒71（EV71）感染性质粒（P—EV71）和T7RNA聚合酶真核表达质粒（VR-1a）共转染Vero细胞；②含T7RNA聚合酶启动子的EV71全长基因片段（PCR产物）与VR-1a共转染Vero细胞；③利用体外转录技术得到EV71病毒全长RNA，直接转染Vero细胞。分别观察3种方法转染后产生细胞病变效应（CPE）时间及病变情况，用RT—PCR扩增拯救病毒核酸，测序验证其正确性，用蛋白印迹方法检测拯救病毒抗原。结果3种方法均可成功转染Vero细胞得到拯救病毒，三种转染方法转染效果比较：方法③优于②、②优于①。结论三种转染方法均可成功拯救EV71病毒，以病毒RNA直接转染效果最好。
- 侯俊罗生栋胡燕沈宏辉白冰珂柴燕涛王志杰貌盼勇
- 关键词：RNA肠道病毒属转染
- 包涵体蛋白3种纯化方法的比较被引量：9
- 2016年
- 目的比较3种纯化方法对表达的肠道病毒71型(EV71)VP1区包涵体蛋白的纯化效果。方法分别用差速离心法、固定化金属离子亲和层析(IMAC)及不同浓度饱和硫酸氨沉淀法3种包涵体蛋白纯化法对原核表达EV71 VP1包涵体蛋白进行纯化,蛋白垂直(SDS-PAGE)电泳检测蛋白纯化效果。结果差速离心法可以进行大批量表达蛋白纯化,纯化效果较好,但存在蛋白损失较多,且纯化蛋白不能反复冻融的问题。IMAC柱纯化获得的蛋白纯度较高,且蛋白性状稳定,但仍存在纯化蛋白量较少的问题。饱和硫酸氨沉淀纯化法无法获得纯度较高的包涵体蛋白。结论差速离心法可用于大批量蛋白纯化,纯化蛋白应避免反复冻融,可小量分装冻存后备用。IMAC柱纯化可获得纯度较高且性状相对稳定的纯化蛋白,其在相应抗体检测方法学的建立及疫苗制备方面均有广泛用途。饱和硫酸氨法只适用于表达蛋白的初步浓缩纯化。
- 柴燕涛姜棋予谢国明胡燕邬顺全杨锐创貌盼勇侯俊
- 关键词：包涵体蛋白蛋白纯化
- 肠道病毒71型（EV71）AH3株感染性克隆的构建与鉴定
- 2014年
- 目的 构建肠道病毒71型（Enterovirus71,EV71） AH3株的全基因序列感染性克隆.方法 通过分段扩增和酶切连接将EV71全基因组cDNA片段逐步克隆入PWSK29载体,构建含全病毒基因组序列的重组质粒.转染Vero细胞后,获得拯救病毒.经RT-PCR、酶切、测序、间接免疫荧光（IFA）等方法进行鉴定.结果 酶切鉴定结果与预期一致,序列分析显示为EV71基因；其转染Vero细胞后,可观察到典型的细胞病变；所获得的拯救子代病毒滴度（TCID50）为107.5；IFA检测可见感染细胞出现绿色荧光.结论 成功构建EV71全基因序列感染性克隆,为病毒致病机理及减毒疫苗的研究奠定基础.
- 侯俊李瑞生胡燕罗声栋白冰珂沈宏辉王志杰柴燕涛杨瑞创貌盼勇
- 关键词：肠道病毒属
- 化学发光法检测抗HEV IgG试剂盒的研制和评价被引量：1
- 2015年
- 目的研制化学发光法检测血清抗戊型肝炎病毒(HEV)IgG试剂盒,并评价其临床应用。方法以HEV重组抗原包被化学发光微孔板,辣根过氧化物酶(HRP)标记的单克隆抗人IgG为二抗,鲁米诺化学发光反应体系作为底物。通过检测抗HEV抗体国家参考品评价其灵敏度、特异性、精密性等技术指标,并与已商品化的化学发光法抗HEVIgG检测试剂盒对比检测1012份临床血清样本。结果3个批次的试剂盒的灵敏度、特异性、精密性、稳定性均达到国家标准。对1012例临床血清样本检测,两种试剂盒检测阳性符合率为97.4%,阴性符合率为99.4%,总符合率达98.4%。结论成功研制出化学发光法检测抗HEVIgG试剂盒,该试剂盒敏感性高、特异性强、操作简便,适用于HEV感染的临床诊断及流行病学调查。
- 张敏娜胡燕侯俊高蓉史素娟王保君欧卫军杨永平貌盼勇
- 关键词：化学发光法戊型肝炎抗体
- 1株快速增殖的HAV分离株基因型分析被引量：2
- 2015年
- 目的确定1株快速增殖HAV临床分离株HAV302的基因型及其特点。方法提取培养病毒RNA模板,通过反转录-聚合酶链反应技术扩增该病毒编码区基因并行序列测定,随后利用序列分析软件对其进行序列分析和基因型比对。结果 HAV302株VP1/2A区基因序列与Gen Bank中收录的HAVⅠ型中的ⅠB亚型MBB株核苷酸同源性最高(99.4%)。进化树分析显示,HAV302株与MBB株亲缘最近。与MBB株相比,非结构蛋白编码区中的2B和2C区在整个病毒的编码区中变异最大。结论 HAV302株属于HAVⅠ型中的ⅠB亚型,其2B和2C区的变异可能是导致病毒快速增殖的原因之一。
- 白冰珂胡燕邬顺全姜棋予杨瑞创柴燕涛李瑞生侯俊
- 关键词：甲型肝炎病毒基因型
